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  생화학실험 | RNA 추출 & cDNA 합성 TIP 세포에서 직접 RNA를 추출하여 보고, 추출된 RNA를 이용하여 cDNA를 합성하여 RT-PCR을 통해 특정 유전자의 mRNA 발현량을 비교한다. Chloroform의 역할 RNA extraction을 할 때 페놀계열 lysis buffer를 쓰게 되는데, 이후 chloroform을 넣어줌으로써 RNA가 녹아있는 수층의 페놀을 제거하여 RNA의 순도를 높여준다. pH4 정도로 낮을 때 RNA는 물과 함께 섞여있으므로 물에 남아있을 수 있는 페놀을 chloroform에 녹아들게끔 해주는 것이다. 또한 chloroform은 비극성용매여서 물에 잘 녹지 않으므로 층분리가 이루어지게 된다. 실험 방법 1. RNA extraction 1) 500㎕ RiboEx를 넣은 sample에 chloroform 10.. Biology/생화학 2022. 9. 4.

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  분자생물학실험 | Quantitative Real Time Polymerase Chain Reaction(qRT-PCR) TIP 추출된 RNA로 합성한 cDNA를 이용하여 RT-PCR을 진행하고, 특정 유전자의 mRNA 발현량을 비교하여 sample을 평가한다. Housekeeping gene의 이용 housekeeping gene이란 세포에서 높은 수준으로 항상 발현되어 유지되는, 세포 생명활동에 필수적인 기능을 수행하는 유전자의 총칭이다. 외부 자극에 의해 발현이 크게 변하지 않는 특성이 있으며 대표적으로 액틴 단백질, 리보솜 단백질, GAPDH(Glyceraldehyde –3-phosphate dehydrogenase) 등이 있다. housekeeping gene은 높은 수준으로 발현되는, 즉 실험에서 넣어준 만큼 발현되기 때문에 PCR에서 특정 유전자의 전사 발현을 양적으로 비교할 때 대조군과 실험군에서 총 RNA .. Biology/분자생물학 2021. 11. 21.

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  일반생물학실험 | cDNA 합성 및 Real-time PCR을 통한 유전자 발현 분석 TIP 1. 세포들은 기본적으로 주위 환경에 적응하기 위해 필요한 유전자의 발현을 증가시키고, 필요 없는 유전자의 발현은 억제시키는 방법으로 유전자 발현을 조절한다. 2. 동일한 세포를 서로 다른 영양 환경의 배지에서 배양한 후 유전자 발현을 비교하기 위해 cDNA를 합성하고, Real-time PCR을 통해 유전자 발현의 차이를 직접 확인해 보고자 한다. cDNA는 mRNA를 역전사 시켜 만든 DNA 염기서열로, exon만 존재하는 성숙 mRNA에 상보적인 DNA이다. cDNA를 통해 발현된 DNA 염기서열이 무엇인지 파악할 수 있다. Real-time PCR은 PCR 과정이 진행됨과 동시에 증폭되는 DNA 표적서열의 양을 측정하는 실험방법이다. PCR은 중합효소연쇄반응으로, DNA의 표적서열을 선택적.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 2. 14.

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  분자생물학개론 | How to Obtain a Clone of a Specific Gene TIP 1. The Problem of Selection 2. Direct Selection 3. Identification of a Clone from a Gene Library 4. Methods for clone identification 1. The Problem of Selection 가장 간단한 생물체인 E. coli 조차도 수천개의 유전자를 가지고 있으며, 따라서 전체 세포의 DNA가 제한 효소로 처리되면 원하는 유전자를 가진 단편뿐만 아니라 다른 유전자를 가진 또 다른 많은 단편들이 생기게 될 것이다. Ligation 반응동안 개개의 단편을 선별할 수 없으며 서로 다른 DNA조각을 가진 수많은 재조합 DNA분자들이 생성될 것이다. 그 결과 형질전환과 plating한 후에 다양한 재조합 cl.. Biology/분자생물학 2019. 11. 16.