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  일반생물학실험 | Bradford법을 이용한 단백질의 정량 분석 TIP  Bradford법을 이용하여 단백질 정량을 하고 이를 바탕으로 Standard curve를 그린다.   단백질 정량을 하는 이유단백질 정량이란 시료 내에 포함된 단백질의 양,또는 농도를 구하는 과정으로써, 대부분의 생화학 실험에 기본이 되는 과정이라고 할 수 있다. 생물학 분야의 경우 다른 분야와 달리 실험 결과를 볼 때까지 뭔가 잘못되었다는 것을 알기 어려워, 준비 단계에서의 단백질 정량이 잘 못 이루어지면 헛수고를 하거나 잘못된 결과를 얻을 수 있다. 이러한 이유 때문에, 단백질을 정확하게 정량하는 것은 매우 중요하다.  실험 방법1. 실험 과정1) 주어진 BSA 2㎍/㎖ 용액 0.8 ㎖ , 증류수 3.2 ㎖ 를 마이크로 피펫으로 취하여 혼합하여 희석한다.(BSA 농도는 400㎍/㎖이 된다... Biology/일반 | 세포 생물학 2024. 6. 17.

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  일반생물학실험 | 단백질 추출 및 정량 TIP  Cell에서 단백질을 추출하고 Bradford assay를 통해 이를 정량한다.   Coomassie Brilliant Blue G-250Bradford mathod에서 사용되는 염료이다. 산성 조건 하에서 갈색인 반면, 단백질과 결합하면 전체적으로 음전하를 띠며 푸른색으로 변하게 된다. 또한 이러한 성질 때문에 Polyacrylamide gel electrophoresis를 사용하여 단백질 또는 단백질 복합체를 분리하는데 사용할 수 있다. 단백질 농도가 많을수록 더욱 진한 파란색을 띤다. Coomassie Blue가 단백질에게 전자를 주어 단백질의 중성 상태를 무너뜨리면 단백질의 소수성 부위가 노출되는데, 노출된 부분에 Coomassie Blue가 비공유 결합을 이룬다. 또한 양전하를 띠는 아.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 5. 9.

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  세포생물학실험 | 단백질 정량 분석 비교 TIP  단백질 정량 원리에 대해 이해하고, 대표적인 단백질 정량법인 BCA법을 이용하여 직접 단백질을 정량해본다.   단백질 정량이란 시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정으로써, 대부분의 생명과학실험의 기본이 되는 과정이라고 할 수 있다. 생물학 분야의 경우, 다른 분야보다 결과를 볼 때까지 뭔가 잘못되었다는 것을 알기 어려워 준비 단계에서의 단백질 정량이 잘못 이루어지면 헛수고를 하거나 잘못된 결과를 얻을 수 있다.  이러한 이유 때문에 단백질 정량을 정확하게 하는 것은 매우 중요하다. 또한, 정확성뿐만 아니라 대부분의 실험에서 반복적으로 사용하게 되므로 간편성 역시 중요하게 여겨지기 때문에 실험에 따라서 다양한 단백질 정량 방법이 사용되고 있다. 대표적인 정량법은 ① Absorb.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 26.

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  일반생물학실험 | Bradford 법을 이용한 단백질 정량분석 - The quantitative analysis of proteins by Bradford method TIP 표준 단백질용액(standard protein solution)을 이용하여 단백질 농도 검량선을 작성하고 미지 시료의 단백질 농도를 측정한다. 단백질 분석 기존 켈달 정량분석 방법에서는 시료 중에 함유되어 있는 총 질소함량을 측정하여 단백질 함량을 계산할 수 있도록 되어 있어서 개략적인 분석만 가능케 되어 있는 단점이 있다. 이러한 단점을 보완하기 위하여 많은 학자들은 순 단백질의 총량을 정량할 수 있도록 하는 새로운 방법들을 개발하고 있다. 이들 중 현재까지 많이 이용되고 있는 몇 가지 방법에는 뷰렛방법, Lowry 방법, 탁도 측정법, 펩티드 측정법, 크로마토그래피, 비색법 및 분광광도법 등을 들 수 있다. 크로마토그래피는 두 개의 서로 다른 상을 이용하여 화합물을 분리한다. 즉, 정지상과 이.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 26.

