반응형 일반생물학실험 | 향균력 Test TIP YG배지에 Bacillus subtilis을 도말하여 항생제를 떨어 드린 후 clear zone을 확인하여 그 이유를 알아보자. 항생제의 4가지 기본 조건 1. 선택성이 있어야 한다. 2. 잔류독성이 없어야 한다. 3. 어느 정도 기간 이후에는 밖으로 빠져 나와야 한다. 4. 항생제는 종류마다 방법 및 경오가 다르므로, 투여 방법을 자결정해야 한다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 균을 YG배지에 도말한다. 2) 네임펜으로 줄을 그은 후 페이퍼 디스크를 올린다. 3) 페이퍼 디스트 위에 항생제를 각각 떨어 드린다. [일반생물학실험]향균력 Test 레포트 2. 실험 이론 및 원리 2.1. 항생제의 4가지 기본 조건 2.1.1. 선택성이 있어야 한다. 2.1.2. 잔류독성이 없어야 한다. 2.1.3... Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 10. 2. 일반생물학실험 | Plasmid 분리 실험 & Agarose gel을 이용한 plasmid 전기영동 TIP E.coli를 배양해 플라스미드를 분리하고, 분리한 플라스미드를 직접 만든 Agarose gel을 이용하여 전기 영동한다. 전기영동의 원리 DNA 젤 전기영동 방법은 DNA를 크기에 따라 분리하는 간단한 방법이다. 50V-100V 정도의 전류를 장치에 흘려보낸다. DNA는 기본골격에 있는 인산기 때문에 전기영동에 사용되는 완충용액 속에서 (-)전하를 띠고 있으며 따라서 두 전극 사이에 위치해 있을 때 (+)극 쪽으로 움직이게 된다. 이 때 DNA 분자가 젤 매트릭스를 통과하는 속도는 분자량이 커질수록 늦어지며 젤의 밀도가 클수록 늦어진다. 또한 DNA의 분자량이 같더라도 구조에 따라서 움직이는 속도가 다르다. 예를 들면 supercoil된 DNA는 선형 DNA보다 빠르게 움직이는 것으로 알려져 있.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 10. 1. 일반생물학실험 | 플라스미드 추출 플라스미드는 생장에 필수적인 염색체이며 DNA에서 물리적으로 분리 돼 있는 대표적인 에피솜 DNA분자라고 한다 1953년에 미국의 유전학자 레더버그가 처음으로 플라스미드를 세균의 염색체 말고 독자적으로 증식을 할 수 있는 DNA 분자라는 의미로 이름을 지었다고 한다. 쉽게 말하면 플라스미드는 세균에서 발견이 되는 염색에 이외에 DNA이고 고리모양의 이중가닥 DNA 모양으로 수천개에서 수만개의 염기쌍으로 이루어져 있다고 한다. 하나의 세포내에 여러 개 존재하고 염색체와는 독립적으로 복제가 된다는 게 특징이다. 또 생존에 필수적이지는 않지만 특정한 환경에서 생존을 하는데 유리한 유전자들이 존재한다. 또 세균에 존재하지만 효묘와 같은 진핵 생물에서도 발견이 된다고 한다. 플라스미드의 형태로는 원형 DNA의 한.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 9. 28. 일반생물학실험 | 플라스미드 추출 TIP Mini-prep라 불리는 Alkaline lysis method을 이용하여 Plasmid DNA을 추출한다. Alkaline lysis Alkaline lysis의 기본적인 원리는 세균의 cell wall과 cell membrance을 부수고 DNA만을 분리하는 것이다. 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리해야 한다. 이 둘은 모두 DNA이므로 성질이 비슷하기 때문에 구분하여 분리하기가 쉽지 않다. chromosomal DNA는 분리 과정에서 linear형태가 되고 크기가 상당히 크기 때문에 이런 성질의 차이를 이용하면 분리할 수 있다. 실험 방법 1. Spin Down Bacterial cells 1) Harvesting ① 1.5㎖의 b.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 9. 27. 일반생물학실험 | 플라스미드 DNA 추출 TIP Alkaline lysis (denaturation) method에 대해 알아보고 이 방법을 통해 플라스미드 DNA를 추출해본다. DNA Mini prep이란 말을 쓰는데 prep은 ‘prepartion’의 줄임말로 DNA를 소량으로 추출한다는 의미이다. plasmid를 추출하는 방법으로는 기본적으로 여러가지가 있지만 그 가운데 대표적인 방법으로 alkaline lysis (denaturation) method가 이용되고 있다. 