반응형 일반생물학실험 | 혈액에서 DNA 추출 TIP 1. 혈액에서 DNA를 추출한다 2. 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction; PCR) 산물을 만든다. PCRDNA 사슬 중에서 목적하는 일부분만을 대량으로 증폭시키는 방법으로 뮬리스에 의해 고안된 방법이다. 처음에는 대장균에서 분리한 DNA 중합효소 I을 사용하였으므로 사이클이 지날 때마다 효소를 첨가해야 하는 불편 때문에 널리 이용되지 않았으나 사이키가 높은 온도에서도 그 활성이 없어지지 않는 Taq DNA 중합효소를 발견한 후 실험방법이 보편화되었다. 실험 방법1. 시작하기 전에1) 프로테아제 K 1병을 뉴클레아제 프리워터 1,250pl에 완전히 녹인다.2) WA1 버퍼에 30㎖ absolute ethanol 넣는다. 2. 전혈에서 DNA 추출 1) 단백.. Biology/일반 | 세포 생물학 2024. 7. 2. 일반생물학실험 | DNA 추출 TIP 플라스미드라는 유전체이외의 자가복제 DNA의 분리를 통하여 DNA의 추출 및 정제방법의 원리를 배우고, DNA의 이화학적 특성을 이해한다. DNA의 발견1869년 스위스의 화학자인 미셔는 고름에서 채취한 백혈구 핵의 단백질 을 펩신으로 분해한 결과 인을 함유한 물질이 남는 것을 발견하고, 이 물질이 유전 물질일지도 모른다고 추측했다. 그 후 1914년에 독일 화학자인 포일겐은 DNA의 양에 따라 세포핵의 염색 정도가 달라지는 ‘포일겐의 염색법’을 발명하여 DNA의 양을 계산하였다. 그 결과 한 생물체 내의 세 포핵은 모두 같은 양의 DNA를 가지고 있으며, 난자와 정자는 그 절반만 을 가지고 있다는 것을 밝혔다. DNA의 존재가 알려졌음에도 불구하고 1940년대까지 많은 과학자들은 조성이 단.. Biology/일반 | 세포 생물학 2024. 6. 10. 화공생명공학기초실험 | 염색체 DNA의 정제 및 분석 TIP 박테리아로부터 염색체 DNA를 분리, 정제 하는 과정에서 각 시약과 Enzyme의 작용과 실험과정을 이해하고 PCR과 전기영동법에 대해 알아보며 장치의 조작 방법을 습득한다. DNA는 생명체의 모든 유전정보를 가지고 있는 하나의 거대한 정보저장물질이다. 이러한 DNA를 분석하기 위해선 다량의 DNA를 확보하는 기술이 중요한데 1984년 Kery M㎕lis에 의해 PCR이라는 방법이 도입된 이래 원하는 부분만큼의 DNA부분을 증폭시킬 수 있는 기술이 확보 되었다. 본 실험에서는 DNA를 정제하여 PCR을 이용해 다량 증폭시키고 Agarose gel 전기영동법을 이용하여 DNA를 분석해본다. 실험 방법 1. 세포에서의 DNA추출 1) OD가 1.0이 조금 넘은 배양 세포를 마이크로 튜브에 넣고, 10.. Engineering/화학생물공정 2022. 10. 2. 일반생물학실험 | 타액 조직 혈액 sample로부터의 DNA 추출 본 실험은 생명을 이루는 가장 핵심 물질인 DNA를 RFLP 방법을 이용해 ADH와 ALDH2의 유전자형 분석을 하고 각종 sequencing 방법을 이용해 polymorphism을 찾아내기 위한 과정의 첫 단계로 DNA를 3가지의 세포에서 분리, 추출해내는 실험이다. 분리, 추출해낼 세포는 타액의 상피세포와 소의 근육조직 세포, 그리고 혈액의 백혈구 세포이고 각 세포들은 pre-lysis, cell-lysis, isolating gDNA 과정을 거쳐 DNA를 분리, 추출해낸다. 상피세포의 경우 먼저 세포를 얻기 위해 1.5㎕ tube에 타액(침)을 넣어주고 타액 안의 상피세포를 NaCl buffer와 섞어준 뒤, 충분히 반응시키고 원심분리 시켜 상층액을 제거해 cell lysis를 시킬 준비를 마치고 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 5. 5. 일반생물학실험 | DNA 추출과 전기영동 TIP DNA 추출법을 알고, 전기영동의 원리를 이해한다. DNA 추출 1. Plasmid 세균의 세포 내에 염색체와는 별개로 존재하면서 독자적으로 증식할 수 있는 DNA로, 고리 모양을 띠고 있으며 세균의 생존에 필수적인 유전자는 아니다. 유전공학에서는 세균 내 플라스미드를 세포 밖으로 빼내고 제한효소로 끊은 뒤, 필요로 하는 유전자를 삽입하여 이를 다시 세균에 넣어 배양하는 유전자재조합 기술을 사용한다. 2. Plasmisd의 특징 ① 복제기점(original of replication)을 갖기 때문에 증식할 수 있다. ② 항생제 내성 유전자(antibiotic resistance gene)을 가져 selection marker로 사용될 수 있다. ③ Multi cloning site(MCS)가 존재.