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  생화학실험 | 단백질의 정량분석 TIP Lowry method와 Bradford method를 사용하여 단백질(protein)의 농도를 측정한다. 단백질의 정량 시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정으로 280 ㎚에서 흡광도를 측정하는 방법과 단백질의 농도에 따른 색의 변화를 이용하여 분석하는 방법이 있다. 색의 변화를 이용하는 비색정량분석 (colormetric analysis)에는 Bradford법, Biuret법, Lowry법, Bicinchoninic acid법 등이 있다. 280 ㎚의 파장에서의 흡광도 측정 방법은 tyrosine이나 tryptophan 잔기의 흡광도를 측정하는 방법으로 장점으로는 분석이 빠른 것을 들 수 있으며, 단점으로는 tryptophan의 함량 변화에 따라 흡광도가 틀려지고 같은 파장의.. Biology/생화학 2023. 3. 30.

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  일반생물학실험 | Cell lysis, Bradford Assay TIP Transfection, harvest가 잘 이루어졌는지 알기 위해 cell lysis를 하여 lysate를 얻고 Bradford assay를 통해 protein을 측정한 후 loading sample을 완성한다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) lysis buffer를 계산하여 만든다 2) Deep freezer에 얼려놓은 sample을 가져온다. 3) sample이 어느정도 녹은 후 만들어 놓은 lysis buffer를 140㎕씩 넣는다. 4) Pipetting을 하여 바닥에 붙은 cell을 떨어뜨리고 전부 E-tube에 담는다. 5) E-tube를 약 5초간 vortexing하고 ice에 넣어 10mins 기다린다. 6) Centrifuge (12500rpm, 12mins, 4℃) 7) Pe.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 27.

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  생화학실험 | 단백질 정량 분석 - BCA법 & SDS-PAGE 분석 & Western Blot TIP BCA Method를 이용하여 우유 중의 단백질 함량을 분석하고 SDS-PAGE와 Coomassie Blue 염색을 통해 단백질의 전기영동 결과를 관찰한 것을 바탕으로 Western Blot을 시행하여 membrane에 transfer시켜, 항원-항체 반응을 이용하여 특정한 단백질의 정량 분석과 검출하는 방법을 실험을 통해 숙지한다. 실험 방법 1. 단백질 정량분석-BCA법 1) Sample & stardard 제조 ➀ 우유 속에는 약 5%의 단백질이 들어 있고, 1㎖속의 우유에는 약 50㎎이 들어 있는데, BCA법의 정략정 단백질 양 범위는 20～2000μg/㎖이므로 이를 1/100으로 희석하여 Epp. tube에 담았다. ➁ Albumin Standard Ampules의 농도는 2.0㎎/㎖이기.. Biology/생화학 2020. 6. 7.