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  기기분석실험 | Dialysis TIP Dialysis 원리를 알고 튜브 안쪽의 농도와 바깥쪽 농도를 비교해 본다. 그리고 양 쪽의 농도가 같아 지는 시간을 알 수 있을 것이다. 시료중의 buffer를 교환하거나 탈염하기 위한 가장 일반적인 방법이 투석과 겔여과이다. 한외농축의 경우는 용액을 가압해서 일반적으로 물 분자나 저분자를 제거하지만, 투석의 경우는 대단히 얇은 막(20～100㎛) 재생 cellulose제 다공성 막을 이용하여 자연 확산에 의해서 외액과 내액 간에서 저분자의 교환을 행한다. 아래 표에 나타낸 것처럼 3개의 회사로부터 여러 종류의 공경(한계 분자량)이나 여러 size를 가진 투석막이 판매되고 있다. 통상의 단백질에 대하여서는 Visking Celluolse Tubing(Viskase사)의 것도 좋지만, 저분자량의 .. Chemistry/기기분석 2021. 9. 18.

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  생화학실험 | 아미노산의 정성분석과 단백질의 정량 분석 아미노산 (Amino acid) 단백질을 염산과 함께 가열하면 여러 가지 아미노산의 혼합물질이 얻어진다. 이러한 아미노산의 혼합물에서 각각의 아미노산을 분리하는 방법은 Emil Fischer에 의해서 개발되었고, 현재는 최소한 25종이 분리되었다. 결국 단백질은 이러한 아미노산으로 구성되어 있다. 아미노산은 화학적으로 정확하게 표현한다면 아미노알칸산(amino alkanoic acid)이며, 분자구조에 아미노기(-NH2)와 카르복실기(-COOH)를 갖고 있으며, 카르복실기에 대해서 α위치에 아미노기가 결합된 것을 α아미노산(α-amino acid), β위치인 경우는 β아미노산(β-amino acid), γ위치의 경우는 γ아미노산(γ-amino acid)라고 한다. 한편, 단백질을 가수분해하여 생성되는 아.. Biology/생화학 2020. 12. 13.

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  생명과학실험 | Tris-HCl buffer 만들기 TIP 1. Column chromatography의 준비로서의 buffer만들기 2. 1M의 Tris-HCl (pH7.4), NaCl, MgSO4 Stock solution을 제조한 후 다양한 NaCl 농도의 elution buffer를 만든다. Buffer solution Buffer solutions는 적은 양의 산이나 염기를 첨가하거나 희석시킬 경우, 용액의 H+와 OH-의 농도 변화를 줄이기 위해 사용하는 용액이다. Buffer solutions는 약산과 그것의 짝염기로 이루어진 것이 일반적이며, 약염기와 그것의 짝산으로 이루어진 경우는 전자보다 적다. 용액의 pH변화에 저항하는 buffer solutions의 기능은 앞서 말한 약산과 그 짝염기의 평형에 의한 결과로, Le Chatelier의 .. Biology/생명 과학 | 공학 2020. 9. 7.

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  생화학실험 | RNA polymerase 분리 정제 실험 방법 1. 실험 과정 1) Cell lysis ① pellet을 녹인 후 Buffer LB 26㎖ 분주하여 섞는다. ② 잘 섞은 pellet을 ice에 박혀있는 비커에 붓고 stirring하여 6㎖ lysozyme에 분주한 다음, 66㎖ PMSF와 33㎕ leupeptin도 첨가한다. (20min 반응시간 준다.) ③ 20min 후, 3㎖ 0.8% Sodium deoxycloate 첨가하고 20min 반응 시간 준다. ④ 20min 후, 50㎕ PMSF 첨가하고 5.6㎖ 2M Ammonium Sulfate 첨가한다. ⑤ Total volume 56㎖ 까지 Buffer LB를 첨가한다. ⑥ 5.6㎖ 10% PEI를 아주 천천히 넣어주고 20 min 반응시간 준다. ⑦ 39.00g 4도에서 15min .. Biology/생화학 2020. 5. 5.

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  생화학실험 | Protein Purification & SDS-PAGE TIP Protein Purification을 이해하고 SDS-PAGE 를 이용하여 Protein 을 정제해본다 전기영동 전기영동(electrophoresis)은 이온교환크로마토그래피와 마찬가지로 단백질분자의 전하를 이용한 분리, 분석법이다. 단백질 분자는 보통 등전점 이외의 pH에서는 양 또는 음의 전하를 가지고 있어서 일정한 pH의 완충액 중에서 직류전류를 가하면 양극 또는 음극방향으로 이동한다. 즉 단백질 분자의 전하량, 분자의 크기에 따라 전장 중에서 이동하는 속도가 다른 점을 이용하여 분리, 분석하는 것이다. 단백질을 여과지, 전분이나 agarose와 같은 다당류 gel, polyacrylamide gel 등과 같은 것을 담체로 하여 전기영동하면 단백질은 band를 형성하여 분리되므로 분리, 분.. Biology/생화학 2019. 11. 6.