반응형 생명화공실험 | 완충용액 TIP 완충용액을 제조하는 방법을 익히고 완충용액의 특성을 파악하는 것이다. 실험 요약 pH 측정기, NaOH 용액, HCl 용액, Sodium acetate trihydrate, Glycine 등을 이용하여 완충용액을 제조하는 방법을 익히고 완충용액의 특성을 파악해보았다. 각각의 완충용액을 제조하여 Sodium acetate trihydrate 완충용액에는 NaOH를, Glycine 완충용액에는 HCl을 가해주어 완충용액이 더 이상 완충작용을 하지 못하는 부분이라 생각할 수 있는 용액의 pH가 급변하는 지점을 관찰해본 결과, 완충용액의 농도와 완충 값 사이에 비례관계가 성립함을 알 수 있었다. 완충용액 (Buffer) 제조방법 완충용액을 제조하는 방법은 여러 종류가 있으나 가장 간단하고 안전한 방법은 .. Biology/생명 과학 | 공학 2023. 3. 6. 생명공학실험 | 세포 배양(cell culture) TIP 1. 세포배양을 통하여 세포의 성장 주기와 세포배양법을 익힌다. 2. Hemocytometer를 이용하여 세포 수를 계산할 수 있다. 세포 배양 1. 다세포 생물에서 분리한 세포를 특수한 용기 내에서 성장 및 보존 세포의 세대를 포존시키는 것을 뜻한다. 특수한 용기, 온도, 습도, 영앙소 등의 배양 조건이 필요하다. 2. 계대 배양 : 세포증식을 위해 새로운 배양접시에 옮겨 세포의 대를 계속 이어서 배양하는 방법으로, 제한된 배양접시 내에서 세포가 증식을 멈추게 되므로 이것을 막고 세포가 증식할 수 있게끔 새로운 공간을 제공한다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) HBSS를 첨가한다. 2) Trypsin-EDTA 2㎖ 첨가후 37℃ 인큐베이터에 2분간 보관한다. 3) DMEM(+) 10㎖ 첨가후, .. Biology/생명 과학 | 공학 2022. 12. 29. 생명공학실험 | Plasmid DNA preparation TIP Ampicillin에 대하여 저항성을 지닌 E. coli (XLI-Blue, Amp-r) 의 plasmid DNA pBluescript SKⅡ(+)를 isolation 한다. Plasmid DNA를 정제하기 위해서 여러 가지 방법들이 사용되는데 공통적으로 다음의 세 과정- 미생물의 배양과 플라스미드 증폭 ; 미생물 수거와 cell lysis ; plasmid DNA 정제-을 거친다. DNA를 분리하기 위해서는 일단 DNA가 세포 밖으로 유출되도록 세포벽 및 세포막을 분해 시켜야 하고, 이때 DNA 가수분해 효소들의 활성을 억제하는 조건에서 DNA를 분리해야 하며 단백질이나 RNA가 같이 회수되지 않도록 해야 한다. 세포벽을 가지는 박테리아의 경우에는 먼저 lysozyme을 처리하여 세포벽을 분해 .. Biology/생명 과학 | 공학 2022. 9. 24. 생명공학실험 | 온도, pH가 효소반응에 미치는 영향 TIP 전분 분해효소인 아밀라이제의 효소 촉매활성에 및는 요인들 중 반응 중의 온도와 pH가 효소활성에 미치는 효과를 관찰한다. 효소 생물학적 촉매로 주로 단백질이며 특정한 기준하고만 결합하여 반응을 촉매하는 기질 특이성을 가진다. 1. 효소반응에 영향을 주는 요인 ① 기질의 농도 : 기질의 농도에 비례하여 반응의 속도가 증가하고 일정한 기질 농도후에는 반응 속도가 감소한다. ② pH : 최적 pH에서 최대 반응속도를 나타낸다. pH가 변하면 단백질의 입체구조의 변화로 인해 효소의 촉매부위가 파괴된다. ③ 온도 : 일정 온도 이상 올라가면 반응속도가 떨어지는데 효소의 주성분인 단백질이 일정온도 이상에서 구조의 변화가 오기 때문에 효소의 기능을 상실하게 된다. 실험 방법 1. 온도에 따른 효소의 활성 1).. Biology/생명 과학 | 공학 2021. 11. 28. 생명공학실험 | Cell Transformation TIP Transformation을 통해 E.coli 에 원하는 DNA를 주입한다. Competent cell E. coli를 포함한 대부분의 박테리아는 일반적인 환경에서 극히 제한된 양의 DNA만을 받아들인다. 이러한 종류를 효과적으로 transformation 하기 위하여 박테리아는 DNA를 받아들이는 능력을 향상시키는 물리적, 화학적 형태의 처리가 필요하다. 정상적인 bacteria cell에 이러한 물리적, 화학적 처리를 하여 외부의 DNA가 잘 들어갈 수 있도록 만든 cell을 competent cell이라고 한다. Competent cell로 만드는 방법으로는 우선 37℃가 아닌 18℃에서 cell을 키우면 세포막을 빽빽하게 못 만들게 된다(heat shock). 그 후에 칼슘이온으로 처리해서.. Biology/생명 과학 | 공학 2019. 10. 19. 생명공학실험 | Lowry 법을 이용한 단백질 정량 식품중의 단백질은 탄소, 수소, 산소의 각 원소 외에 반드시 일정량의 비율로 질소를 함유하고 있다. 특히 질소는 지방이나 탄수화물 등 식품의 다른 중요 성분에는 포함되어 있지 않으므로, 식품중의 단백질 정량은 전질소량을 정량하고 그 값에 일정의 계수를 곱하여 조단백질의 양을 구한다. 가장 널리 사용되어지는 정량법의 한 가지로서 감도도 좋고, column chromatography에 있어서 단백질의 정량에 적합하다. 또한 이하에 나타낸 물질이 혼재하여도 정량치에 영향을 주지 않는다. 본 법의 원리는 알칼리성에서 단백질의 펩타이드 결합과 구리가 반응해 구리 이온을 생성하는 뷰렛 반응 원리를 이용한 실험이다. 구리 이온은 방향족 아미노산의 산화를 유도하여 인몰리브덴산(인덩스덴산)이 단백질 중의 트립토판과 티록.. Biology/생명 과학 | 공학 2019. 10. 16. 생명공학실험 | 입자추적기법을 이용한 세포역학 TIP 1. 디지털현미경을 활용한 운동 분석 기법 습득 2. 단세포의 운동을 공학적으로 분석 세포이동중의 세포돌출 1. 세포돌출중의 액틴 중합 선단부의 돌출은 액틴과 관련된 단백질(A게2/3화합물)과 액틴 절단 단백질(ADF, cofilin, gelsolin)에 의해 조절되는 액틴중합에 의해 주로 구동된다. Arp 2/3 화합물은 이동하는 세포 선단부에 집중되어 수지상 핵형성과 액틴 섬유의 분기를 유발한다. 액틴에의 cofilin 결합은 기존의 액틴 섬유를 절단하고, 액틴-cofilin 결합의 분리와 serine-3 에서의 cofilin 인산화는 액틴증합을 증진시킨다. 또 다른 액틴 절단 단백질의 gelsolin 역시 섬유하세포의 이동에 필요하다. Gelsolin을 제거하면 F-actin 함량을 증가시키.. Biology/생명 과학 | 공학 2019. 10. 12. 이전 1 다음 반응형
