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  생화학실험 | 단백질 분리정제 및 기능분석 - buffer 만들기 TIP 1M의 Tris-HCl (pH7.4), NaCl, MgSO4, Stock solution 을 제조한 후 다양한 NaCl 농도의 elution buffer 를 만든다. DEAE sepharose anion exchange chromatography 이온-교환 크로마토그래피(ion-exchange chromatography)법은 주어진 pH에서 단백질이 가지는 알짜 전하(net electric charge)의 하전성과 전하량의 차이에 의해 분리하는 방법이다. 관 속의 기질은 합성 중합체(수지,resin)로서 전하를 띤 기를 가지고 있는데; 양이온 기를 가지는 경우 양이온 교환체(cation exchanger)라고 부르며, 음이온 기를 가지는 경우 음이온 교환체(anion exchanger)라고 부른다.. Biology/생화학 2023. 4. 11.

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  생명과학실험 | 단백질 분리정제 및 기능분석 TIP 1. DEAE Sepharoge anion exchange chromatography를 통한 단백질 분리 2. Column chromatography를 이용하여 Alkaline phosphatase를 분리한다. AP의 정제과정 1. AP가 outer membrane과 inner membrane 사이에 존재하는 경우, osmotic shock을 주어 outer membrane만 깨지게 한다. 2. Spheroplast 상태일때 centrifuge를 하면 supernatant와 pelet으로 분리된다. (이때, AP는 sup. 에 존재한다) 3. AP의 크기를 이용하여 dialysis를 하여 size 별로 분리한다. Bovine의 경우는 homodimer상태로 kDa=160-180 이다. 4. Bov.. Biology/생명 과학 | 공학 2022. 11. 2.

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  생명과학실험 | Tris-HCl buffer 만들기 TIP 1. Column chromatography의 준비로서의 buffer만들기 2. 1M의 Tris-HCl (pH7.4), NaCl, MgSO4 Stock solution을 제조한 후 다양한 NaCl 농도의 elution buffer를 만든다. Buffer solution Buffer solutions는 적은 양의 산이나 염기를 첨가하거나 희석시킬 경우, 용액의 H+와 OH-의 농도 변화를 줄이기 위해 사용하는 용액이다. Buffer solutions는 약산과 그것의 짝염기로 이루어진 것이 일반적이며, 약염기와 그것의 짝산으로 이루어진 경우는 전자보다 적다. 용액의 pH변화에 저항하는 buffer solutions의 기능은 앞서 말한 약산과 그 짝염기의 평형에 의한 결과로, Le Chatelier의 .. Biology/생명 과학 | 공학 2020. 9. 7.

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  유기화학실험 | 액체-고체 크로마토그래피 - 니트로화 반응 TIP 1. 액체-고체 크로마토그래피를 이용하여 Nitro 반응을 알아본다. 2. Rf 값을 통하여 반응전과 반응후의 변화를 알아본다. Liquid-Solid Chromatography 정지상은 관 안에 충진된 대단히 작은 고체 입자들로 만들어져 있고 이동상은 관을 통해 스며들며 고체 입자들의 표면을 통과하는 액체이다. 고쳐 표면은 정전기적 힘과 반데르발스의 힘 결과로 인해 성질이 다른 분자들의 얇은 층을 흡착한다. 흡착의 세기는 고체 표면의 흡착 특성에 따라 다르기 때문에 적절히 선택된 고체는 어떤 혼합물 중의 한 성분을 선택적으로 흡착할 수도 있다. 마지막 장안에서 사용된 선택된 흡착의 중요한 예는 다량의 극성 불순물을 제거하기 위해서 결정화에서 숯을 사용하는 것이다. 묽은 용액으로부터 흡착을 지배하.. Chemistry/유기화학 2019. 11. 6.