세포내에 DNA는 일반적인 double-helix를 형태를 가지는 반면 plasmid는 동그란 모양인 supercoiled형태를 가짐으로써 pH의 변화에 따라서도 plasmid의 형태 와 구조가 크게 변하지 않는다는 특징을 가지고 있다. plasmid는 주로 vector로.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 9. 26. 일반생물학실험 | Observe the mitotic chromosome of animal cells TIP 두 가지 방법을 통해 동물세포의 유사분열 염색체를 관찰할 수 있다. 유사분열이란, 유전체 양의 변화가 없는 세포분열이며 이 과정에서 방추사가 생기고 염색체가 나타나는 핵분열의 한 형식으로 간접분열이라고도 한다. 유사분열은 전기, 중기, 후기, 말기로 이루어진다. 유사분열이 일어나기 전 간기에는 느슨한 형태의 풀어진 염색체가 존재한다. 전기는 초기와 후기로 나뉘는데 전기의 초기에는 핵이 4개의 염색체를 가지고 있는 모습이며 염색체는 2가닥으로 갈라진 모습을 하고 있는데 한 가닥을 염색분체라고 한다. 전기의 후기에는 각각의 염색체가 염색분체를 2개씩 복제하며 방추체의 구조가 만들어지며 전기과정에서 핵막이 파괴되며 느슨한 염색체의 응축이 일어난다. 중기과정에서는 염색체들이 방추체의 중심을 따라 줄지어 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 9. 3. 일반생물학실험 | 그람 염색 TIP 순수배양한 미생물을 동정하기 위해 그람염색을 한다. 양성·음성균은 화학요법제에 대한 감수성뿐만 아니라 균의 증식에 필요한 영양소의 종류, 물리·화학적 자극에 대한 반응, 생산하는 독소, 병변 등 각 방면에서 차이가 있기 때문에, 양성·음성을 구분해 순수배양한 미생물을 이용할 때 필요한 정보를 알 수 있다. 그람 염색 1884년 덴마크의 의사 Gram이 고안한 특수 염색법으로, 표본을 크리스탈 바이올렛으로 물들여서 아이오딘·아이오딘화 칼륨액으로 처리한 후, 순에탄올로 씻으면, 조직은 탈색되지만 균은 탈색되지 않고 자주색으로 보인다. 그러나 그 후 여러 가지 균종이 발견되자 그 속에는 조직과 마찬가지로 에탄올 세정에 의하여 탈색되는 균도 있다는 것이 밝혀졌다. 이때 탈색되는 균을 그람음성균, 탈색되지.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 7. 30. 미생물학실험 | 미생물의 염색 TIP 세균을 분별염색(differential staining) 하게 되면 그람양성균인지 그람음성균인지에 따라 서로 다른 색을 띄게 된다. 나타나는 색의 차이를 통해서 세균을 동정, 분류하고 구조적 차이에 대해서 이해한다. 세포벽은 삼투압이나 외부의 자극으로부터 세포를 지키는 역할을 한다. 종마다 가지고 있는 세포벽의 종류가 다른데 진정세균은 세포벽으로 펩티도글리칸층(N-acetylglucosamin과 N-acetylmuramic acid의 beta-1,4,결합)을 가지고 있다. 그람양성균과 그람음성균 모두 펩티도글리칸층을 가지지만 그 두께에 있어서 차이가 있다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 스포이드를 이용하여 슬라이드 글라스 위에 3차 증류수 1~2 방울 정도를 떨어트린다. 2) 백금이를 화염멸균하.. Biology/미생물학 2022. 7. 30. 일반생물학실험 | 그람 염색법 계통분류학(systematics)은 생물들의 다양성과 그들의 유연관계를 연구하는 학문이다. 계통분류학은 계통학과 생물의 특성을 규명하고 이름을 부여하며 자연적인 유연관계에 따라 그룹으로 배치하는 분류학을 함께 연계한다. 이 때 대상 생물의 형태적, 생태적, 생리적, 분자생물학적 특징을 종합하여 종을 판별하는 것을 동정이라고 부른다. 한편 세균을 동정할 때 세균은 세포의 모양에 따라 구균, 간균, 나선균 등으로 나누기도 하지만, 본 실험에서는 그람 염색법을 이용하여 세균의 형태학적인 차이에 근거해 세균을 그람 양성균과 그람 음성균으로 분류하고자 하였다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 준비된 대장균과 고초균 sample을 각각의 이름을 labeling한 슬라이드글라스에 도말하였다. 2) 실온에서 약 5분간.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 7. 29. 