반응형 일반생물학실험 | 원핵세포 배양 및 관찰 실험 개요원핵세포란 원핵생물을 구성하고 있고 개체가 단 하나로만 이루어진 단세포이다. 원핵세포는 하나의 염색체만 가지고 있고 진핵세포와 다르게 유사분열을 하지 않으며, 진핵세포보다 요구하는 영양분이 까다롭지 않아 세포배양에 주로 쓰인다. 또한 원핵세포는 다른 세포와 달리 세포주기가 매우 짧아 번식과 증식이 빠르다. 세포배양에 쓰이는 대표적인 균인 대장균은 20분에 한 번씩 분열한다. 하지만 이것은 진핵세포를 완전히 배양하지 않는다는 것은 아니다. 진핵세포를 배양할 때에는 주로 세대수가 짧은 물고기나 생쥐를 이용한다. 세포배양은 생물학 연구 전체에서 가장 유용한 기술이다. 세포배양의 장점은 단일 배양세포를 대량으로 얻을 수 있고 그 중 돌연변이의 관찰도 비교적 용이한 것이다. 초기의 조직배양은 명확하지 않.. Biology/일반 | 세포 생물학 2024. 9. 30. 일반생물학실험 | Colony Dilution 및 Spreading TIP 배지를 만들고 그 배지에 colony를 희석하여 colony의 개수를 직접 확인하고 계산하여 본다. 식품, 토양, 생체, 그 밖의 환경에서 미생물상(microflora)을 알아보면 미생물들은 단일종으로 존재하는 것은 거의 드물고 여러 가지 종류의 미생물군이 공존하고 있음을 알게 된다. 몇 가지 종류의 미생물이 서식하며 우점종(dominant) 등을 알아보는 생태학적인 연구를 위해서는 무엇보다 먼저 서식처로부터 단일종의 미생물을 분리하는 일과 배양하는 기술이 중요하다. 실험실 내에서 인공적으로 미생물을 증식하는 수단을 배양(culture)이라 하는데 두 종 이상의 세균이 동시에 배양될 때 혼합 배양(mixed culture)이라 하고, 혼재된 균군 중에서 원하는 균만 따로 분리하여 배양하는 것을 순.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 9. 25. 일반생물학실험 | PCR & Molecular Cloning PCR 1. Primer design 원리 목표로 하는 DNA 시퀀스의 시작과 끝부분에 상보적으로 결합해서 DNA 중합효소가 DNA 중합을 시작할 수 있도록 '시발체' 역할을 해주는 짧은 다염기체이다. DNA 복제에 primer가 필요한 이유는 과정을 촉매하는 효소인 DNA중합효소가 이미 존재하는 유전자 가닥에 새로운 nucleotide를 붙이는 역할만 할 수 있기 때문이다. DNA중합효소는 primer의 3'end에서 시작하여 반대편 가락을 복제한다. 목표 시퀀스에 상보적인 아무 염기서열이나 마구잡이로 정해서 primer를 만드는 게 아니라 이 primer의 염기 구성이 어떠냐에 따라서 PCR의 효율이 큰 영향을 받기 때문에 최적의 primer를 만들기 위해서는 갖춰야 할 조건들이 있다. 먼저 길이는 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 1. 26. 일반생물학실험 | 박테리아의 형질전환(Transformation) TIP 박테리아에 존재하는 플라스미드 DNA에 대해 이해하고, 이를 유전공학적으로 조작한 실험용 플라스미드를 이용해 박테리아의 형질전환을 유도해 봄으로써 유전자 재조합의 기초를 이해한다. 형질전환 형질전환(transformation)은 외부로부터 주어진 DNA에 의하여 생물의 유전적 성질을 변하게 하는 일을 말한다. 이는 1928년 영국의 그리피스가 Diplococcus pneumonia를 이용하여 실험한 것이 계기가 되어 발견된 실험 방법이다. 세포는 외부의 DNA를 받아들임으로써 원래 갖고 있는 성질과는 다른 새로운 유전형질을 발현할 수 있게 된다. Transformation 에서는 외부의 DNA를 벡터를 이용해 bacteria cell에 주입해 준다. 이러한 벡터를 이용한 외부 DNA를 세포에 주입.