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  세포생물학실험 | 단백질 정량 분석 비교 TIP  단백질 정량 원리에 대해 이해하고, 대표적인 단백질 정량법인 BCA법을 이용하여 직접 단백질을 정량해본다.   단백질 정량이란 시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정으로써, 대부분의 생명과학실험의 기본이 되는 과정이라고 할 수 있다. 생물학 분야의 경우, 다른 분야보다 결과를 볼 때까지 뭔가 잘못되었다는 것을 알기 어려워 준비 단계에서의 단백질 정량이 잘못 이루어지면 헛수고를 하거나 잘못된 결과를 얻을 수 있다.  이러한 이유 때문에 단백질 정량을 정확하게 하는 것은 매우 중요하다. 또한, 정확성뿐만 아니라 대부분의 실험에서 반복적으로 사용하게 되므로 간편성 역시 중요하게 여겨지기 때문에 실험에 따라서 다양한 단백질 정량 방법이 사용되고 있다. 대표적인 정량법은 ① Absorb.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 26.

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  분자생물학실험 | 6X His tagged eGFP 단백질의 정제와 분석 실험 방법 1. 실험 과정 재조합 단백질(6X His tagged eGFP)의 발현과 정제를 위한 실험이다.먼저 GFP 발현하기 위해서 첫번째로 BL21 inoculation을 진행한다. 균을 다루는 실험(접종/배양)에서는 오염 방지를 위해 알코올 램프 위에서 진행한다. LB 5㎖을 시험관에 넣고, 여기에 Kanamycin 5㎕을 넣어준다. Loop를 살균하고 plate 뚜껑에서 식힌 후에 미리 spreading 해둔 BL21 plate(pET28a::egfp)에서 colony를 pick한다. BL21 inoculation completed라고 라벨링을 한 후에 37℃ shaking incubator에서 배양액에 공기의 공급이 잘 되게 튜브를 비스듬히 넣고 Overnight cultivation시킨다. .. Biology/분자생물학 2021. 3. 28.

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  생화학실험 | Protein quantification by DC protein assay DC (Detergent Compatible) protein assay 본 반응은 Lowry assay와 거의 동일한 원리로 진행된다. 단백질과 alkaline copper tartrate solution 사이의 반응이 일어나고, 이때 생성된 copper-treated protein이 foline 시약에 의해 환원되면서 푸른 색 변화를 보인다. 이는 단백질 농도에 따라 750㎚ 에서 최대 흡광도를 보이면서 단백질 양을 측정할 수 있다. 1. 장점 및 단점 본 실험은 계면활성제가 용해된 상태에서 진행하는 비색성 정량법(colorimetric assay)으로, 계면활성제 존재에 따른 실험값의 추가적인 보정이 필요 없다. 또한 15분 내에 최대 색 변화의 90% 이상 진행되므로 시간을 절약할 수 있다. 시약의.. Biology/생화학 2020. 5. 9.