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  일반생물학실험 | 플라스미드 추출 TIP Mini-prep라 불리는 Alkaline lysis method을 이용하여 Plasmid DNA을 추출한다. Alkaline lysis Alkaline lysis의 기본적인 원리는 세균의 cell wall과 cell membrance을 부수고 DNA만을 분리하는 것이다. 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리해야 한다. 이 둘은 모두 DNA이므로 성질이 비슷하기 때문에 구분하여 분리하기가 쉽지 않다. chromosomal DNA는 분리 과정에서 linear형태가 되고 크기가 상당히 크기 때문에 이런 성질의 차이를 이용하면 분리할 수 있다. 실험 방법 1. Spin Down Bacterial cells 1) Harvesting ① 1.5㎖의 b.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 9. 27.

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  일반생물학실험 | 플라스미드 DNA 추출 TIP Alkaline lysis (denaturation) method에 대해 알아보고 이 방법을 통해 플라스미드 DNA를 추출해본다. DNA Mini prep이란 말을 쓰는데 prep은 ‘prepartion’의 줄임말로 DNA를 소량으로 추출한다는 의미이다. plasmid를 추출하는 방법으로는 기본적으로 여러가지가 있지만 그 가운데 대표적인 방법으로 alkaline lysis (denaturation) method가 이용되고 있다. 세포내에 DNA는 일반적인 double-helix를 형태를 가지는 반면 plasmid는 동그란 모양인 supercoiled형태를 가짐으로써 pH의 변화에 따라서도 plasmid의 형태 와 구조가 크게 변하지 않는다는 특징을 가지고 있다. plasmid는 주로 vector로.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 9. 26.

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  일반생물학실험 | Observe the mitotic chromosome of animal cells TIP 두 가지 방법을 통해 동물세포의 유사분열 염색체를 관찰할 수 있다. 유사분열이란, 유전체 양의 변화가 없는 세포분열이며 이 과정에서 방추사가 생기고 염색체가 나타나는 핵분열의 한 형식으로 간접분열이라고도 한다. 유사분열은 전기, 중기, 후기, 말기로 이루어진다. 유사분열이 일어나기 전 간기에는 느슨한 형태의 풀어진 염색체가 존재한다. 전기는 초기와 후기로 나뉘는데 전기의 초기에는 핵이 4개의 염색체를 가지고 있는 모습이며 염색체는 2가닥으로 갈라진 모습을 하고 있는데 한 가닥을 염색분체라고 한다. 전기의 후기에는 각각의 염색체가 염색분체를 2개씩 복제하며 방추체의 구조가 만들어지며 전기과정에서 핵막이 파괴되며 느슨한 염색체의 응축이 일어난다. 중기과정에서는 염색체들이 방추체의 중심을 따라 줄지어 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 9. 3.

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  일반생물학실험 | 그람 염색 TIP 순수배양한 미생물을 동정하기 위해 그람염색을 한다. 양성·음성균은 화학요법제에 대한 감수성뿐만 아니라 균의 증식에 필요한 영양소의 종류, 물리·화학적 자극에 대한 반응, 생산하는 독소, 병변 등 각 방면에서 차이가 있기 때문에, 양성·음성을 구분해 순수배양한 미생물을 이용할 때 필요한 정보를 알 수 있다. 그람 염색 1884년 덴마크의 의사 Gram이 고안한 특수 염색법으로, 표본을 크리스탈 바이올렛으로 물들여서 아이오딘·아이오딘화 칼륨액으로 처리한 후, 순에탄올로 씻으면, 조직은 탈색되지만 균은 탈색되지 않고 자주색으로 보인다. 그러나 그 후 여러 가지 균종이 발견되자 그 속에는 조직과 마찬가지로 에탄올 세정에 의하여 탈색되는 균도 있다는 것이 밝혀졌다. 이때 탈색되는 균을 그람음성균, 탈색되지.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 7. 30.

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  미생물학실험 | 미생물의 염색 TIP 세균을 분별염색(differential staining) 하게 되면 그람양성균인지 그람음성균인지에 따라 서로 다른 색을 띄게 된다. 나타나는 색의 차이를 통해서 세균을 동정, 분류하고 구조적 차이에 대해서 이해한다. 세포벽은 삼투압이나 외부의 자극으로부터 세포를 지키는 역할을 한다. 종마다 가지고 있는 세포벽의 종류가 다른데 진정세균은 세포벽으로 펩티도글리칸층(N-acetylglucosamin과 N-acetylmuramic acid의 beta-1,4,결합)을 가지고 있다. 그람양성균과 그람음성균 모두 펩티도글리칸층을 가지지만 그 두께에 있어서 차이가 있다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 스포이드를 이용하여 슬라이드 글라스 위에 3차 증류수 1～2 방울 정도를 떨어트린다. 2) 백금이를 화염멸균하.. Biology/미생물학 2022. 7. 30.

