외계로부터 오는 암석, 자외선 등은 지구를 항상 위협한다. 대기층은 지구의 크기에 비하면 보이지 않을 정도로 얇지만 유일하며 강력한 방어기제이다. 인간(동물)의 몸도 외부의 자극으로부터의 방어기제를 지니며 항원-항체 반응은 가장 강력한 방어수단중하나이다. 대기가 거의 없는 달이 운석과 같은 외부공격에 쉽게 황폐화되는 것처럼 면역이 약해져 항원-항체 반응이 일어나지 않으면 개체는 더 이상 유지될 수 없다. 이 반응을 관찰하기가 쉽지 않으므로 ELISA를 method로 채택 하였다. 항원의 유입에 따른 항체의 생성을 관찰하기 위해서 Rabbit의 몸에 Salmonella 균을 항원으로서 투입하고 매주 혈청을 뽑아 따로 보관하였다.
실험 방법
1. 혈청확보
rabbit의 귀에서 1㎖의 혈액을 뽑는다. 혈액을 뚜껑이 달린 centrifuge tube 담아 상온에서 굳어지게 한다. centrifuge tube를 원심 분리하여 혈구와 혈청을 분리한다. 혈청만 추출하여 보관한다. 매주 월요일마다 총 4번 시행한다.
2. 항원주입
앞서 얻은 2차 항체 0.5㎖ 와 Freund's Adjuvant 0.5㎖를 three way tube를 이용해 섞는다. 지나치게 힘을 가하면 항원이 tube밖으로 터져 나올 수 있으므로 주의한다. 채혈이 끝난 토끼의 피하에 10회에 걸쳐 주입한다. 매주 월요일 총 4번 시행한다.
3. ELISA
1) 총 5주에 걸친 실험 계획이었으나 4주로 당겨서 넷째 주에 ELISA test를 시행하였다.
2) salmonella 항원이 붙어있는 96-well plate를 준비한다. 항원이 붙어있지 않는 부분은 skim milk를 이용하여 blocking 시킨다.
3) 이제까지 분리해서 보관해둔 혈청을 82㎕씩 항원이 붙어있는 5개의 plate에 떨어뜨려 넣는다.
4) 37˚C incubator에서 약 1시간가량 넣어두어 항체가 항원에 붙기를 기다린다.
5) 꺼내어 Tween 20을 200㎕씩 넣고 washing해준다. 이를 3회 반복한다.
6) Secondary antibody solution을 75㎕씩 각 well에 넣는다. 이번 실험의 경우, 2차 항 체로써 goat anti-rabbit IgG HRP를 사용하였다.
7) 37˚C incubator에 약 1시간가량 넣어두어 2차 항체가 1차 항체에 붙기를 기다린다.
8) 다시 꺼내어 Tween 20을 200㎕씩 넣고 washing해준다. 이를 3회 반복한다.
9) TMB를 70㎕씩 넣고 상온에서 30분가량 기다리면서 색이 나오는지를 관찰한다.
[Biology/유전학 & 면역학] - 면역학실험 | ELISA를 이용한 토끼에서 살모넬라균의 항체 검출
[Biology/생명과학 & 생명공학] - 생명과학실험 | Enzyme-linked immunosorbent assay
[Biology/유전학 & 면역학] - 면역학실험 | ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent assay)
[Biology/유전학 & 면역학] - 면역학실험 | Mouse immune system의 면역반응 test와 해부학적 구조 확인
[Biology/유전학 & 면역학] - 면역학개론 | Enzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA)
[면역학실험]Rabbit의 면역체계를 이용한 항원-항체 반응 레포트
외계로부터 오는 암석, 자외선 등은 지구를 항상 위협한다. 대기층은 지구의 크기에 비하면 보이지 않을 정도로 얇지만 유일하며 강력한 방어기제이다. 인간(동물)의 몸도 외부의 자극으로부터의 방어기제를 지니며 항원-항체 반응은 가장 강력한 방어수단중하나이다. 대기가 거의 없는 달이 운석과 같은 외부공격에 쉽게 황폐화되는 것처럼 면역이 약해져 항원-항체 반응이 일어나지 않으면 개체는 더 이상 유지될 수 없다. 이 반응을 관찰하기가 쉽지 않으므로 ELISA를 m
www.happycampus.com
댓글