일반생물학실험 | Gram Staining 그람 염색법은 1884년 Hans Christian Gram에 의해서 처음으로 개발된 방법으로 각종 검체 및 배양집락의 현미경적 검사에 이용되며 미생물에 의한 감염여부를 조기에 진단할 수 있게 해준다. 이 실험은 그램 염색을 통해서 세포벽의 두꺼운 정도를 알 수 있고 또한 이 실험 방법은 박테리아 분류의 한 방법이기도 하다. 미생물은 다양한 방법으로 분류된다. 즉, 미생물의 형태나 모양에 따라 분류하기도 하지만 미생물이 생존할 수 있는 온도, 수소이온농도(pH), 수분활성도 범위에 따라 분류하기도 한다. 또 미생물은 이용하는 에너지원, 산소의 존재유무, 포자생성방법, 그리고 염색에 의해서도 분류하며, 이러한 분류는 특정목적에 맞게 임의적으로 사용된다. 이번 실험을 통해 Gram staining의 원리에 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 7. 27. 일반생물학실험 | Gram Staining TIP 1. Gram staining의 원리와 방법을 숙지한다. 2. Gram(+)균과 Gram(-)균을 관찰하여 미생물 분류의 기본을 익힌다. 세균의 세포벽의 구조 차이를 이용하여 분류하는 기초적 세균염색법의 일종으로 1984년 Christian Gram이 창안, 현재는 1921년 Hucker의 개선된 방법이 사용되고 있다. 이것은 세균을 크게 2군으로 분류할 수 있다는 점에서 오래 전부터 사용되어 왔으며 가장 기본적인 염색 방법이다. 우선 열고정시킨 세균을 염기성 색소로 염색한 후, I2-KI 혼합용액으로 처리한 다음, 아세톤 또는 알코올로 탈색하여 다른 색소로 염색한다. 처음에 염색한 색소로 염색되는 것을 Gram(+)라고 하고, 두번째 염색색소로 염색되는 것을 Gram(-)라 한다. Gram(+).. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 7. 25. 일반생물학실험 | Amylase에 의한 녹말의 분해(효소반응) TIP 온도의 변화에 따라 침속의 amylase에 의해 녹말(starch)이 분해되는 현상을 관찰하고 그 원리를 알아보자. 또 녹말이 요오드용액과 반응하는 원리를 알아보자. 탄수화물 소화과정에서의 아밀라아제의 역할 1. 아밀라아제의 구강 내 소화 전분은 타액의 아밀라아제(amylase)에 의하여 덱스트린(dextrin)을 거쳐 맥아당으로 가수분해 된다. 원래의 전분은 소화되기 어렵지만 조리된 전분은 효소의 작용을 받기 쉽다. 음식물이 위장으로 내려가서 위산과 혼합될 때까지는 아밀라아제(amylase)가 계속 작용한다. 2. 위내 소화 위벽에서 분비되는 위액 중에서 탄수화물의 소화효소가 함유되어 있지 않다. 그러나 타액의 아밀라아제(amylase)작용은 음식물이 위내로 들어와 염산을 함유한 위액이 음식물에.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 5. 21. 일반생물학실험 | 원생생물의 관찰 TIP 1. 학교 지도못에 살고 있는 다양한 원생생물의 관찰하고 그 종류를 안다. 2. 다양한 원생생물의 생물학적/생화학적 능력을 안다. 원생생물 단세포 생물을 이루는 말이라고 한다. 원생생물은 진핵세포 중에서 고등생물인 동물과 식물이 서로 공생을 해서 진화하는 과정으로 교량역할을 한 것으로 여긴다고 한다. 대부분의 원생생물이 단세포 생물이라고 한다. 원생생물은 규조류, 아메바, 유글레나, 와편모조류, 짚신벌레, 물 곰팡이, 해캄 등이 있다. 원생생물 중의 원생동물은 운동기관의 따라 편모류, 위족류, 섬모류, 포자류 등으로 나눌 수 있다고 한다. 편모류는 1개또는 몇 개의 편모를 갖고 운동한다. 위족류는 부정형으로 위족 운동을 한다고 한다. 예로 아메바가 있다. 섬모류는 원생동물 중 세포소기관이 가장 잘.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 5. 7. 일반생물학실험 | 원생생물의 관찰 및 크기 계측 TIP 1. 대표적인 원생생물의 관찰을 통하여 그들의 다양성과 진화적 차이를 안다. 2. Micrometer의 사용법과 Micrometer를 이용한 세포의 크기 계측 방법을 알아본다. 마이크로미터에는 접안마이크로미터와 대물마이크로미터 2가지가 있다. 접안마이크로미터는 둥근 유리로 되어 있으며 눈금이 새겨져 있다. 현미경 사용 시 접안렌즈 안쪽에 넣고, 눈금을 이용하여 물체의 길이를 측정한다. 하지만 접안마이크로미터 한 눈금의 길이는 고정된 값이 아니라 사용하는 대물렌즈의 배율에 따라 달라진다. 