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  일반생물학실험 | 그람 염색법 계통분류학(systematics)은 생물들의 다양성과 그들의 유연관계를 연구하는 학문이다. 계통분류학은 계통학과 생물의 특성을 규명하고 이름을 부여하며 자연적인 유연관계에 따라 그룹으로 배치하는 분류학을 함께 연계한다. 이 때 대상 생물의 형태적, 생태적, 생리적, 분자생물학적 특징을 종합하여 종을 판별하는 것을 동정이라고 부른다. 한편 세균을 동정할 때 세균은 세포의 모양에 따라 구균, 간균, 나선균 등으로 나누기도 하지만, 본 실험에서는 그람 염색법을 이용하여 세균의 형태학적인 차이에 근거해 세균을 그람 양성균과 그람 음성균으로 분류하고자 하였다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 준비된 대장균과 고초균 sample을 각각의 이름을 labeling한 슬라이드글라스에 도말하였다. 2) 실온에서 약 5분간.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 7. 29.

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  일반생물학실험 | Gram Staining 그람 염색법은 1884년 Hans Christian Gram에 의해서 처음으로 개발된 방법으로 각종 검체 및 배양집락의 현미경적 검사에 이용되며 미생물에 의한 감염여부를 조기에 진단할 수 있게 해준다. 이 실험은 그램 염색을 통해서 세포벽의 두꺼운 정도를 알 수 있고 또한 이 실험 방법은 박테리아 분류의 한 방법이기도 하다. 미생물은 다양한 방법으로 분류된다. 즉, 미생물의 형태나 모양에 따라 분류하기도 하지만 미생물이 생존할 수 있는 온도, 수소이온농도(pH), 수분활성도 범위에 따라 분류하기도 한다. 또 미생물은 이용하는 에너지원, 산소의 존재유무, 포자생성방법, 그리고 염색에 의해서도 분류하며, 이러한 분류는 특정목적에 맞게 임의적으로 사용된다. 이번 실험을 통해 Gram staining의 원리에 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 7. 27.

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  일반생물학실험 | Gram Staining TIP 1. Gram staining의 원리와 방법을 숙지한다. 2. Gram(+)균과 Gram(-)균을 관찰하여 미생물 분류의 기본을 익힌다. 세균의 세포벽의 구조 차이를 이용하여 분류하는 기초적 세균염색법의 일종으로 1984년 Christian Gram이 창안, 현재는 1921년 Hucker의 개선된 방법이 사용되고 있다. 이것은 세균을 크게 2군으로 분류할 수 있다는 점에서 오래 전부터 사용되어 왔으며 가장 기본적인 염색 방법이다. 우선 열고정시킨 세균을 염기성 색소로 염색한 후, I2-KI 혼합용액으로 처리한 다음, 아세톤 또는 알코올로 탈색하여 다른 색소로 염색한다. 처음에 염색한 색소로 염색되는 것을 Gram(+)라고 하고, 두번째 염색색소로 염색되는 것을 Gram(-)라 한다. Gram(+).. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 7. 25.

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  일반생물학실험 | Amylase에 의한 녹말의 분해(효소반응) TIP  온도의 변화에 따라 침속의 amylase에 의해 녹말(starch)이 분해되는 현상을 관찰하고 그 원리를 알아보자. 또 녹말이 요오드용액과 반응하는 원리를 알아보자.   탄수화물 소화과정에서의 아밀라아제의 역할1. 아밀라아제의 구강 내 소화전분은 타액의 아밀라아제(amylase)에 의하여 덱스트린(dextrin)을 거쳐 맥아당으로 가수분해 된다. 원래의 전분은 소화되기 어렵지만 조리된 전분은 효소의 작용을 받기 쉽다. 음식물이 위장으로 내려가서 위산과 혼합될 때까지는 아밀라아제(amylase)가 계속 작용한다. 2. 위내 소화 위벽에서 분비되는 위액 중에서 탄수화물의 소화효소가 함유되어 있지 않다. 그러나 타액의 아밀라아제(amylase)작용은 음식물이 위내로 들어와 염산을 함유한 위액이 음식물.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 5. 21.

