반응형 일반생물학실험 | 혈액에서 DNA 추출 TIP 1. 혈액에서 DNA를 추출한다 2. 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction; PCR) 산물을 만든다. PCRDNA 사슬 중에서 목적하는 일부분만을 대량으로 증폭시키는 방법으로 뮬리스에 의해 고안된 방법이다. 처음에는 대장균에서 분리한 DNA 중합효소 I을 사용하였으므로 사이클이 지날 때마다 효소를 첨가해야 하는 불편 때문에 널리 이용되지 않았으나 사이키가 높은 온도에서도 그 활성이 없어지지 않는 Taq DNA 중합효소를 발견한 후 실험방법이 보편화되었다. 실험 방법1. 시작하기 전에1) 프로테아제 K 1병을 뉴클레아제 프리워터 1,250pl에 완전히 녹인다.2) WA1 버퍼에 30㎖ absolute ethanol 넣는다. 2. 전혈에서 DNA 추출 1) 단백.. Biology/일반 | 세포 생물학 2024. 7. 2. 일반생물학실험 | PCR(Polymerase Chain Reaction) TIP PCR과 전기영동법을 이해하고 증폭된 DNA를 관찰하기 위해 실험을 시행한다. PCR(Polymerase Chain Reaction) 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)은 1983년 Kary Mullis에 의해 고안 되었는데 이는 80년대 제한효소의 발견에 의한 Gene Cloning법에 이어 90년대를 화려 하게 장식한 생명공학 연구의 혁명적인 사건이다. PCR은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법으로서, 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA 합성이 가능하므로 분자 생물학적으로 제한효소의 발견만큼 획기적인 것이라고 할 수 있다. 중합효소 연쇄반응을 통하여 in vitro상에서 특정 부.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 12. 20. 생화학실험 | PCR-Mediated Mutagenesis TIP PCR의 종류와 원리에 대해서 알아보고 PCR-mediated deletion 실험을 통해 DNA의 원하는 부위를 제거하여 증폭할 수 있다. Site-directed mutagenesis Site-directed mutagenesis는 특정 DNA 염기서열에 돌연변이를 도입하는 기법으로 분자생물학의 핵심기술이다. PCR을 응용한 다양한 site-directed mutagenesis 기법이 개발되었으며 계속 진화하고 있다. 이를 "PCR-mediated site-directed mutagenesis"라고 한다. 최근 가장 진화한 형태인 "overlap extension PCR"이 널리 이용되고 있다. Overlap extension PCR은 돌연변이(substitution, insertion, an.. Biology/생화학 2020. 2. 10. 미생물실험 | Recovery and digestion of the amplified DNA TIP PCR로 증폭된 DNA를 회수하여 절단한다. 그로 인해 형질전환 때, vector을 넣을 DNA를 얻고, 절단하여 vector를 넣고자 함이다. 이 때, vector DNA와 insert DNA 모두 같은 효소로 같은 위치를 절단하고자 한다. Restriction enzyme(제한효소) DNA 특정부위를 자르고 붙일 수 있다. DNA를 자른다는 것은 nucleotide들이 연결되어 있는 인산디에스테르결합(phosphodiester bond)을 끊어내는 것을 의미하는데, 이런 역할을 하는 효소를 nuclease라고 하며 바깥쪽을 자르면 exonuclease, 안쪽을 자르면 endonuclease라고 부른다. endonuclease의 대표적인 것이 바로 제한효소(restriction enzyme / .. Biology/미생물학 2020. 1. 27. 분자생물학실험 | 제한효소 처리 및 Agarose gel에서 DNA 회수 TIP 본 실험에서는 플라스미드 DNA를 이용한 제한효소처리를 통하여, 이론적으로만 배웠던 제한효소의 반응원리를 실제로 수행하였다. 이를 통해 서로 다른 제한효소의 특성을 이해하고, 제한효소 반응 시 고려해야 할 점을 알아보았다. 그리고 Agarose gel 전기영동 결과를 관찰해 봄으로서 절단된 DNA 조각들의 크기를 알아보고 제한효소 처리가 잘 되었는지 확인해보았다. 또한 DNA 분자에서 여러 제한효소의 인식염기서열의 상대적인 위치를 알 수 있으므로 제한효소 지도를 작성해 보고자 한다. 유전자 클로닝이나 재조합, DNA의 생화학적 연구, 유전자의 구조 연구나 유전자의 발현 조절 연구의 기본이 되는 유전자 조작 기술에는 DNA의 절단과 연결, DNA 증폭이나 RNA 합성 또는 특별한 작용기의 첨가와 제.. Biology/분자생물학 2020. 1. 27. 분자생물학실험 | RNA 추출과 RT-PCR RNA 추출 원리 포유세포는 보통 한 세포 당 10-5㎖ RNA를 포함하고 있으며 이 중 80∼85%가 rRNA, 15∼20% 가 tRNA, 1∼5%가 mRNA로 이루어져 있다. 리보솜 RNA나 tRNA 등은 일정한 크기와 염기서열을 가 지고 있기 때문에 전기영동, 초 원심 분리 및 크로마토그래피에 의해 순수하게 분리할 수 있는 반면, mRNA는 크기도 다양하고 많은 종류가 혼합되어 있기 때문에 한 종류의 mRNA를 순수 분리 하기가 쉽지 않다. 그러나 진핵세포 mRNA는 3말단에 poly(A)를 가지고 있기 때문에 리보솜 RNA나 tRNA 등으로부터 분리해 낼 수 있다. RNA를 추출할 때 가장 주의해야 할 점은 핵산 가수분해효소에 의해 분해되지 않고 완전하게 얻는 것이며, 또한 단백질이 제거된 순수한.. Biology/분자생물학 2020. 1. 18. 이전 1 다음 반응형