따라서 물체의 길이를 측정하기 위해서는 먼저 대물마이크로미터를 이용하여 접안마이크로미터 한 눈금의 길이를 정해야 한다. 대물마이크로미터 한 눈금의 길이는 10μm(마이크로미터)라는 고정된 값을 가진다. 따라서 대물.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 5. 5. 세포생물학실험 | 단백질 정량 분석 비교 TIP 단백질 정량 원리에 대해 이해하고, 대표적인 단백질 정량법인 BCA법을 이용하여 직접 단백질을 정량해본다. 단백질 정량이란 시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정으로써, 대부분의 생명과학실험의 기본이 되는 과정이라고 할 수 있다. 생물학 분야의 경우, 다른 분야보다 결과를 볼 때까지 뭔가 잘못되었다는 것을 알기 어려워 준비 단계에서의 단백질 정량이 잘못 이루어지면 헛수고를 하거나 잘못된 결과를 얻을 수 있다. 이러한 이유 때문에 단백질 정량을 정확하게 하는 것은 매우 중요하다. 또한, 정확성뿐만 아니라 대부분의 실험에서 반복적으로 사용하게 되므로 간편성 역시 중요하게 여겨지기 때문에 실험에 따라서 다양한 단백질 정량 방법이 사용되고 있다. 대표적인 정량법은 ① Absorbance.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 26. 세포생물학실험 | Estimation of Protein TIP 단백질이 포함된 미지의 시약에 담긴 단백질의 총량을 알아낸다. Lowry's method 알칼리성에서 단백질의 펩타이드 결합과 구리가 반응해 Cu2+ 이온을 생성하는 뷰렛반응 원리를 이용한 방법이다. 구리이온의 화학변화에 영향을 주는 화합물이 존재할 경우 단백질 정량 측정을 간섭하게 되는데, 이를 위해 분적 전에 제거하거나 영향이 없을 정도로 희석하여야만 한다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 실험에 사용할 용액들을 제조한다. ① Working standard 제조 - Bovin serum albumin 10㎖를 증류수 100㎖에 용해시킨다.(stock solution) - Stock solution 10㎖를 증류수 100㎖에 희석시킨다. ② Folin’s phenol 시약 제조 - Folin’s.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 24. 세포생물학실험 | Virus titration by plaque assay TIP Introduction of plaque assay which is most widely used for titration of influenza virus particles 실험 방법1. 실험 과정1) 하루 전, 6 well plate에 MDCK cell을 106 culture를 만들어 둔다. 2) micro tube 10-1 부터 10-6까지 적어준 후 micro tube MEM 900㎕을 각각 넣어준다.3) virus 100ul을 섞어10-1 sample을 만들고 10-1에서 100㎕을 따서 10-2에 넣어주어 10-2 sample을 만드는 과정을 모두 해준다. 4) 6 well plate에 10-1 부터 10-6까지 적어준다. 5) 6 well plate를 PBS로 washing 해 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 17. 세포생물학실험 | Factors Affecting Enzyme Function TIP 1. 온도 변화에 따른 효소 활성 변화를 이해할 수 있다. 2. pH 변화에 따른 효소 활성 변화를 이해할 수 있다. 효소일반적으로 화학반응에서 반응물질 외에 미량의 촉매는 반응속도를 증가시키는 역할을 한다. 생물체 내에서 일어나는 화학반응도 촉매에 의해 속도가 빨라진다. 특별히 생물체 내에서 이러한 촉매의 역할을 하는 것을 효소라고 부르며 단백질로 이루어져 있다. 단백질로 이루어져 있기 때문에 무기촉매와는 달리 온도나 pH(수소이온농도) 등 환경 요인에 의하여 기능이 크게 영향을 받는다. 즉, 모든 효소는 특정한 온도 범위 내에서 가장 활발하게 작용한다. 대개의 효소는 온도가 35∼45℃에서 활성이 가장 크다. 하지만 온도가 그 범위를 넘어서면, 오히려 활성이 떨어진다. 온도가 올라가면 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 16. 이전 1 2 3 4 5 6 7 다음 반응형