분자생물학개론 | How to Obtain a Clone of a Specific Gene

 

 

 

TIP

 

 

1. The Problem of Selection
2. Direct Selection
3. Identification of a Clone from a Gene Library
4. Methods for clone identification

 

 

 

1. The Problem of Selection

가장 간단한 생물체인 E. coli 조차도 수천개의 유전자를 가지고 있으며, 따라서 전체 세포의 DNA가 제한 효소로 처리되면 원하는 유전자를 가진 단편뿐만 아니라 다른 유전자를 가진 또 다른 많은 단편들이 생기게 될 것이다. Ligation 반응동안 개개의 단편을 선별할 수 없으며 서로 다른 DNA조각을 가진 수많은 재조합 DNA분자들이 생성될 것이다. 그 결과 형질전환과 plating한 후에 다양한 재조합 clone을 얻게 될 것이다.

 

 

(1) There are two basic strategies for obtaining the clone you want

원하는 clone을 얻을 수 있는 많은 방법들이 있지만, 모두 두 개의 범주로 나눌 수 있다.

1) Direct selection for desired gene

원하는 유전자를 가진 clone만 colony를 형성하도록 하는 방법

모든 선별은 plating 단계에서 수행됨.

 

2) Identification of the clone from a gene library

우선 shotgun cloning 실험을 통해 clone library를 만들고 난 후에 그 중에서 원하는 clone을 찾는 방법

※ clone library : 특정 생물체에 존재하는 유전자들을 모두 갖고 있는 clone들의 집합체

Direct selection은 신속하고 비교적 명확하기 때문에 선호되는 방법이다. 그러나 모든 유전자에 응용할 수는 없다. 그러므로 clone identification 기술이 매우 중요하며 특히 많은 생물체의 완전한 genomic library가 현재 유용하기 때문에 더욱 그렇다.

 

728x90

 

 

2. Direct Selection

조작된 유전자를 선별하기 위해선 원하는 recombinant만 자랄 수 있는 agar medium에 transformant를 plating해야 한다. 그러면 생성된 colony만 원하는 재조합 DNA분자를 가진 세포들로 구성되어 있을 것이다.

 

 

(1) Marker rescue extends the scope of direct selection

Direct selection이 단지 항생제 저항성 유전자를 cloning하기 위해서만 이용된다면, 매우 제한 적인 실험만 하게 될 것이다. 다행히 그 기술은 형질전환을 위한 숙주로써 E. coli 의 돌연변이 균주를 사용함으로써 실험의 폭을 넓힐 수 있다.

 

 

(2) The scope and limitations of marker rescue

Marker rescue가 많은 유전자의 clone을 얻기 위해 이용될 수 있지만, 그 기술에는 두 가지 limitation이 있다.

1) 돌연변이 균주는 그 유전자를 위해 유용해야만 한다.

2) 야생형만 생존할 수 있는 배지가 필요하다.

일반적으로 marker rescue는 생합성 효소를 암호화하고 있는 유전자들을 위해 응용될 수 있다. 왜냐하면 이들은 최소배지에서 선별될 수 있기 때문이다.

 

 

 

[Biology/분자생물학] - 분자생물학개론 | 유전자 클로닝이 중요한 이유(Why Gene Cloning and DNA Analysis are Important)

[Biology/분자생물학] - 분자생물학개론 | Vectors for Gene Cloning - Plasmids and Bacteriophages

[Biology/분자생물학] - 분자생물학개론 | Purification of DNA from Living Cells - 생세포로부터의 DNA 분리, 정제

[Biology/분자생물학] - 분자생물학개론 | Manipulation of Purified DNA - 정제된 DNA의 조작

[Biology/분자생물학] - 분자생물학개론 | Introduction of DNA into Living Cells - 생세포에서의 DNA 도입

[Biology/분자생물학] - 분자생물학개론 | Cloning vector for E. coli

[Biology/분자생물학] - 분자생물학개론 | Cloning Vectors for Organisms Other than E. coli

[Biology/분자생물학] - 분자생물학개론 | The Polymerase Chain Reaction(PCR)

[Biology/분자생물학] - 분자생물학개론 | Studying Gene Location and Structure

[Biology/분자생물학] - 분자생물학개론 | Studying gene expression and Function

 

 

 

[분자생물학]How to Obtain a Clone of a Specific Gene 레포트