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 12. 20. 일반생물학실험 | Measurement of Microbiological Activity and Growth - Bacterial Growth by Plate Counting TIP Plate Count 법 각종 배지와 부란조건을 사용한다. 호기적으로 생육하는 미생물은 그 현탁액을 적당히 희석하여 적절한 조건하에서 평판배양(Plate Count)하여 생긴 Colony의 수로부터 생균수를 측정하는 평판배양법(Plate Count Method, Colony Count Method)을 많이 사용하고 있다. 이에따라 현탁액을 희석하여 평판배양을 한 후 Colony Counter를 이용하여 생균수를 측정하고자 한다. 모든 생존계수법은 미생물에 선택적이며, 선택성의 정도는 생존수 계수방법에 따라 다르다. 이 선택성은 기술적으로 모든 미생물을 배양할 수 있는 보편적인 배지를 만들수가 없기 때문에 이러한 선택성을 최소한도로 줄이는 방법은 가능한 많은 종류의 미생물을 배양할 수 있는 보편적인.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 11. 5. 미생물실험 | 환경오염의 원인인 황화합물 제거를 위한 미생물(T.1082) 배양 최근 환경문제가 대두되고 있는 가운데 오염물질을 처리하는 기술개발에 대한 연구 필요성이 중대해 지고 있다. 악취는 특성상 저 농도에서도 불쾌감이 발생되는 특성을 가지고 있어 지역 주민들의 피해가 급증하고 있으며 세균번식으로 인한 대기오염 등의 환경오염 문제도 생겨나고 있다. 본 실험은 대기오염의 원인이 되고 있는 황화합물 악취가스를 제거하고자 분리한 황화합물 분해균주의 배양특성 하여 오염물질의 정화를 통해 환경 문제를 해결 하는 것에 목적을 두고 있다. 악취 제거와 오염세균 번식을 방지하기 위하여 사용할 수 있는 방법은 화학적, 물리적, 생물학적 3가지 방법이 있다. 환경오염의 원인이 되고 있는 황화합물 분해, 제거를 위해 물리적, 화학적, 생물학적 방법 중 미생물을 이용하여 오염원을 분해하는 생물학적 .. Biology/미생물학 2020. 9. 3. 일반생물학실험 | E.coli의 Transformation TIP E.coli의 trasformation 실험을 통해서 유전 공학에 많이 쓰이는 transformation의 기작을 이해하고, 그 방법을 익힌다. Plasmid Plasmid는 원형의 double-stranded DNA로 chromosomal DNA와는 분리되어 있다. 플라스미드는 박테리아나 효모 혹은 기생이나 공생 관계로 보다 고등 eukaryotic cell들 안에 존재한다. 이것은 수천 base pair서부터 100 kilo base pair까지의 다양한 크기를 갖는다. 염색체 DNA와 마찬가지로 이 플라스미드 DNA도 분열전마다 복제된다. 세포 분열 동안 적어도 하나 이상의 플라스미드가 딸세포 속으로 들어가게 되며, 이런 성질로 인해 plasmid는 세대를 계속해서 숙주 세포 안에 존재할 수.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 5. 1. 분자생물학실험 | Transformation TIP 1. 실험을 통하여 transformation의 과정을 이해하고, x-gal의 사용하여 transformation의 유무를 판단한다 2. 재조합된 DNA를 competent cell에 삽입하여 형질전환 후, ampicillin과 x-gal이 들어 있는 LB plate에서 배양하여 colony를 형성시킨 후, 색깔로 재조합 DNA를 판별한다. 3. 형질전환 기술을 익힌다. 4. Lac Operon의 Mechanism을 이해한다. 오페론 (0peron) 유전자 발현의 조절 단위 (operation unit). 오페론은 대부분의 경우 원핵생물에만 존재한다. 