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  생화학실험 | PCR과 전기영동 TIP PCR은 아주 소량의 시료로도 우리가 원하는 DNA 서열을 엄청난 양과 높은 정확도로 증폭시킬 수 있다. 전기영동은 전하를 띤 분자화합물에 일정한 전압을 걸어주어 분자량, 전하량등의 물리화학적 성질의 차이에 따라 분리시키는 방법이다. PCR 정의 PCR(polymerase chain reaction, 중합효소 연쇄반응)이란 DNA polymerase를 이용하여 원하는 부위의 DNA를 선택적으로 대량 복제 하는 방법이다. 1983년 PCR이 고안되어 적은 양으로 존재하는 DNA서열 탐지와 cloning이 가능하게 되었다. 방법은 표적 DNA서열의 증폭(amplification)에 기초를 두고 있다. 증폭하고자 하는 DNA내 표적 strand 3' 말단에 상보적인 두 개의 특정 oligonucleot.. Biology/생화학 2022. 10. 5.

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  일반생물학실험 | 단백질 추출과 전기 영동 TIP 1. 전기영동(electrophoresis)은 단백질을 크기차이를 이용하여 구별하는 방법이다. 2. 본 실험의 목적은 전기영동을 이용해 단백질의 크기를 알아보고, 서로 다른 샘플과 비교하여 그 양상을 비교해보는 데 있다. 단백질의 구조 1. 1차 구조 : primary structure라고도 합니다. 유전자로부터 전사(transcription)를 거쳐 mRNA가 되고, mRNA로부터 해독(translation)된 사슬형 아미노산 서열(linear amino acids)을 말한다. 아미노산간에 공유결합을 이루고 있으며, 이를 펩타이드 결합이라고 한다. 2. 2차 구조(secondary structure) : alpha helix, beta sheet, beta turn, random coil등으로 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 8. 6.

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  생명과학실험 | Protein Purification과 Electrophoresis(SDS-PAGE) TIP 추출해낸 Protein을 Purification하여 원하는 단백질만을 얻어내는 방법을 알아보고, SDS-PAGE Gel을 이용해 Electrophoresis하여 직접 눈으로 확인한다. 친화성 크로마토그래피 (affinity chromatography) 1) 친화성 크로마토그래피는 단백질과 지지체 위에 결합되어 있는 ligand 사이의 특이한 화학적 상호작용에 기초로 하는 분리 방법 예) 효소-억제제, 항원-항체 반응 2) Ligand 와 단백질 사이의 친화성 결합은 분자의 크기와 모양에 특이적인 결합 (Specific binding) 3) Column 내 정지상에 단백질과 상호작용하는 ligand 를 결합시킨 지지체 사용 4) 친화성 크로마토그래피에서 ligand 를 붙일 때 고체 matrix 에.. Biology/생명 과학 | 공학 2020. 9. 14.

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  생명과학실험 | DNA cloning와 전기영동 플라스미드(Plasmid)는 환상 DNA 분자들이며 독자적으로 염색체를 복제할 수 있고, 또 크기는 세균성 염색체 크기의 0.05-10%에 해당한다. 세균의 세포 내에 염색체와는 별개로 존재하면서 독자적으로 증식할 수 있는 DNA로, 고리 모양을 띠고 있으며 세균의 생존에 필수적인 유전자는 아니며 또 플라스미드는 다른 종의 세포 내에도 전달된다. 이러한 특성을 이용하여 플라스미드는 유전공학에 폭넓게 이용되고 있다. cDNA는 Complimentary DNA, 즉 상보적 DNA란 뜻이며, mRNA를 주형으로 하여 상보적인 DNA (cDNA)를 합성하는 효소인 Reverse Transcriptase를 mRNA에 A, T, C, G와 함께 첨가하여 적정 환경에 놓아두면 cDNA가 합성된다. 우선 mRNA를 r.. Biology/생명 과학 | 공학 2020. 9. 13.

