반응형 일반생물학실험 | 제한효소반응과 전기영동 본 실험의 주제는 제한효소반응과 전기영동이다. 유전자 클로닝과 유전공학은 특정 염기서열을 인지하고 절단하는 제한효소(restriction enzyme)의 발견에 의해서 가능하게 되었다. 자연에서 이러한 효소들은 파지 혹은 다른 생명체의 DNA가 박테리아 세포 내로 들어오는 것을 막아준다. 그들은 제한(restriction)이라고 불리는 과정으로 외부 DNA를 절단하는 역할을 한다. 각각의 제한효소는 제한효소자리(restriction site, 일반적으로 4～8개 염기서열)라는 특정 염기서열을 인지하고 DNA 두 가닥을 자른다. 박테리아는 제한효소자리에 있는 아데닌이나 시토신에 메틸기(-CH3)를 첨가함으로써 제한효소로부터 자신의 DNA를 보호한다. 제한효소는 DNA의 특정한 염기배열을 식별하고 이중사슬을.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 1. 31. 일반생물학실험 | 제한효소에 의한 DNA의 절단 TIP 1. 시험관 내에서 유전자를 조작할 때 쓰이는 도구인 제한효소로 Plasmid DNA를 잘라보고 분석한다. 또한 절단한 Vector DNA와 insert DNA를 ligase로 ligation해보고 대장균에서 그 형질을 발현 시켜 본다. 2. 생명공학의 기초가 되는 분자생물학의 기본실험인 미생물에서의 plasmid DNA를 절단하는 실험이다. 본 실험은 가장 기초가 되는 실험으로서 이 후에 하게될 전기영동 실험에서 응용하게 된다. 전기영동 실험에서는 거대분자들을 연구하기 위하여 사용하는 방법으로 PCR도 사용하게 된다. 이 실험을 통하여 DNA의 분리 및 확인을 알아보려고 한다 제한효소 (restriction enzyme) 제한효소 (restriction enzyme) 혹은 제한 내부핵산 가수분해.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 8. 21. 일반생물학개론 | Blotting 기법 TIP 1. SOUTHERN BLOTTING 2. NORTHERN BLOTTING 3. WESTERN BLOTTING 1. SOUTHERN BLOTTING Southern blotting은 1975년 southern(Southern)에 의하여 고안된 유전자 연구기법이기 때문에 그렇게 명명하였다. 사람의 유전자를 제한요소로 절단하면 여러 크기의 DNA절편이 생긴다. 다양한 절편을 전기영동하면 절편의 크기에 따라 분리된다. 한천 겔에 있는 DNA를 흡착지로 이전하면, 한천 겔에 있는 위치와 정확하게 일치하는 곳에 DNA절편이 있게 된다. 겔에서 흡착지로 이전시키는 기법이 포함되기 때문에 southern 이전을 동의어로 사용한다. 흡착지에 있는 분절은 크기에 따라 약 300만개 정도가 있기 때문에 이 중에서 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 8. 6. 생화학실험 | 형질전환 - 대장균 DNA 전기영동 관찰 형질전환 형질전환(transformation)은 외부로부터 주어진 DNA에 의하여 생물의 유전적 성질을 변하게 하는 일을 말한다. 이는 1928년 영국의 그리피스가 Diplococcus pneumonia를 이용하여 실험한 것이 계기가 되어 발견된 실험 방법이다. 세포는 외부의 DNA를 받아들임으로써 원래 갖고 있는 성질과는 다른 새로운 유전형질을 발현할 수 있게 된다. Transformation 에서는 외부의 DNA를 벡터를 이용해 bacteria cell에 주입해 준다. 이러한 벡터를 이용한 외부 DNA를 세포에 주입하는 방법으로는 또한 Transfection이 있다. Transfection은 Transformation과 같이 외부 DNA를 세포에 주입한다는 것은 같지만 가장 큰 차이점으로 Transf.. Biology/생화학 2020. 5. 15. 생화학실험 | PCR-Mediated Mutagenesis TIP PCR의 종류와 원리에 대해서 알아보고 PCR-mediated deletion 실험을 통해 DNA의 원하는 부위를 제거하여 증폭할 수 있다. Site-directed mutagenesis Site-directed mutagenesis는 특정 DNA 염기서열에 돌연변이를 도입하는 기법으로 분자생물학의 핵심기술이다. PCR을 응용한 다양한 site-directed mutagenesis 기법이 개발되었으며 계속 진화하고 있다. 이를 "PCR-mediated site-directed mutagenesis"라고 한다. 최근 가장 진화한 형태인 "overlap extension PCR"이 널리 이용되고 있다. Overlap extension PCR은 돌연변이(substitution, insertion, an.. Biology/생화학 2020. 2. 10. 이전 1 다음 반응형
