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  생화학실험 | 단백질 분리정제 및 기능분석 - buffer 만들기 TIP 1M의 Tris-HCl (pH7.4), NaCl, MgSO4, Stock solution 을 제조한 후 다양한 NaCl 농도의 elution buffer 를 만든다. DEAE sepharose anion exchange chromatography 이온-교환 크로마토그래피(ion-exchange chromatography)법은 주어진 pH에서 단백질이 가지는 알짜 전하(net electric charge)의 하전성과 전하량의 차이에 의해 분리하는 방법이다. 관 속의 기질은 합성 중합체(수지,resin)로서 전하를 띤 기를 가지고 있는데; 양이온 기를 가지는 경우 양이온 교환체(cation exchanger)라고 부르며, 음이온 기를 가지는 경우 음이온 교환체(anion exchanger)라고 부른다.. Biology/생화학 2023. 4. 11.

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  일반화학실험 | 이온교환과 EDTA 적정 TIP 이온 교환 크로마토그래피의 원리를 배우고, EDTA 적정을 통하여 착물 형성을 이용한 금속 이온의 분석 방법을 배운다. 이온교환 어느 종류의 물질을 전해질 용액에 넣어 두면 그 물질중의 이온은 용액 중으로 나가고 용액중의 이온이 그 물질의 속으로 들어간다. 이 현상을 이온교환이라 하고 이러한 작용을 갖는 물질을 이온교환체라고 한다. 교환하는 이온의 종류에 따라서 양이온교환과 음이온 교환으로 나누어진다. 예로부터 사용된 이온교환체로는 부식된 토양, 이탄, 산성 백토 등이 있지만 최근 화학합성에 의해 만들어진 이온교환수지의 발명에 의해 응용범위가 확대되었다. 이온교환은 금속이온이나 염류뿐만 아니라 해리성의 유기 화합물에도 널리 응용된다. 양 이온교환수지와 음 이온교환수지를 동시에 사용함으로써 수용액을.. Chemistry/일반화학 2021. 6. 21.

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  분석화학실험 | 이온교환 수지의 성질(Properties of an Ion-Exchange Resin) TIP 수많은 술폰산기(-SO3H)를 가진 유기 고분자인 양이온 교환수지의 성질을 조사한다. 이온크로마토그래피 이온 크로마토그래피는 고속액체크로마토그래피(HPLC)의 한 분야로서 용리액이라는 이동상이 존재하고, 이온 컬럼안에 고정상이 존재한다. 시료용액은 용리액에 의해 이온 컬럼으로 이동되어지고, 이온의 친화도의 차이에 따라 이온들의 이동속도가 달라져 각 이온별 분리가 일어나는 방법이다. 용리액은 펌프에 의해서 이온크로마토그래피 안으로 흐르게 되고 시료 주입부로 들어온 시료는 용리액에 밀려서 이온 컬럼으로 이동되어진다. 이온컬럼내에서 이온의 친화도에 따라 이온의 이동속도에 분리가 일어난 후 컬럼을 나간 시료와 용리액은 서프레서(suppressor)를 통과하게 된다. 서프레서는 용리액의 전도도를 낮추고, .. Chemistry/분석화학 2020. 10. 2.

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  분석화학실험 | 착화법 적정과 이온교환수지(Complexometric Titration By Ion Exchange Resin) TIP 1. 이온교환 크로마토그래피의 원리를 배우고 EDTA적정을 통하여 착물 형성을 이용한 금속이온의 분석방법을 배운다. 2. 미지물질은 H+, Na+, Mg2+, Zn2+의 혼합물이고 각 성분을 분석한다. 적정 (Titration) 분석물에 의해 소모되는 농도를 알고 있는 시약의 양을 측정하는 것에 근거하는 광범위하고 유용한 정량 과정을 말한다. 뷰렛에 표준액을 넣고 그것을 시료용액에 적가하여 종점을 구하지만 경우에 따라 역으로 하는 경우가 있다. 어떠한 화학 반응으로도 가능하나 중요한 필 수 조건은 반응이 빠르며 완결이 되어야 한다. 실험 방법 1. 산과 염 당량의 측정 1) 6M HCl 25㎖를 이온교환수지관에 통과 2) 증류수 25㎖ 씩 5～6번 이온교환수지관에 가함 3) 리트머스 시험지로 용액.. Chemistry/분석화학 2020. 9. 29.

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  생화학실험 | β-Galactosidase purification & activity & SDS PAGE TIP 음이온교환 크로마토그래피를 이용하여 우리가 얻고자 하는 β-galactosidase를 분리해낸 후 ONPG와 반응시켜 효소의 활성을 확인하고 SDS-PAGE를 이용하여 정제된 β-galactosidase의 밴드 존재유무와 위치를 알아보는 것이었다. 크로마토그래피(Chromatography) 크로마토그래피는 혼합물로부터 그 성분들을 순수하게 분리하거나 확인, 정량하는데 사용하는 편리한 방법 중의 하나이다. 이 방법에 의한 물질의 불리는 혼합물이 정지상(stationary Phase)이나 이동상(mobile phase)에 대한 친화성이 서로 다른 점을 이용하는 것으로, 이 친화성에 중요한 영향을 미치는 인자는 흡착, 이온화 및 분배계수들로써 여러 종류의 크로마토그래피는 이들 인자가 서로 합하여 작용하.. Biology/생화학 2020. 3. 15.

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  생화학실험 | Protein Purification & SDS-PAGE TIP Protein Purification을 이해하고 SDS-PAGE 를 이용하여 Protein 을 정제해본다 전기영동 전기영동(electrophoresis)은 이온교환크로마토그래피와 마찬가지로 단백질분자의 전하를 이용한 분리, 분석법이다. 단백질 분자는 보통 등전점 이외의 pH에서는 양 또는 음의 전하를 가지고 있어서 일정한 pH의 완충액 중에서 직류전류를 가하면 양극 또는 음극방향으로 이동한다. 즉 단백질 분자의 전하량, 분자의 크기에 따라 전장 중에서 이동하는 속도가 다른 점을 이용하여 분리, 분석하는 것이다. 단백질을 여과지, 전분이나 agarose와 같은 다당류 gel, polyacrylamide gel 등과 같은 것을 담체로 하여 전기영동하면 단백질은 band를 형성하여 분리되므로 분리, 분.. Biology/생화학 2019. 11. 6.