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 5. 1. 일반생물학실험 | 딸기 DNA 추출 TIP 딸기 DNA를 추출하여 보고 정량분석(UV), 정성분석(전기영동)으로 결과를 알아본다. DNA 구조와 기능 DNA는 유전물질의 기능을 한다. 핵산은 자연계의 모든 분자들 중에서 자가복제를 할 수 있는 유일한 분자이다. 부모와 그 자손의 유사성은 DNA의 정확한 복제 및 복제된 DNA가 한 세대에서 다음 세대로 전달되는데 기초하고 있다. 유전 정보는 DNA라는 화학적 언어로 암호화 되어있고 신체의 모든 세포에 존재한다. DNA는 생화학적, 해부학적, 생리학적 특징과 그리고 어느 정도의 행동 특징을 나타내는 프로그램을 내포하고 있다. DNA는 4가지 종류의 뉴클레오티드로 이루어진 선 모양의 중합체이다. 즉 반복적 단위로 이루어진 커다란 분자이다. DNA는 2‘ - 데옥시리보스, 인산 그리고 질소원소를.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 4. 29. 일반생물학실험 | 브로콜리 DNA 추출 TIP 1. 브로콜리의 DNA를 추출하여 육안으로 관찰할 수 있다. 2. DNA 추출 시 에탄올 대신 증류수를 넣으면 어떻게 될까? DNA 추출의 원리 막자사발을 이용하여 물리적 파괴를 시켜준다. 물리적 파괴된 세포를 계면활성제를 이용하여 화학적 파괴를 시켜주는데 여기서 계면활성제를 쓰는 이유는 인지질 이중층의 파괴를 위해 계면활성제를 쓰는 것이다. NaCl은 전해질로서 용매에 녹으면 이온으로 해리가 되는데 Na는 DNA를 히스톤 단백질로부터 분리시켜주며 Cl은 인산과의 반발력으로 DNA를 뭉치게 해주는 역할을 한다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 브로콜리를 가위로 잘게 잘게 잘라준다. 2) 브로콜리 15g을 저울로 측정한 후 막자사발에 넣고 다시 한 번 잘게 자른 후 곱게 갈도록 한다. 3) 증류수 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 2. 2. 일반생물학실험 | 대장균 DNA의 추출과 정량 본 실험은 대장균(Escherichia coli)의 DNA(deoxyribonucleic acid)를 추출하고, 겔 전 기영동법(gel electrophoresis)으로 DNA의 추출 여부를 알아보고자 하는 실험이었다. 먼저 Escherichia coli 배양액에서 Escherichia coli를 원심분리하여 얻었다. supernatant를 제거 한 후, Escherichia coli를 EDTA, SDS, NaOH 용액 등으로 세포벽과 단백질 등을 파괴한 다. 그 후 NaCl과 etahnol을 넣어 DNA를 농축시켜 얻는다. 이렇게 얻은 DNA를 RT에서 hydration 시킨 후 gel electrophoresis를 이용해 DNA의 상대적 질량, 양 등을 알아보았다. 그리고 gel electrophor.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 12. 30. 화학공학실험 | DNA 정제 및 분석 TIP 박테리아로부터 염색체 DNA를 분리․정제 하는 과정에서 각 시약과 Enzyme의 작용과 실험과정을 이해하고 PCR과 전기영동법에 대해 알아보며 장치의 조작 방법을 습득한다. Central dogma 유전정보(genetic information)는 DNA에 의해 암호화되어 저장되며, DNA 복제(replication)에 의해 다음 세대로 전달된다. 또한 전사(transcription)의 과정을 통해 DNA에 있던 유전정보는 RNA로 옮겨가고 다시 번역(translation)의 과정을 거치면서 만들어진 단백질(protein)에 의해 유전정보가 실체화되어 몸속에서 기능을 하게 된다. 이처럼 유전정보는 DNA에서 RNA, 단백질로 전환되면서 생명활동을 유지시키는데 필수적인 유전정보의 흐름을 형성하는데 이.. Engineering/화학 공학 | 단위조작 | 유체역학 2020. 6. 7. 