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  일반생물학실험 | 원생생물의 관찰 TIP  1. 학교 지도못에 살고 있는 다양한 원생생물의 관찰하고 그 종류를 안다. 2. 다양한 원생생물의 생물학적/생화학적 능력을 안다.   원생생물단세포 생물을 이루는 말이라고 한다. 원생생물은 진핵세포 중에서 고등생물인 동물과 식물이 서로 공생을 해서 진화하는 과정으로 교량역할을 한 것으로 여긴다고 한다. 대부분의 원생생물이 단세포 생물이라고 한다. 원생생물은 규조류, 아메바, 유글레나, 와편모조류, 짚신벌레, 물 곰팡이, 해캄 등이 있다. 원생생물 중의 원생동물은 운동기관의 따라 편모류, 위족류, 섬모류, 포자류 등으로 나눌 수 있다고 한다. 편모류는 1개또는 몇 개의 편모를 갖고 운동한다. 위족류는 부정형으로 위족 운동을 한다고 한다. 예로 아메바가 있다. 섬모류는 원생동물 중 세포소기관이 가장.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 5. 7.

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  일반생물학실험 | 원생생물의 관찰 및 크기 계측 TIP  1. 대표적인 원생생물의 관찰을 통하여 그들의 다양성과 진화적 차이를 안다. 2. Micrometer의 사용법과 Micrometer를 이용한 세포의 크기 계측 방법을 알아본다.   마이크로미터에는 접안마이크로미터와 대물마이크로미터 2가지가 있다. 접안마이크로미터는 둥근 유리로 되어 있으며 눈금이 새겨져 있다. 현미경 사용 시 접안렌즈 안쪽에 넣고, 눈금을 이용하여 물체의 길이를 측정한다. 하지만 접안마이크로미터 한 눈금의 길이는 고정된 값이 아니라 사용하는 대물렌즈의 배율에 따라 달라진다. 따라서 물체의 길이를 측정하기 위해서는 먼저 대물마이크로미터를 이용하여 접안마이크로미터 한 눈금의 길이를 정해야 한다. 대물마이크로미터 한 눈금의 길이는 10μm(마이크로미터)라는 고정된 값을 가진다. 따라서.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 5. 5.

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  세포생물학실험 | 단백질 정량 분석 비교 TIP  단백질 정량 원리에 대해 이해하고, 대표적인 단백질 정량법인 BCA법을 이용하여 직접 단백질을 정량해본다.   단백질 정량이란 시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정으로써, 대부분의 생명과학실험의 기본이 되는 과정이라고 할 수 있다. 생물학 분야의 경우, 다른 분야보다 결과를 볼 때까지 뭔가 잘못되었다는 것을 알기 어려워 준비 단계에서의 단백질 정량이 잘못 이루어지면 헛수고를 하거나 잘못된 결과를 얻을 수 있다.  이러한 이유 때문에 단백질 정량을 정확하게 하는 것은 매우 중요하다. 또한, 정확성뿐만 아니라 대부분의 실험에서 반복적으로 사용하게 되므로 간편성 역시 중요하게 여겨지기 때문에 실험에 따라서 다양한 단백질 정량 방법이 사용되고 있다. 대표적인 정량법은 ① Absorb.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 26.

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  세포생물학실험 | Estimation of Protein TIP  단백질이 포함된 미지의 시약에 담긴 단백질의 총량을 알아낸다.   Lowry's method알칼리성에서 단백질의 펩타이드 결합과 구리가 반응해 Cu2+ 이온을 생성하는 뷰렛반응 원리를 이용한 방법이다. 구리이온의 화학변화에 영향을 주는 화합물이 존재할 경우 단백질 정량 측정을 간섭하게 되는데, 이를 위해 분적 전에 제거하거나 영향이 없을 정도로 희석하여야만 한다.  실험 방법1. 실험 과정1) 실험에 사용할 용액들을 제조한다.① Working standard 제조- Bovin serum albumin 10㎖를 증류수 100㎖에 용해시킨다.(stock solution)- Stock solution 10㎖를 증류수 100㎖에 희석시킨다. ② Folin’s phenol 시약 제조- Folin’s ph.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 24.

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  세포생물학실험 | Virus titration by plaque assay TIP  Introduction of plaque assay which is most widely used for titration of influenza virus particles   실험 방법1. 실험 과정1) 하루 전, 6 well plate에 MDCK cell을 106 culture를 만들어 둔다. 2) micro tube 10-1 부터 10-6까지 적어준 후 micro tube MEM 900㎕을 각각 넣어준다.3) virus 100ul을 섞어10-1 sample을 만들고 10-1에서 100㎕을 따서 10-2에 넣어주어 10-2 sample을 만드는 과정을 모두 해준다. 4) 6 well plate에 10-1 부터 10-6까지 적어준다. 5) 6 well plate를 PBS로 washing 해 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 17.

