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  생명과학실험 | Protein Purification과 Electrophoresis(SDS-PAGE) TIP 추출해낸 Protein을 Purification하여 원하는 단백질만을 얻어내는 방법을 알아보고, SDS-PAGE Gel을 이용해 Electrophoresis하여 직접 눈으로 확인한다. 친화성 크로마토그래피 (affinity chromatography) 1) 친화성 크로마토그래피는 단백질과 지지체 위에 결합되어 있는 ligand 사이의 특이한 화학적 상호작용에 기초로 하는 분리 방법 예) 효소-억제제, 항원-항체 반응 2) Ligand 와 단백질 사이의 친화성 결합은 분자의 크기와 모양에 특이적인 결합 (Specific binding) 3) Column 내 정지상에 단백질과 상호작용하는 ligand 를 결합시킨 지지체 사용 4) 친화성 크로마토그래피에서 ligand 를 붙일 때 고체 matrix 에.. Biology/생명 과학 | 공학 2020. 9. 14.

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  생명과학실험 | Protein purification TIP 가. 미생물을 이용하여 대량 생산하였던 원하는 단백질만을 특이적으로 정제하려고 한다. 나. soluble 상태의 sample protein을 affinity chromatography 방법을 이용해 target protein만 추출한다. Affinity chromatography 효소의 기질 특이성과 같이 선택적으로 분리를 원하는 물질과 반응하는 특성을 가진 물질을 고정상으로 삼아 분리시키는 크로마토그래피이다. 예를 들어 효소와 기질, 항원과 항체, 호르몬과 수용체, 렉틴과 다당류, 핵산의 염기쌍 등의 사이에 작용하는 특이적 상호작용을 이용하여 상호작용물질의 한쪽을 불용성 담체에 공유 결합시킨 것을 크로마토그래피용 고정상으로 하고 다른 쪽을 복잡한 혼합계 중에서 선택적, 그리고 가역적으로 포착하여.. Biology/생명 과학 | 공학 2020. 9. 7.

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  생화학실험 | His–Tag 단백질의 정제 - Purification of His-tagged proteins TIP 1. 단백질을 정제하는 목적 1) 가능한 최고의 회수율 2) 최고의 생물학적 활성 유지 3) 최고의 순도 His-tag 단백질 / Ni-NTA 현재 재조합 단백질을 정제하는데 가장 많이 사용되는 방법이다. 다시말하면, 단백질을 구성하는 아미노산 중 히스티딘이 금속 이온과의 배위 결합에 강하게 관여한다는 연구 결과가 있다. 6개(혹은8개)의 His을 연속으로 달아놓으면 Ni등의 금속이온과 배위결합을 생성한다. Ni이 레진에 결합되어 있으면 His을 달아 Ni결합 레진에 단백질이 달라붙는데(Ni고정-NTA사용)이런 성질을 이용해 단백질을 정제한다. 따라서 유전자 공학적으로 단백질의 말단에 다수의 히스티딘을 첨가하면 단백질의 금속 이온 친 화성이 현저히 증가하여 쉽게 정제가 가능하다. 히스태그를 갖는 .. Biology/생화학 2020. 7. 5.

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  분자생물학개론 | Protein Purifying TIP 1. The Preparative Ultracentrifuge 2. Organelles and Macromolecules Can Be Separated Separated by Ultracentrifugation 3. Cell fractionation by centrifugation 4. Velocity Sedimentation 5. Equilibrium Sedimentation 6. The Separation of molecules by Column Chromatography 7. Ion-Exchange Chromatography 8. Ion-Exchange Matrix 9. Protein purification by Ion-Exchange Chromatography 10. Gel-filtrati.. Biology/분자생물학 2019. 10. 4.