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  일반생물학실험 | cDNA 합성 및 Real-time PCR을 통한 유전자 발현 분석 TIP 1. 세포들은 기본적으로 주위 환경에 적응하기 위해 필요한 유전자의 발현을 증가시키고, 필요 없는 유전자의 발현은 억제시키는 방법으로 유전자 발현을 조절한다. 2. 동일한 세포를 서로 다른 영양 환경의 배지에서 배양한 후 유전자 발현을 비교하기 위해 cDNA를 합성하고, Real-time PCR을 통해 유전자 발현의 차이를 직접 확인해 보고자 한다. cDNA는 mRNA를 역전사 시켜 만든 DNA 염기서열로, exon만 존재하는 성숙 mRNA에 상보적인 DNA이다. cDNA를 통해 발현된 DNA 염기서열이 무엇인지 파악할 수 있다. Real-time PCR은 PCR 과정이 진행됨과 동시에 증폭되는 DNA 표적서열의 양을 측정하는 실험방법이다. PCR은 중합효소연쇄반응으로, DNA의 표적서열을 선택적.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 2. 14.

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  분자생물학실험 | Real–Time PCR TIP real-time PCR의 기본원리를 이해하고, 직접 real-time PCR을 수행하여, DNA를 많은 양으로 증폭시킨다. DNA polymerase (DNA 중합 효소) PCR의 반응은 DNA 중합효소에 연관되어 있으며 좋은 효소를 선택하는 것이 좋은 결과를 얻기 위해서 중요하다. 낮은 온도에서 나타나는 Taq DNA 중합효소의 활성이 PCR 반응의 특이성에 영향을 미치는 원인 중 하나다. 이러한 경우 primer는 DNA에 비특이적으로 결합하게 되며 비특이적인 산물을 만들어내게 된다. 이러한 문제를 최소화하기 위해서 “hot-start” 기능을 가진 효소를 사용해야 하는데 이 효소는 낮은 온도에서나 초기 DNA denature 과정에서의 Taq의 활성을 억제하게 되어 이러한 비특이적인 산물을.. Biology/분자생물학 2020. 1. 6.