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  일반생물학실험 | 단백질 추출 및 정량 TIP  Cell에서 단백질을 추출하고 Bradford assay를 통해 이를 정량한다.   Coomassie Brilliant Blue G-250Bradford mathod에서 사용되는 염료이다. 산성 조건 하에서 갈색인 반면, 단백질과 결합하면 전체적으로 음전하를 띠며 푸른색으로 변하게 된다. 또한 이러한 성질 때문에 Polyacrylamide gel electrophoresis를 사용하여 단백질 또는 단백질 복합체를 분리하는데 사용할 수 있다. 단백질 농도가 많을수록 더욱 진한 파란색을 띤다. Coomassie Blue가 단백질에게 전자를 주어 단백질의 중성 상태를 무너뜨리면 단백질의 소수성 부위가 노출되는데, 노출된 부분에 Coomassie Blue가 비공유 결합을 이룬다. 또한 양전하를 띠는 아.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 5. 9.

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  세포생물학실험 | 단백질 정량 분석 비교 TIP  단백질 정량 원리에 대해 이해하고, 대표적인 단백질 정량법인 BCA법을 이용하여 직접 단백질을 정량해본다.   단백질 정량이란 시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정으로써, 대부분의 생명과학실험의 기본이 되는 과정이라고 할 수 있다. 생물학 분야의 경우, 다른 분야보다 결과를 볼 때까지 뭔가 잘못되었다는 것을 알기 어려워 준비 단계에서의 단백질 정량이 잘못 이루어지면 헛수고를 하거나 잘못된 결과를 얻을 수 있다.  이러한 이유 때문에 단백질 정량을 정확하게 하는 것은 매우 중요하다. 또한, 정확성뿐만 아니라 대부분의 실험에서 반복적으로 사용하게 되므로 간편성 역시 중요하게 여겨지기 때문에 실험에 따라서 다양한 단백질 정량 방법이 사용되고 있다. 대표적인 정량법은 ① Absorb.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 26.

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  일반생물학실험 | 흡광도를 이용한 BSA의 단백질 정량 및 미지 농도의 BSA 용액 농도 추정 TIP 본 보고서에서는 Beer-Lambert Law를 이용해 서로 다른 농도의 Bovine Serum Albumin(BSA) 용액을 만들어 흡광도계로 흡광도를 측정하고 선형 회귀곡선을 그려 미지 농도의 BSA용액의 농도 추정을 목표로 한다. 생명체에 있어서 모든 종류의 고분자 물질은 생명체에 필수적인 기능을 담당하지만 단백질처럼 광범위한 범위의 기능을 담당하는 물질은 좀처럼 찾아보기 힘들다. 생물학에서 단백질은 떼려야 뗄 수 없는 분야이다. 생물학의 중추를 이루는 효소, 면역체계, 항상성, 수용체 등등은 모두 단백질로 구성되어 있다. 이러한 단백질을 정량하는 방법으로 여러 가지 많은 방법들이 사용되고 있는데 그 중의 하나가 바로 Beer–Lambert Law를 이용한 방법이다. Beer-Lambert .. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 18.

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  생화학실험 | GPC 기법을 이용한 단백질 분리 및 미지시료의 분자량 측정 TIP 액체에 용해되어 있는 혼합물의 각각의 분자량의 차이를 이용해서 분리하는 방법 중 대표적인 방법은 다공성 입자를 충진한 column을 이용하는 것이다. 아래 그림과 같이 여러 가지 분자량을 가진 용질이 용해되어 있는 용액을 충진 column의 윗부분에 투입한 후 용질이 함유되어 있지 않은 용매만을 coulmn에 공급하면 분자량이 큰 물질은 충진물질의 공극을 통과하지 않고 입자사이로 빠져나오게 되므로 column을 통과하는 시간이 빠르다. 반면에 분자량이 작은 물질은 입자의 공극을 돌아다니다가 빠져나오게 되므로 column을 통과하는 시간이 오래 걸린다. 이러한 분자량과 column의 통과시간 사이의 관계를 이용하면 시료의 분자량을 측정할 수 있게된다. Column을 통과한 단백질용액을 일정한 부피씩.. Biology/생화학 2020. 4. 28.

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  생화학실험 | Bradford assay TIP 미리 농도를 알고 있는 Standard 용액을 이용하여 농도를 모르는 sample의 농도를 구할 수 있다. Bradford Assay 용액의 단백질 농도 정량법은 생화학 연구에서 자주 사용되는 중요한 기술이다. 정량법으로 여러 가지 방법들이 개발되었으나 민감도가 각각의 측정법마다 다르고 반응에 사용하는 시약들이 특정한 아미노산과만 반응하기 때문에 한가지로 모든 단백질의 농도를 정량하기는 힘들다. UV-Visible spectrophotometer를 이용, 흡광도를 측정하여 standard물질인 BSA(Bovine Serum Albumin)나 BGG(Bovine Gamma Globulin)를 기준으로 자신의 시료에 단백질이 얼 마만큼 들어있는지 측정하는 방법 중 하나이다. 신속하고 간편하게 단백질을.. Biology/생화학 2019. 11. 10.