반응형 일반생물학실험 | 플라스미드 추출 TIP Mini-prep라 불리는 Alkaline lysis method을 이용하여 Plasmid DNA을 추출한다. Alkaline lysis Alkaline lysis의 기본적인 원리는 세균의 cell wall과 cell membrance을 부수고 DNA만을 분리하는 것이다. 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리해야 한다. 이 둘은 모두 DNA이므로 성질이 비슷하기 때문에 구분하여 분리하기가 쉽지 않다. chromosomal DNA는 분리 과정에서 linear형태가 되고 크기가 상당히 크기 때문에 이런 성질의 차이를 이용하면 분리할 수 있다. 실험 방법 1. Spin Down Bacterial cells 1) Harvesting ① 1.5㎖의 b.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 9. 27. 일반생물학실험 | 플라스미드 DNA 추출 TIP Alkaline lysis (denaturation) method에 대해 알아보고 이 방법을 통해 플라스미드 DNA를 추출해본다. DNA Mini prep이란 말을 쓰는데 prep은 ‘prepartion’의 줄임말로 DNA를 소량으로 추출한다는 의미이다. plasmid를 추출하는 방법으로는 기본적으로 여러가지가 있지만 그 가운데 대표적인 방법으로 alkaline lysis (denaturation) method가 이용되고 있다. 세포내에 DNA는 일반적인 double-helix를 형태를 가지는 반면 plasmid는 동그란 모양인 supercoiled형태를 가짐으로써 pH의 변화에 따라서도 plasmid의 형태 와 구조가 크게 변하지 않는다는 특징을 가지고 있다. plasmid는 주로 vector로.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 9. 26. 미생물생리학실험 | Plasmid Vector 추출 TIP 다양한 vector의 종류 및 쓰임, 추출방법을 익히고, plasmid 추출 kit를 이용하여 직접 plasmid를 추출해본다. Alkaline Lysis 원리 높은 pH의 Alkaline 용액 상태에서 염색체 DNA와 plasmid DNA의 크기 및 topology에 의해 염색체 DNA와 혼합된 상태로부터 plasmid DNA만 분리한다. Alkaline 상태의 Anionic detergent 용액에서 detergent에 의해 세포가 용해된 후 염색체 DNA 와 plasmid DNA 모두 Alkaline 용액에 노출되면 두 형태의 DNA는 모두 변성된다. 이후 산성용액을 혼합하면 염색체 DNA는 크기가 너무 커서 변성 전 정상적인 Topology로 복원되지 못하고 더욱 엉기는 반면 Plasmid.. Biology/미생물학 2022. 9. 24. 이전 1 다음 반응형