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  일반생물학실험 | 제한효소에 의한 plasmid DNA 절단 - 전기영동 TIP 전기영동의 원리를 이해하고, 직접 시험관 내 plasmid DNA를 전기영동하여 본다. 제한효소를 이용한 DNA의 절단 및 붙이기 제한효소 1 unit는 1 ㎍의 DNA를 최적 온도에서 한 시간에 절단할 수 있는 양이다. 상품화된 효 소는 효소마다 다르지만 대개 10 units/㎕ 내외의 농도로 공급된다. 제한효소 처리 반응은 절단하 려고 하는 DNA, 반응완충용액, 제한효소로 구성된다. 각각의 성분에 대하여 다음과 같은 점들을 고 려해야한다. ① 자를 DNA 내에 제한효소로 잘리는 부위가 몇 개가 되는지 파악한다. 같은 양의 DNA에 제한효소 절단부위가 무수히 많을 수도 있고 없을 수도 있으며, 이들 경우에 같은 양의 효소작용을 기대할 수 없을 것이다. 그러나 보통 실험에서는 계산된 양보다 더 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 8. 26.

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  일반생물학실험 | Southern blotting TIP Rice tissue로부터 genomic DNA를 추출하여 전기 영동한 후 southern blotting한다. probe와 hybridization 하여 특정 DNA의 존재유무와 정량을 알아본다. Southern blot 1975년에 DNA 조각을 전기 영동하여 분리한 후 nitrocell㎕ose filter에 옮겨서 특정DNA 조각을 확인하는 실험 기법이 southern에 의해 개발되었다. Blotting 또는 hybridization이란 한 가닥으로 된 핵산이 이와 상보적인 염기 서열의 또 다른 한 가닥의 핵산과 적당한 조건에서 만나게 되면 이중나선을 형성하는 현상을 말한다. Southern hybridization은 위의 현상을 이용하는 기법으로, 먼저 genomic DNA을 적당한 res.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 4. 28.

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  유전공학실험 | Plant Genomic DNA isolation TIP 1. 식물에서의 DNA 추출하는 방법을 안다. 2. Agaros Gel Electrophoresis 방법과 그에 따른 식물 DNA 양상을 안다. 식물의 DNA 식물은 진핵생물이므로 그 DNA 또한 진핵생물의 일반적인 DNA와 거의 유사하다고 할 수 있다. 최근에 이 식물세포가 동물과 거의 유사한 유전자의 구조와 기능을 가지고 있으나, 광합성 등 식물에 특이적인 기능에 관련된 유전자 및 유전현상 또한 많이 존재하고 있기 때문에 그러한 현상들을 근본적으로 분자의 측면에서 접근하는데 노력하고 있다. 또한 동물과 비교하여 식물은 외부유전자의 삽입을 통한 새로운 형질을 얻는 과정이 용이한 장점을 가지고 있다. 이러한 장점으로 인해 재조합 DNA기술을 이용하고 식물유전자를 cloning하여 유전자 조작 및 .. Biology/유전학 2019. 12. 3.

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  분자유전학실험 | DNA ligation 1970년대 쯤 "유전공학(genetic engineering)"이라는 분야가 등장했다. 요즘에도 쓰이지만 이 말은 "유전자 재조합 기술(recombinant DNA technology)"를 의미한다. 이러한 재조합 분자를 생성하기 위하여 클론 될 DNA뿐만 아니라, 벡터도 통제된 방법으로 특정한 지점에서 절단된 후 함께 연결되어야 한다. 절단과 연결은 최근 몇 년 동안 다양하게 발달해 온 DNA조작 기술의 두 가지 예이다. 절단과 연결뿐만 아니라 DNA분자를 짧게 혹은 길게 할 수 있으며 RNA나 새로운 DNA 분자로 사본할 수 있고, 특별한 화학기능기를 첨가 혹은 제거함으로써 수정할 수도 있다. 시험관 속에서 수행할 수 있는 이러한 모든 조작들은 유전자 클로닝뿐만 아니라 DNA생화학, 유전자 구조, .. Biology/유전학 2019. 11. 10.

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  유전학실험 | subcloning I(digestion) TIP 우리가 확인하고자 하는 promoter의 활성을 측정하기 위한 실험과정중 하나로써, 이미 vector에 붙어있는 promoter에서 일부분을 자르기 위해 vector를 restriction enzyme(restriction endonuclease)을 이용하여 잘라낸 후 그 크기들을 확인한다. 1. genomic DNA와 plasmid DNA의 차이 2. subcloning 3. electrophoresis 4. restriction enzyme 5. promoter gene & reporter gene 실험 방법 1. 실험 과정 1) plasmid DNA인 pMB01을 준비한다. 2) Microfuge tube에 DDW 12.5㎕, DNA(pMB01) 5㎕, enzyme(BamHI)을 일정량 넣고.. Biology/유전학 2019. 10. 24.