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  세포생물학실험 | Extraction of genomic DNA Plasmid의 특징 Plasmid는 박테리아 세포 내에 독립적으로 존재하는 환형의 DNA 분자이다. 이들은 대부분 하나 이상의 유전자를 가지고 있으며, 이들 유전자는 종종 숙주세균에 의해 보여지는 유용한 특징을 담당하고 있다. 예를들어 항생제의 정상적인 독성농도에서 생존하는 능력은 항생제 저항성 유전자를 가진 plasmid가 세균 내에 존재하기 때문이다. 실험실에서 이러한 항생제 저항성은 종종 선별표지(Selection marker)로 이용된다. 모든 plasmid는 복제 개시점(origin of replication)이 될 수 있는 최소한 한 개의 DNA 염기서열을 갖고 있어서 세포 내에서 세균의 염색체와는 독립적으로 복제할 수 있다. 어떤 plasmid는 세균의 염색체 속으로 자신을 삽입시켜 복제한.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 12. 10.

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  세포생물학실험 | SDS-Page TIP  SDS-PAGE는 DNA를 전기영동으로 분리하여 크기를 알아보듯이 단백질도 SDS를 이용하여 전하는 모두 잃게 하고 크기에 의해 분리되게 만들어 전기영동을 통해 단백질의 크기를 알아본다.   Sodium dodecyl sulfate-polyacryamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)는 단백질을 정제하는 동안 이를 monitor하고, 정제된 단백질의 동질성(homogeneity)을 알기 위한 가장 좋은 방법이다. SDS-PAGE는 일반적으로 단위체의 분자량을 결정하고, 정제된 단백질의 단위체 구성을 알기 위해 사용된다. SDS-PAGE는 더 깊은 연구를 위한 충분한 단백질을 얻기 위해 scale up될 수 있다.   실험 방법1. 실험 과정1) 각 lane 별로 30㎕.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 30.

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  세포생물학실험 | 단백질 정량 분석 비교 TIP  단백질 정량 원리에 대해 이해하고, 대표적인 단백질 정량법인 BCA법을 이용하여 직접 단백질을 정량해본다.   단백질 정량이란 시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정으로써, 대부분의 생명과학실험의 기본이 되는 과정이라고 할 수 있다. 생물학 분야의 경우, 다른 분야보다 결과를 볼 때까지 뭔가 잘못되었다는 것을 알기 어려워 준비 단계에서의 단백질 정량이 잘못 이루어지면 헛수고를 하거나 잘못된 결과를 얻을 수 있다.  이러한 이유 때문에 단백질 정량을 정확하게 하는 것은 매우 중요하다. 또한, 정확성뿐만 아니라 대부분의 실험에서 반복적으로 사용하게 되므로 간편성 역시 중요하게 여겨지기 때문에 실험에 따라서 다양한 단백질 정량 방법이 사용되고 있다. 대표적인 정량법은 ① Absorb.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 26.

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  세포생물학실험 | Estimation of Protein TIP  단백질이 포함된 미지의 시약에 담긴 단백질의 총량을 알아낸다.   Lowry's method알칼리성에서 단백질의 펩타이드 결합과 구리가 반응해 Cu2+ 이온을 생성하는 뷰렛반응 원리를 이용한 방법이다. 구리이온의 화학변화에 영향을 주는 화합물이 존재할 경우 단백질 정량 측정을 간섭하게 되는데, 이를 위해 분적 전에 제거하거나 영향이 없을 정도로 희석하여야만 한다.  실험 방법1. 실험 과정1) 실험에 사용할 용액들을 제조한다.① Working standard 제조- Bovin serum albumin 10㎖를 증류수 100㎖에 용해시킨다.(stock solution)- Stock solution 10㎖를 증류수 100㎖에 희석시킨다. ② Folin’s phenol 시약 제조- Folin’s ph.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 24.

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  세포생물학실험 | 육상식물의 기관별 세포의 기능과 특징 관찰 TIP 식물 표본으로부터 책상조직, 유세포, 공변세포, 엽록체 등을 관찰하고 구분할 수 있다. 외떡잎식물과 쌍떡잎식물 속씨식물은 1억년 이상 이땅을 지배해오고 있으며 현재 약25만종류가 있다. 그중 수백종류의 씨식물은 식량으로 이용된다. 식물의 구조적 특징에 따라 속씨식물은 외떡잎과 쌍떡잎의 두군으로 분류한다. 이들은 싹이 날 때 배에서 제일 먼저 나오는 떡잎의 수에 따라 분류되는데 외떡잎은 떡잎이 하나이고 쌍떡잎은 떡잎이 두 개다. 외떡잎식물로는 곡류와 풀 종류뿐 아니라 나, 대나무, 야자, 백합 등을 들 수 있다. 씨의 안쪽에 한 개의 떡잎이 있다. 또한 줄기, 꽃, 뿌리 등도 쌍떡잎식물과는 뚜렷하게 구별되어 외떡잎식물의 잎맥은 평행하고 줄기의 관다발조직이 복합 배열되어 있다. 외떡잎식물의 꽃잎은 주.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 13.

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  세포생물학실험 | 세포사의 특징(apoptosis) 관찰 Cell death cell death는 cell proliferation과 balance를 이루며 형태학적으로 necrosis. autophagy, apoptosis 등으로 나뉜다. 비정상적인 cell death는 암, 자가면역질환, 퇴행성신경질환과 연관이 되어 있다. Necrosis necrosis상태에서 형태학적으로 세포의 부피가 커지고, 세포소기관이 부으며 세포막이 파열되고 세포내용물이 손실되며 적당히 염색질이 응축된다. 세포 밖으로 세포의 내용물들이 방출되므로 염증을 유발한다. 오랜 시간 동안 necrosis는 accidental한 조절되지 않은cell death의 형태로 보았으나, 조절된다는 증거가 축적되고 있다. 예를 들어 death domain receptors (TNFR1, Fas/CD9.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 8. 4.