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  생화학실험 | 단백질의 정량분석 TIP Lowry method와 Bradford method를 사용하여 단백질(protein)의 농도를 측정한다. 단백질의 정량 시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정으로 280 ㎚에서 흡광도를 측정하는 방법과 단백질의 농도에 따른 색의 변화를 이용하여 분석하는 방법이 있다. 색의 변화를 이용하는 비색정량분석 (colormetric analysis)에는 Bradford법, Biuret법, Lowry법, Bicinchoninic acid법 등이 있다. 280 ㎚의 파장에서의 흡광도 측정 방법은 tyrosine이나 tryptophan 잔기의 흡광도를 측정하는 방법으로 장점으로는 분석이 빠른 것을 들 수 있으며, 단점으로는 tryptophan의 함량 변화에 따라 흡광도가 틀려지고 같은 파장의.. Biology/생화학 2023. 3. 30.

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  일반생물학실험 | 단백질 추출 및 정량 TIP  Cell에서 단백질을 추출하고 Bradford assay를 통해 이를 정량한다.   Coomassie Brilliant Blue G-250Bradford mathod에서 사용되는 염료이다. 산성 조건 하에서 갈색인 반면, 단백질과 결합하면 전체적으로 음전하를 띠며 푸른색으로 변하게 된다. 또한 이러한 성질 때문에 Polyacrylamide gel electrophoresis를 사용하여 단백질 또는 단백질 복합체를 분리하는데 사용할 수 있다. 단백질 농도가 많을수록 더욱 진한 파란색을 띤다. Coomassie Blue가 단백질에게 전자를 주어 단백질의 중성 상태를 무너뜨리면 단백질의 소수성 부위가 노출되는데, 노출된 부분에 Coomassie Blue가 비공유 결합을 이룬다. 또한 양전하를 띠는 아.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 5. 9.

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  세포생물학실험 | Estimation of Protein TIP  단백질이 포함된 미지의 시약에 담긴 단백질의 총량을 알아낸다.   Lowry's method알칼리성에서 단백질의 펩타이드 결합과 구리가 반응해 Cu2+ 이온을 생성하는 뷰렛반응 원리를 이용한 방법이다. 구리이온의 화학변화에 영향을 주는 화합물이 존재할 경우 단백질 정량 측정을 간섭하게 되는데, 이를 위해 분적 전에 제거하거나 영향이 없을 정도로 희석하여야만 한다.  실험 방법1. 실험 과정1) 실험에 사용할 용액들을 제조한다.① Working standard 제조- Bovin serum albumin 10㎖를 증류수 100㎖에 용해시킨다.(stock solution)- Stock solution 10㎖를 증류수 100㎖에 희석시킨다. ② Folin’s phenol 시약 제조- Folin’s ph.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 24.

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  일반생물학실험 | 단백질 정량 우리 몸을 구성하는 중요한 물질 중 하나인 단백질. 단백질은 효소로도 작용하기도 하고 우리 몸의 조직을 구성하기도 합니다. 다양한 용도에 쓰인 단백질이 세포나 샘플에 얼마나 포함되어 있는지 그 농도와 양을 구하기 위해서 단백질 정량이라는 실험을 합니다. 단백질 정량은 대부분의 생명과학 실험의 기본이며 대학원생들이 굉장히 많이 하는 실험이라고 알려져 있습니다. 이번 실험에서는 주어진 수용액에 녹아있는 단백질 양을 정량하는 데에 Bradford assay 방법을 사용하였으며 여러 농도의 용액을 사용하여서 흡광도와 농도간의 관계나 패턴이 있는지에 대해서 알아보았습니다. Bradford assay 방법에 사용하는 브래드포드 지시약은 평상시에는 녹갈색을 띄고 있다가 단백질과 결합하면 청색을 띄는 특징이 있고 색이.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 19.

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  생화학개론 | 아미노산과 단백질 화학 TIP 1 아미노산(amino acid) 2 Peptide 3 단백질 단백질은 50개 이상의 L-α-아미노산이 peptide 결합으로 연결된 polypeptide로 생물체의 주요 구성성분이며 생명현상을 나타내는데 가장 중요한 물질이다. 이 polypeptide는 β-구조나 α-나선구조로 섬유상단백질이나 구상단백질을 구성하고 있으며 보조인자(prosthetic group)를 함유하는 것과 함유하지 않는 것이 있다. 단백질은 생체 내에서 여러 가지 화학반응을 촉매하는 효소단백질, hemoglobin, 혈장단백질, myoglobin 및 β1-1-lipoprotein과 같이 운반에 관여하는 단백질, 밀의 gliadin, 달걀의 ovalbumin, 우유의 casein, 철을 저장하는 ferritin 등의 영양과 .. Biology/생화학 2020. 4. 21.

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  생명과학실험 | Western blot analysis TIP 1. 항원에 대한 항체의 특이적 결합을 이용하여 protein 혼합물로부터 어떤 특정 protein을 분석하는 Western blot의 원리를 이해한다. 2. protein의 SDS-PAGE분리, protein의 gel로부터 membrane으로의 transfer, 항체반응 및 항체에 부착된 효소의 반응에 의한 발색반응 등의 실험기법을 습득한다. Western blot 정제를 할 때에는 이온 교환 형식만 가지고는 완벽하게 정제하기가 불가능 하다. 그래서 SDS-PAGE로 여러 protein이 섞인 것을 확인할 수 있다. 이제 그 안에 존재하는 protein 중에 어느 protein이 진짜 원하는 AP를 포함하고 있는지 확인해 보는데 이때 사용할 것이 Western blot이다. Western blo.. Biology/생명 과학 | 공학 2019. 10. 31.