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  일반생물학실험 | Kjeldahl 법을 이용한 단백질 정량 질소정량법으로는 여러 가지 방법이 있지만 1883년 Kjeldahl이 제안한 방법이 오늘날 널리 이용되고 있다. 이 방법의 원리는 다음과 같다. 즉 일정량의 시료에 진한 황산과 촉매를 가열하면 식품성분의 분해반응과 동시에 산화, 환원 반응이 발생하여 시료 중의 질소는 모두 암모니아로 되는데 이 암모니아는 반응액의 황산과 결합하여 황산암모늄의 형태로 분해액 중에 남는다. 이 황산암모늄은 식품의 다른 여러 가지 분해물과 같이 존재하기 때문에 황산암모늄을 구성하는 질소의 양을 정량하기가 어려우므로 이 질소만을 따로 분리하기 위하여 과잉의 알칼리를 가하고 가열하면 황산암모늄 중의 질소는 알칼리와 반응하여 암모니아 기체로 변하여 식품 중의 다른 분해물과 분리된다. 암모니아는 휘발성이 강하기 때문에 일정량의 산성 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 24.

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  일반생물학실험 | 단백질 정량 우리 몸을 구성하는 중요한 물질 중 하나인 단백질. 단백질은 효소로도 작용하기도 하고 우리 몸의 조직을 구성하기도 합니다. 다양한 용도에 쓰인 단백질이 세포나 샘플에 얼마나 포함되어 있는지 그 농도와 양을 구하기 위해서 단백질 정량이라는 실험을 합니다. 단백질 정량은 대부분의 생명과학 실험의 기본이며 대학원생들이 굉장히 많이 하는 실험이라고 알려져 있습니다. 이번 실험에서는 주어진 수용액에 녹아있는 단백질 양을 정량하는 데에 Bradford assay 방법을 사용하였으며 여러 농도의 용액을 사용하여서 흡광도와 농도간의 관계나 패턴이 있는지에 대해서 알아보았습니다. Bradford assay 방법에 사용하는 브래드포드 지시약은 평상시에는 녹갈색을 띄고 있다가 단백질과 결합하면 청색을 띄는 특징이 있고 색이.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 19.

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  일반생물학실험 | Macromolecules - Proteins Carbohydrates Lipids TIP 1. 세포를 이루고 있는 생체 거대분자의 존재를 생화학적인 실험 방법을 통해서 확인하고 이들의 양을 정량 하는 기술을 습득한다. 2. 표준 단백질용액(standard protein solution)을 이용하여 단백질 농도 검량선을 작성하고 미지 시료의 단백질 농도를 측정한다. 세포를 이루는 분자는 단순한 구조와 기능을 가지고 있는 유기분자들이 모여서 거대분자 (macromolecule)를 형성한다. 세포 내 거대분자는 크게 4 종류로 나눌 수 있다: 단백질 (proteins), 탄수화물 (carbohydrates), 지질 (lipids), 핵산 (nucleic acid). 단백질은 원형질과 효소의 구성요소이며, 탄수화물은 에너지원으로 중요한 역할을 한다. 지질은 모든 생체막 (biomembrane.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 8.

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  일반생물학실험 | Macromolecules - Protein Quantification(ver.2) TIP BSA를 이용하여 단백질 농도의 표준 곡선을 그리고 분광광도계를 이용하여 우유의 희석률에 따른 흡광도를 측정한 다음 BSA 표준 곡선을 이용하여 우유를 희석시킨 용액에 포함된 단백질 농도를 알아낸다. 분광광도계 광원에서의 빛을 모노크로미터에 의해 단색화 하여 시료 용액에 투과시켜 투과광의 강도를 전기신호로 변환하여 시료의 흡광도를 측정하는 장치로 일반적으로 단색광을 얻는 장치와 이 단색광의 세기를 정량적으로 측정하는 장치로 이루어져 있다. Bradford Assay 단백정량을 위한 대표적인 방법 중 하나로 여러 가지 농도의 BSA를 만들어 발색시약을 넣은 후 반응시켜 595㎚에서 흡광도 측정을 한다. 그런 다음 표준 곡선을 그리고 미지 시료의 흡광도를 측정하여 그 값을 BSA와 비교하여 시료의 농.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 3. 27.