일반생물학실험 | Southern blotting TIP Rice tissue로부터 genomic DNA를 추출하여 전기 영동한 후 southern blotting한다. probe와 hybridization 하여 특정 DNA의 존재유무와 정량을 알아본다. Southern blot 1975년에 DNA 조각을 전기 영동하여 분리한 후 nitrocell㎕ose filter에 옮겨서 특정DNA 조각을 확인하는 실험 기법이 southern에 의해 개발되었다. Blotting 또는 hybridization이란 한 가닥으로 된 핵산이 이와 상보적인 염기 서열의 또 다른 한 가닥의 핵산과 적당한 조건에서 만나게 되면 이중나선을 형성하는 현상을 말한다. Southern hybridization은 위의 현상을 이용하는 기법으로, 먼저 genomic DNA을 적당한 res.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 4. 28. 일반생물학실험 | DNA 추출 및 PCR TIP 쥐의 근육세포에서 DNA를 추출하여 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction : PCR) 실험에 이용할 product를 만들고 전기영동으로 그 결과를 확인한다. DNA 복제 DNA가 단백질의 아미노산 배열순서를 결정하는 것은 먼저 DNA 2중나선의 일부분이 풀리고, 풀린 두 외가닥 사슬의 어느 한쪽 사슬에서 전령 RNA(messenger RNA:mRNA)가 만들어진다. 이 mRNA는 DNA와 마찬가지로 염기-펜토오스-인산으로 된 뉴클레오티드의 기다란 연결체인데 펜토오스가 리보오스이며, 염기의 종류가 A,G,C 그리고 U(DNA의 T 대신 U이다)인 점이 다르다. 또 DNA처럼 2중나선이 아니고 외가닥 사슬로만 존재한다. DNA의 한 쪽 가닥 위에서 만들어진 mRNA는 그 염.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 4. 22. 식품분석학실험 | DNA extraction & qRT-PCR TIP 경상도 지방 김치에서 균주를 분리하여 DNA를 추출하고, qRT PCR을 통하여 Lactobacillus와 같이 프로바이오틱스의 특성을 보이는 균주가 존재하는지를 알아본다. qRT-PCR을 이용하는 이유 균수 계수를 측정하는 방법으로 cell culture 없이 균수를 측정하는 non-culture-based 방법을 더 많이 이용하는 추세이다. Non-culture-based 방법을 사용하면 배양이 되지 않아 실험실 수준에서는 관찰이 되지 않는 미생물까지 측정할 수 있기 때문이다. Non-culture-based 방법은 먼저 박테리아의 DNA를 추출하는 단계를 거처서 Quantitative real-time PCR(qRT-PCR)을 사용하여 실시간으로 증폭되는 DNA를 볼 수 있다. End-poi.. Engineering/식품 영양 | 공학 2020. 4. 11. 유전공학실험 | Plant Genomic DNA isolation TIP 1. 식물에서의 DNA 추출하는 방법을 안다. 2. Agaros Gel Electrophoresis 방법과 그에 따른 식물 DNA 양상을 안다. 식물의 DNA 식물은 진핵생물이므로 그 DNA 또한 진핵생물의 일반적인 DNA와 거의 유사하다고 할 수 있다. 최근에 이 식물세포가 동물과 거의 유사한 유전자의 구조와 기능을 가지고 있으나, 광합성 등 식물에 특이적인 기능에 관련된 유전자 및 유전현상 또한 많이 존재하고 있기 때문에 그러한 현상들을 근본적으로 분자의 측면에서 접근하는데 노력하고 있다. 또한 동물과 비교하여 식물은 외부유전자의 삽입을 통한 새로운 형질을 얻는 과정이 용이한 장점을 가지고 있다. 이러한 장점으로 인해 재조합 DNA기술을 이용하고 식물유전자를 cloning하여 유전자 조작 및 .. Biology/유전학 2019. 12. 3. 분자유전학실험 | CTAB을 이용한 DNA 추출 TIP 1. genomic DNA 추출 과정을 분자 유전학적으로 접근하여 이론으로 배운 DNA에 대해 직접 실험함으로서 기초적이지만 아주 중요한 이론을 확립한다. 2. DNA를 얻고자 CTAB buffer를 이용하여 개개인 혈액의 정제된 genomic DNA를 추출 할 수 있다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 시료 100㎕를 2㎖튜브에 넣고 CTAB buffer 800㎕, Proteinase K를 30㎕ 넣고 균질하게 섞이도록 vortex로 혼합, 65℃ 항온수조에서 30~60분간 항온처리하며 3~4회 혼합 2) phenol : chloroform : isoamyl-alcohol (25:24:1) 용액 800㎕를 넣고 실온에서 5분간 흔들어 준 후 10분간 12000rpm으로 원심분리 3) 새로운 1... Biology/유전학 2019. 11. 18. 이전 1 다음 반응형
