반응형 생명과학실험 | Protein Purification과 Electrophoresis(SDS-PAGE) TIP 추출해낸 Protein을 Purification하여 원하는 단백질만을 얻어내는 방법을 알아보고, SDS-PAGE Gel을 이용해 Electrophoresis하여 직접 눈으로 확인한다. 친화성 크로마토그래피 (affinity chromatography) 1) 친화성 크로마토그래피는 단백질과 지지체 위에 결합되어 있는 ligand 사이의 특이한 화학적 상호작용에 기초로 하는 분리 방법 예) 효소-억제제, 항원-항체 반응 2) Ligand 와 단백질 사이의 친화성 결합은 분자의 크기와 모양에 특이적인 결합 (Specific binding) 3) Column 내 정지상에 단백질과 상호작용하는 ligand 를 결합시킨 지지체 사용 4) 친화성 크로마토그래피에서 ligand 를 붙일 때 고체 matrix 에.. Biology/생명 과학 | 공학 2020. 9. 14. 생명과학실험 | Protein purification TIP 가. 미생물을 이용하여 대량 생산하였던 원하는 단백질만을 특이적으로 정제하려고 한다. 나. soluble 상태의 sample protein을 affinity chromatography 방법을 이용해 target protein만 추출한다. Affinity chromatography 효소의 기질 특이성과 같이 선택적으로 분리를 원하는 물질과 반응하는 특성을 가진 물질을 고정상으로 삼아 분리시키는 크로마토그래피이다. 예를 들어 효소와 기질, 항원과 항체, 호르몬과 수용체, 렉틴과 다당류, 핵산의 염기쌍 등의 사이에 작용하는 특이적 상호작용을 이용하여 상호작용물질의 한쪽을 불용성 담체에 공유 결합시킨 것을 크로마토그래피용 고정상으로 하고 다른 쪽을 복잡한 혼합계 중에서 선택적, 그리고 가역적으로 포착하여.. Biology/생명 과학 | 공학 2020. 9. 7. 생화학실험 | Protein Purification & SDS-PAGE TIP Protein Purification을 이해하고 SDS-PAGE 를 이용하여 Protein 을 정제해본다 전기영동 전기영동(electrophoresis)은 이온교환크로마토그래피와 마찬가지로 단백질분자의 전하를 이용한 분리, 분석법이다. 단백질 분자는 보통 등전점 이외의 pH에서는 양 또는 음의 전하를 가지고 있어서 일정한 pH의 완충액 중에서 직류전류를 가하면 양극 또는 음극방향으로 이동한다. 즉 단백질 분자의 전하량, 분자의 크기에 따라 전장 중에서 이동하는 속도가 다른 점을 이용하여 분리, 분석하는 것이다. 단백질을 여과지, 전분이나 agarose와 같은 다당류 gel, polyacrylamide gel 등과 같은 것을 담체로 하여 전기영동하면 단백질은 band를 형성하여 분리되므로 분리, 분.. Biology/생화학 2019. 11. 6. 이전 1 다음 반응형