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  분석화학실험 | Determination of Ca2+ using on Ion-selective Electrode TIP 전기화학의 기본 개념을 이해하고 전기화학분석법 중 하나인 Ion-Selective Eletrode (이온선택전극)을 이용해 우유 속에 녹아 있는 Ca2+ 이온을 정량 분석한다. 이온 선택 전극(Ion-Selective Electrode) 용액중의 특정이온에 감응하는 전극으로 어떤 이온의 활량과 그 이온이 생기는 전위와의 사이에 네른스트의 식(式)과 관계가 있는 것을 말한다 이 전극에는 막의 성상에 따라서 고체막전극(pH전극, 유리전극, 염화은전극), 액체막전극(K전극, Ca전극, Cl전극), 가스감응전극(암모니아전극, 전극)이 있다. 이 전극에 따라 시료의 전위차와 표준액농도의 전위차를 측정함으로써 시료중인 이온농도를 구할 수 있다. 임상검사에서는 Na, K, Cl, Ca 등의 측정장치에 사용되고.. Chemistry/분석화학 2020. 10. 9.

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  일반생물학실험 | Bradford assay를 이용한 단백질의 정량 TIP 수용액에 녹아있는 단백질의 양을 Bradford 방법으로 정량한다. 이를 위해 표준 용액을 이용한 표준곡선의 작성과 비색정량법을 습득한다. 단백질 분석 켈달 정량분석 방법에서는 시료 중에 함유되어 있는 총 질소함량을 측정하여 단백질 함량을 계산할 수 있도록 되어 있어서 개략적인 분석만 가능케 되어 있는 단점이 있다. 이러한 단점을 보완하기 위하여 많은 학자들은 순 단백질의 총량을 정량할 수 있도록 하는 새로운 방법들을 개발하고 있다. 이들 중 현재까지 많이 이용되고 있는 몇 가지 방법에는 뷰렛방법, Lowry 방법, 탁도 측정법, 펩티드 측정법, 크로마토그래피, 비색법 및 분광광도법 등을 들 수 있다. 크로마토그래피는 두 개의 서로 다른 상을 이용하여 화합물을 분리한다. 즉, 정지상과 이동상이 그.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 7. 18.

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  생명과학실험 | Specific activity and enzyme kinetics of alkaline phosphatase TIP 효소의 활성도를 흡광도를 이용하여 측정하는 방법과, specific activity의 개념을 이해하고, enzyme kinetics에서 기본이 되는 M-M equation과 Linear-burk equation을 이용행서 효소활성의 척도가 되는 Km,Vmax,kcat 등을 실험적으로 측정한다. Specific activity of Enzyme 단위 질량 당 효소의 활성을 말하며, 효소활성을 단백질의 단위중량당으로 나타낸 것. 일반적으로 활성의 단위는 비〔U/㎎〕로 나타낸다. 효소 이외의 불순한 단백질이 적을수록 비활성이 높아지기 때문에 효소정제의 척도가 된다. 효소의 정제 순도가 높을수록 specific activity가 증가한다. 실험 방법 1. Bradford assay (단백질 정량) 1) .. Biology/생명 과학 | 공학 2019. 11. 6.

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  생명공학실험 | Lowry 법을 이용한 단백질 정량 식품중의 단백질은 탄소, 수소, 산소의 각 원소 외에 반드시 일정량의 비율로 질소를 함유하고 있다. 특히 질소는 지방이나 탄수화물 등 식품의 다른 중요 성분에는 포함되어 있지 않으므로, 식품중의 단백질 정량은 전질소량을 정량하고 그 값에 일정의 계수를 곱하여 조단백질의 양을 구한다. 가장 널리 사용되어지는 정량법의 한 가지로서 감도도 좋고, column chromatography에 있어서 단백질의 정량에 적합하다. 또한 이하에 나타낸 물질이 혼재하여도 정량치에 영향을 주지 않는다. 본 법의 원리는 알칼리성에서 단백질의 펩타이드 결합과 구리가 반응해 구리 이온을 생성하는 뷰렛 반응 원리를 이용한 실험이다. 구리 이온은 방향족 아미노산의 산화를 유도하여 인몰리브덴산(인덩스덴산)이 단백질 중의 트립토판과 티록.. Biology/생명 과학 | 공학 2019. 10. 16.