• 

  분자생물학실험 | E.coli 에서의 GFP발현 유도 TIP 원하는 유전자(GFP)를 plasmid를 이용하여 bacteria에서 발현시켜 볼 수 있다. GFP(Green Fluorescent Protein) Bioluminescent jellyfish (해파리) Aequorea victoria는 특징적인 초록 형광을 낸다. 이것은 칼슘-결합 광단백질 (calcium-binding photoprotein)과 green fluorescent protein (GFP)의 두 단백질에 의한 것이다. 최근 10년 동안 GFP는 생화학과 분자 생물학 분야에서 가장 흥미로운 단백질의 하나로 여겨져 왔다. GFP는 발광하는 특성 때문에 정량적인 측정이 쉬워서 박테리아에서 형체 전이 마우스에 이르기까지 광범위한 생명체내에서 우리가 연구하고자 하는 유전자가 언제 어디서 얼마.. Biology/분자생물학 2020. 3. 21.

• 

  분자생물학실험 | Gene Cloning TIP Gene cloning으로 DNA를 자르고 붙이고 변형시켜서 실험에 필요한 재조합 DNA를 제조하고, 기본적인 효소의 처리와 DNA의 분리 및 조작방법 이용하여 분자생물학의 기본을 배우기 위함이다. Gene cloning 동식물의 한 개체에서 수정을 거치지 않고, 무성생식에 의하여 양친과 똑같은 유전자 조성을 가진 개체를 얻는 기술이다. 그 개체군을 클론이라고 하며, 꺾꽃이, 접붙이기, 포기나누기 등으로 증식시킨 개체도 클론이라고 일컫는다. 클로닝은 암수의 유전자가 서로 섞이지 않으므로 우수한 품종을 보존하기 위한 가장 좋은 방법이다. 당근, 담배 등과 같은 식물에서는 성공사례가 많으며, 육종에 효과적으로 이용하고 있다. 동물의 경우도 양서류에서 성공하고 있다. 1963년 J.B 가든은 아프리카 .. Biology/분자생물학 2020. 2. 6.

• 

  분자유전학실험 | DNA ligation 1970년대 쯤 "유전공학(genetic engineering)"이라는 분야가 등장했다. 요즘에도 쓰이지만 이 말은 "유전자 재조합 기술(recombinant DNA technology)"를 의미한다. 이러한 재조합 분자를 생성하기 위하여 클론 될 DNA뿐만 아니라, 벡터도 통제된 방법으로 특정한 지점에서 절단된 후 함께 연결되어야 한다. 절단과 연결은 최근 몇 년 동안 다양하게 발달해 온 DNA조작 기술의 두 가지 예이다. 절단과 연결뿐만 아니라 DNA분자를 짧게 혹은 길게 할 수 있으며 RNA나 새로운 DNA 분자로 사본할 수 있고, 특별한 화학기능기를 첨가 혹은 제거함으로써 수정할 수도 있다. 시험관 속에서 수행할 수 있는 이러한 모든 조작들은 유전자 클로닝뿐만 아니라 DNA생화학, 유전자 구조, .. Biology/유전학 2019. 11. 10.

• 

  생화학실험 | Preparation of competent E-coil & transformation TIP DNA가 유전적 형질 전환을 한다는 것을 알아보기 위해서 Competent된 E-coli를 만든 후 transformation을 시킨다. Competent cell 정상적인 bacteria에 화학적 처리를 하여 DNA가 잘 들어갈 수 있게 만든 cell을 의미한다. ligation을 마친 DNA나 circular 형태의 Plasmid를 증폭하기 위해서, 혹은 cloning을 끝내고 완성된 vector가 있는데 그것을 expression하기 위해서 E.coli에 transformation을 해야 합니다. 이때 사용하는 E.coli host cell을 competent cell이라고 부릅니다. 화학 처리에 쓰이는 시약은 다음과 같이 여러 가지가 있으며 이 중 가장 중요한 것은 calcium chlor.. Biology/생화학 2019. 11. 2.

• 

  생화학실험 | Digestion, Extraction and Ligation of DNA TIP 제한효소와 플라스미드에 대해 알아보고 DNA 재조합 과정을 이해한다. 유전정보를 가지는 거대분자인 DNA 분자, 즉 유전자를 인간의 손으로 시험관내에서 자유로이 절단하거나 붙여 어떤 생물의 염색체 중에 삽입하여 목적으로 하는 특정의 유전자를 증식시키고 발현시키는 것이 가능해 졌다. 이와 같이 유전자를 인위적으로 조작하여 어떤 생물의 유전자에 다른 생물의 유전자를 삽입하고 그 유전자를 단일 clone으로 증식시키거나 발현시키는 것을 DNA 재조합 또는 유전자 조작이라고 한다. 유전자 재조합 기술은 생물학의 연구에 있어 가장 기본이 되는 것으로, 원하는 유전자 만을 증폭하거나, 특정 유전자를 다른 유전자와 재조합 시킬 수 있으므로 그 유전자의 역할 구명에 큰 이바지를 하고 있다. 그런 유전자의 역할은.. Biology/생화학 2019. 10. 28.

• 

  분자생물학개론 | Manipulation of Purified DNA - 정제된 DNA의 조작 TIP 1. DNA를 조작하기 위해 사용되는 효소들의 종류 2. DNA 절단용 효소 : 제한 효소(Restriction endonucleases) 3. Ligation - DNA 분자들을 서로 연결시키기 1. DNA를 조작하기 위해 사용되는 효소들의 종류 이들 효소는 이들이 촉매하는 반응의 유형에 따라 5가지로 나눌 수 있다. (1) 핵산 분해 효소(Nucleases) : 포스포디에스테르 결합을 끊음으로써 DNA 분자들을 분해시킴 1) Exonuclease(엑소뉴클레아제 또는 외부 핵산 분해 효소) : DNA 말단부터 한번에 하나씩의 뉴클레오티드를 제거시키는 효소로서, 이중가닥을 공격할 때 분해시키는 가닥의 수로 세분한다. ① BAL31(from the bacterium Alteromonas espeji.. Biology/분자생물학 2019. 10. 21.