반응형 분자생물학실험 | Restriction digestion TIP 1. Plasmid DNA를 restriction enzyme(제한효소)로 처리하여 restriction enzyme의 특성과 plasmid의 특성을 이해한다. 2. Agarose gel 전기영동의 원리를 이해하고, 크기와 모양에 따른 DNA의 위치를 통하여 제한효소 지도를 작성한다. 실험 배경 restriction enzyme은 특이성에 따라 DNA의 특정한 site를 찾아서 잘라준 다. 이 실험에서 쓰이는 enzyme은 DNA상에서 특정한 site를 인식하여 T 와 C사이의 phosphodiester bond를 끊어준다. 그렇게 끊어주면 circular한 plasmid DNA는 잘려서 linear한 형태로 나타난다. agarose gel electrophoresis은 DNA 조각을 분리하고 인.. Biology/분자생물학 2023. 5. 17. 일반생물학실험 | 제한효소반응과 전기영동 본 실험의 주제는 제한효소반응과 전기영동이다. 유전자 클로닝과 유전공학은 특정 염기서열을 인지하고 절단하는 제한효소(restriction enzyme)의 발견에 의해서 가능하게 되었다. 자연에서 이러한 효소들은 파지 혹은 다른 생명체의 DNA가 박테리아 세포 내로 들어오는 것을 막아준다. 그들은 제한(restriction)이라고 불리는 과정으로 외부 DNA를 절단하는 역할을 한다. 각각의 제한효소는 제한효소자리(restriction site, 일반적으로 4～8개 염기서열)라는 특정 염기서열을 인지하고 DNA 두 가닥을 자른다. 박테리아는 제한효소자리에 있는 아데닌이나 시토신에 메틸기(-CH3)를 첨가함으로써 제한효소로부터 자신의 DNA를 보호한다. 제한효소는 DNA의 특정한 염기배열을 식별하고 이중사슬을.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 1. 31. 일반생물학실험 | PCR & Molecular Cloning PCR 1. Primer design 원리 목표로 하는 DNA 시퀀스의 시작과 끝부분에 상보적으로 결합해서 DNA 중합효소가 DNA 중합을 시작할 수 있도록 '시발체' 역할을 해주는 짧은 다염기체이다. DNA 복제에 primer가 필요한 이유는 과정을 촉매하는 효소인 DNA중합효소가 이미 존재하는 유전자 가닥에 새로운 nucleotide를 붙이는 역할만 할 수 있기 때문이다. DNA중합효소는 primer의 3'end에서 시작하여 반대편 가락을 복제한다. 목표 시퀀스에 상보적인 아무 염기서열이나 마구잡이로 정해서 primer를 만드는 게 아니라 이 primer의 염기 구성이 어떠냐에 따라서 PCR의 효율이 큰 영향을 받기 때문에 최적의 primer를 만들기 위해서는 갖춰야 할 조건들이 있다. 먼저 길이는 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 1. 26. 생명과학실험 | DNA cloning와 전기영동 플라스미드(Plasmid)는 환상 DNA 분자들이며 독자적으로 염색체를 복제할 수 있고, 또 크기는 세균성 염색체 크기의 0.05-10%에 해당한다. 세균의 세포 내에 염색체와는 별개로 존재하면서 독자적으로 증식할 수 있는 DNA로, 고리 모양을 띠고 있으며 세균의 생존에 필수적인 유전자는 아니며 또 플라스미드는 다른 종의 세포 내에도 전달된다. 이러한 특성을 이용하여 플라스미드는 유전공학에 폭넓게 이용되고 있다. cDNA는 Complimentary DNA, 즉 상보적 DNA란 뜻이며, mRNA를 주형으로 하여 상보적인 DNA (cDNA)를 합성하는 효소인 Reverse Transcriptase를 mRNA에 A, T, C, G와 함께 첨가하여 적정 환경에 놓아두면 cDNA가 합성된다. 우선 mRNA를 r.. Biology/생명 과학 | 공학 2020. 9. 13. 일반생물학실험 | 제한효소에 의한 DNA의 절단 TIP 1. 시험관 내에서 유전자를 조작할 때 쓰이는 도구인 제한효소로 Plasmid DNA를 잘라보고 분석한다. 또한 절단한 Vector DNA와 insert DNA를 ligase로 ligation해보고 대장균에서 그 형질을 발현 시켜 본다. 2. 생명공학의 기초가 되는 분자생물학의 기본실험인 미생물에서의 plasmid DNA를 절단하는 실험이다. 본 실험은 가장 기초가 되는 실험으로서 이 후에 하게될 전기영동 실험에서 응용하게 된다. 전기영동 실험에서는 거대분자들을 연구하기 위하여 사용하는 방법으로 PCR도 사용하게 된다. 이 실험을 통하여 DNA의 분리 및 확인을 알아보려고 한다 제한효소 (restriction enzyme) 제한효소 (restriction enzyme) 혹은 제한 내부핵산 가수분해.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 8. 21. 미생물실험 | Recovery and digestion of the amplified DNA TIP PCR로 증폭된 DNA를 회수하여 절단한다. 그로 인해 형질전환 때, vector을 넣을 DNA를 얻고, 절단하여 vector를 넣고자 함이다. 이 때, vector DNA와 insert DNA 모두 같은 효소로 같은 위치를 절단하고자 한다. Restriction enzyme(제한효소) DNA 특정부위를 자르고 붙일 수 있다. DNA를 자른다는 것은 nucleotide들이 연결되어 있는 인산디에스테르결합(phosphodiester bond)을 끊어내는 것을 의미하는데, 이런 역할을 하는 효소를 nuclease라고 하며 바깥쪽을 자르면 exonuclease, 안쪽을 자르면 endonuclease라고 부른다. endonuclease의 대표적인 것이 바로 제한효소(restriction enzyme / .. Biology/미생물학 2020. 1. 27. 유전학실험 | subcloning I(digestion) TIP 우리가 확인하고자 하는 promoter의 활성을 측정하기 위한 실험과정중 하나로써, 이미 vector에 붙어있는 promoter에서 일부분을 자르기 위해 vector를 restriction enzyme(restriction endonuclease)을 이용하여 잘라낸 후 그 크기들을 확인한다. 1. genomic DNA와 plasmid DNA의 차이 2. subcloning 3. electrophoresis 4. restriction enzyme 5. promoter gene & reporter gene 실험 방법 1. 실험 과정 1) plasmid DNA인 pMB01을 준비한다. 2) Microfuge tube에 DDW 12.5㎕, DNA(pMB01) 5㎕, enzyme(BamHI)을 일정량 넣고.. Biology/유전학 2019. 10. 24. 이전 1 다음 반응형
