반응형 유전학실험 | gDNA extraction from human oral epithelial cells Genomic DNA Genomic DNA는 유전체(genome)을 구성하고 있는 긴 DNA 서열으로, 개체가 가지고 있는 유전 정보를 포함하는 모든 DNA를 총칭한다. 좁은 의미로는 플라스미드(plasmid) DNA 와 구분하여 세포 내 염색체(chromosome)를 구성하는 염색체 DNA를 의미하기도 한다. 일반적으로 진핵세포의 genomic DNA는 염색체가 위치하고 있는 세포핵(nucleus) 내부에 위치하며 긴 선형 염기 서열으로 구성되어 있다. Genomic DNA와 플라스미드 DNA는 서로 대비되는 성질을 가진다. 먼저 두 DNA는 서로 다른 구조를 가지는데, 플라스미드 DNA는 원형(circular) DNA 구조를 가지고 genomic DNA는 긴 선형(linear) DNA 구조를 가진다... Biology/유전학 2024. 1. 8. 세포생물학실험 | Extraction of genomic DNA Plasmid의 특징 Plasmid는 박테리아 세포 내에 독립적으로 존재하는 환형의 DNA 분자이다. 이들은 대부분 하나 이상의 유전자를 가지고 있으며, 이들 유전자는 종종 숙주세균에 의해 보여지는 유용한 특징을 담당하고 있다. 예를들어 항생제의 정상적인 독성농도에서 생존하는 능력은 항생제 저항성 유전자를 가진 plasmid가 세균 내에 존재하기 때문이다. 실험실에서 이러한 항생제 저항성은 종종 선별표지(Selection marker)로 이용된다. 모든 plasmid는 복제 개시점(origin of replication)이 될 수 있는 최소한 한 개의 DNA 염기서열을 갖고 있어서 세포 내에서 세균의 염색체와는 독립적으로 복제할 수 있다. 어떤 plasmid는 세균의 염색체 속으로 자신을 삽입시켜 복제한.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 12. 10. 식물분자생물학 연습 | Polymerase chain reaction Agarose Gel Analysis Polymerase chain reaction 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법으로서, 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA 합성이 가능하므로 분자 생물학적으로 제한효소의 발견만큼 획기적인 것이라고 할 수 있습니다. 즉 genomic DNA와 같은 아주 큰 DNA로부터 원하는 DNA 부분만을 선택적으로 증폭시킨 후 일반적으로 사용되는 agarose gel이나 polyacrylamide gel 상에서 뚜렷하게 보이는 band로 가시화할 수가 있습니다. 중합효소 연쇄반응을 통하여 in vitro 상에서 특정 부위의 DNA를 ∼ 배까지 수 시간내에 증폭시킬 수.. Biology/분자생물학 2020. 1. 21. 분자생물학개론 | The Polymerase Chain Reaction(PCR) TIP 1. The polymerase chain reaction in outline 2. PCR in more detail 3. Applications of PCR DNA의 원하는 부분을 복제·증폭시키는 분자생물학적인 기술이다. 이 기술은 사람의 게놈과 같은 매우 복잡하며 양이 지극히 미량인 DNA 용액에서 연구자가 원하는 특정 DNA 단편만을 선택적으로 증폭시킬 수 있다. 또한 증폭에 필요한 시간이 2시간 정도로 짧으며, 실험 과정이 단순하고, 전자동 기계로 증폭할 수 있기 때문에, PCR과 여기서 파생한 여러가지 기술은 분자생물학, 의료, 범죄 수사, 생물의 분류 등 DNA를 취급하는 작업 전반에서 지극히 중요한 역할을 담당하고 있다. 1970년대에 gene cloning기술의 개발은 이전에 불가능.. Biology/분자생물학 2019. 11. 21. 분자유전학실험 | CTAB을 이용한 DNA 추출 TIP 1. genomic DNA 추출 과정을 분자 유전학적으로 접근하여 이론으로 배운 DNA에 대해 직접 실험함으로서 기초적이지만 아주 중요한 이론을 확립한다. 2. DNA를 얻고자 CTAB buffer를 이용하여 개개인 혈액의 정제된 genomic DNA를 추출 할 수 있다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 시료 100㎕를 2㎖튜브에 넣고 CTAB buffer 800㎕, Proteinase K를 30㎕ 넣고 균질하게 섞이도록 vortex로 혼합, 65℃ 항온수조에서 30~60분간 항온처리하며 3~4회 혼합 2) phenol : chloroform : isoamyl-alcohol (25:24:1) 용액 800㎕를 넣고 실온에서 5분간 흔들어 준 후 10분간 12000rpm으로 원심분리 3) 새로운 1... Biology/유전학 2019. 11. 18. 유전학실험 | 혈액을 통해 유전자 검사하는 과정 채혈 1. 소독을 위해 70% isopropyl alcohol이 권장되며 채혈할 부위를 중심으로 바깥쪽으로 원형을 그리듯이 닦아낸다. 소독약이 마르지 않았을 때 채혈을 하면 용혈이 발생하므로 소독약이 완전히 마른 후에 채혈을 실시한다. 2. 압박대는 소독약이 마른 후 채혈 직전에 사용하거나, 묶은 상태로 1분 이상 방치해서는 안된다. 3. 채혈은 바늘 굵기가 18-23G인 주사기를 사용하거나 상품화된 진공채혈관과 일회용 채혈바늘을 사용하여 실시한다. 4. 주사기를 사용하여 채혈할 때는 주사바늘의 사면이 위로 향하게 하여 채혈하고자 하는 정맥에 찌른다. 5. 정맥내에 주사바늘이 들어갔음을 확인하고 지혈대를 푼 후에 혈액을 채취한다. 이때 혈액채취를 빨리하면 피가 잘 나오지 않거나 적혈구가 용혈되는 경우가 .. Biology/유전학 2019. 10. 28. 유전학실험 | subcloning I(digestion) TIP 우리가 확인하고자 하는 promoter의 활성을 측정하기 위한 실험과정중 하나로써, 이미 vector에 붙어있는 promoter에서 일부분을 자르기 위해 vector를 restriction enzyme(restriction endonuclease)을 이용하여 잘라낸 후 그 크기들을 확인한다. 1. genomic DNA와 plasmid DNA의 차이 2. subcloning 3. electrophoresis 4. restriction enzyme 5. promoter gene & reporter gene 실험 방법 1. 실험 과정 1) plasmid DNA인 pMB01을 준비한다. 2) Microfuge tube에 DDW 12.5㎕, DNA(pMB01) 5㎕, enzyme(BamHI)을 일정량 넣고.. Biology/유전학 2019. 10. 24. 이전 1 다음 반응형