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  세포생물학실험 | Factors Affecting Enzyme Function TIP  1. 온도 변화에 따른 효소 활성 변화를 이해할 수 있다. 2. pH 변화에 따른 효소 활성 변화를 이해할 수 있다.   효소일반적으로 화학반응에서 반응물질 외에 미량의 촉매는 반응속도를 증가시키는 역할을 한다. 생물체 내에서 일어나는 화학반응도 촉매에 의해 속도가 빨라진다. 특별히 생물체 내에서 이러한 촉매의 역할을 하는 것을 효소라고 부르며 단백질로 이루어져 있다. 단백질로 이루어져 있기 때문에 무기촉매와는 달리 온도나 pH(수소이온농도) 등 환경 요인에 의하여 기능이 크게 영향을 받는다. 즉, 모든 효소는 특정한 온도 범위 내에서 가장 활발하게 작용한다. 대개의 효소는 온도가 35∼45℃에서 활성이 가장 크다.  하지만 온도가 그 범위를 넘어서면, 오히려 활성이 떨어진다. 온도가 올라가면 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 16.

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  세포생물학 | 세포막의 물질수송 TIP 1. 세포막의 물질수송 2. 막 수송 3. 막 수송의 단백질 4. 결론 세포막의 물질수송 1. 막의 생물학적 역할 단백질, 지질, 탄수화물이 막 구조를 구성함으로써 독특하고 복잡한 생리적 특성을 가지는 특수한 물리적 배열을 가지게 된다. 언뜻 볼 때, 막의 경계는 단지 세포와 세포소기관의 민감한 내부를 외부 환경으로부터 격리하기 위한 보호막으로 생각된다. 막의 이런 역할도 중요하지만, 이들 막은 세포의 생명 현상 유지에 결정적인 다른 기능들을 수행한다. 막은 물리적 경계로서 세포의 모양과 형태를 결정하고, 세포의 성분들은 한데 묶어 놓으며, 세포의 구조적 통합성을 유지한다. 막 구조는 조직과 세포 내의 생화학적 활성을 조직화하고 구획화 한다. 그러나 세포는 완전히 격리된 상태에서는 생명을 유지할 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 14.

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  일반생물학실험 | 원생동물의 관찰 TIP 형태학적으로 원생동물을 4가지로 분류하여 그 특징을 파악하고, 원생동물을 직접 관찰하여 각각이 어떤 분류군에 속하는지 예측해본다. 원생생물(protisis)의 기원 원생생물은 최초의 진핵생물에서 진화되었다. 그리고 진핵생물은 한 개 이상의 원핵생물 계열로부터 발생되었다. 즉 원생생물의 기원을 알기 위해서는 진핵 생물의 기원에 대해 알아야 한다. 이것의 가설 중 하나로 단계적 세포내 공생설이 있는데, 원시적 호기성 세균(A계열) → 아메바성 혐기성 원시진핵 세포(B계열) → 호기성 아메바성 세포(AB계열) → 편모성 세균(C계열) → 운동성 호기성 아메바성 세포(ABC계열) → 원시적 광독립영양세균(D계열) → 운동성 호기성 광합성 아메바성 세포(ABCD계열)의 단계를 거친다. 실험 방법 1. 실험.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 12.

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  일반생물학실험 | 원생동물 동정 및 관찰 원생생물(Protist)이라는 용어는 과거로부터 동물도 식물도, 균류도 아닌 진핵생물들을 통틀어 부르던 말이다. 원생생물들은 대부분 단세포 생물로(일부는 다세포), 아주 다양한 종류가 존재한다. 원생생물은 핵막과 세포 소기관을 가지고 있으며 무성생식이나 유성색식을 통해 번식한다. 과거에 분류학자들은 모든 원생생물을 하나의 계인 원생생물계로 분류했으나 최근 분자계통분류학 연구가 발전하면서, 어떤 원생생물은 다른 원생생물보다 식물, 동물, 또는 균류에 더 가깝다는 사실이 밝혀지고, 원생생물이 사실상 측계통군(paraphyletic) 임이 밝혀졌다. 그래서 ‘원생생물계’라는 과학적이지는 않다고 할 수 있으나 편의상 계속 사용하고 있다. 하나의 공통점이 없는 측계통군인 원생생물들은 영양방식이나 서식처, 생활사,.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 9.