여러 유전자를 오페론으로 묶어 한꺼번에 발현을 조절하면 유전자들의 발현이 쉽게 조절될 수 있다. 1. 오페론의 구조 : 조절부위 + 구조부위 (전사.. Biology/분자생물학 2020. 3. 8. 식품미생물실험 | 순수분리 - 김치 국물로부터 유산균 분리 TIP 1. 두 종류 이상의 미생물이 혼합된 시료나 배양액(혹은 희석액)으로부터 단일 colony를 순수분리하기 위한 기술 습득 2. 순수분리 된 미생물의 계대방법을 익히도록 함 실험 방법 1. 배지준비 1) 증류수(1L)에 Peptone(10g), Lab-lemoo meat extract(10g), Yeast extract(5g), Glucose(20g) 2) Tween 80(1g). KH2PO4 (2g), Sodium actate(5g), MgSO4·7H2O (0.2g), MnSO4·4H2O (0.05g) 3) Triamnonium citrate(2g)을 넣고 마그네틱바를 넣고 핫플레이트에서 잘 섞는다. 4) 멸균을 시키기 위하여 오토클레이브에서 가열.용해 시킨다. 멸균이 된 배지를 식혀 준 다음 플.. Engineering/식품 영양 | 공학 2020. 1. 16. 분자생물학실험 | Midi-preparation of plasmid DNA Midi-preparation mini-preparation 과 실험의 원리가 똑같으나, 실험자가 원하는 gene의 수를 늘리기 위해, 즉 bacteria를 증폭시키기 위해 scale을 늘린 실험. mini-preparation은 5∼10㎍을 준비하는데 비해, midi-preparation은 ∼100㎍정도의 양까지 증폭시킨다. 실험 방법 Step 1 : 선처리 1) inoculate two single well isolated colonies into two 1.5 ㎖ LB+amp (working concentration 50 ㎎/㎖) culture tubes (a colony/clone per tube) 2) incubate for approximately 8 hours at 37℃ with vigor.. Biology/분자생물학 2020. 1. 12. 미생물학실험 | MRS Agar 배지의 제조 앞으로 미생물들을 연구하기 위해서는 배지에 미생물을 배양하는 것이 실험의 기초가 될 것이다. 그리고 그 베이스 위에 여러 미생물의 특성에 맞는 실험 방법 응응하여야 할 것이다. 미생물의 배양에 필요한 배지는 배양하고자 하는 미생물의 종류에 따라 그 특성에 가장 적합한 것들을 선택하여 사용해야 하는데, 이는 단순히 미생물만 배양하는 것뿐 아니라, 집락의 형태와 특성, 생화학적 특성, 당 분해 성질, 유전적 특성, 배지의 선택, 구성 성분, 제조방법에 따라 미생물의 성패가 결정되기 때문이다. 그래서 이번 실험을 통하여 기본적인 미생물 배양을 익히고 그 방법을 숙지 하고자한다. 본 실험은 MRS를 사용 만든 액상배지의 L. acidophilus을 고체배지를 직접 배양해 보고 배양 후 일정시간 후에 colony.. Biology/미생물학 2020. 1. 11. 미생물학실험 | 평판배양법을 이용한 구강미생물 배양 배지란 미생물이나 동식물의 조직을 배양하기 위하여 배양체가 필요로 하는 영양물질을 주성분으로 하는 것을 말한다. 기체상으로 얻어지는 것을 제외한 생존, 발육에 불가결한 물을 비롯하여 영양물질로서 탄소원, 질소원, 무기염류, 발육인자 등이 포함되어있다. 배지는 물리적 상태에 따라 고체배지와 액체배지로 구분한다. 고체배지는 액체배지에 한천, 젤라틴, 실리카겔 등 젤을 형성하는 물질을 첨가하여 제조한다. 고체배지는 목적에 따라 평판배지, 사면배지, 고층배지로 구분 할 수 있다. 본 실험에서는 평판배지를 이용하였으며 한천(agar)을 이용하여 고체의 형태로 만들었다. 한천(agar)은 홍조류에서 추출한 복합 다당류로 100℃에서 녹으므로 배양 시 고체 상태를 유지 할 수 있다. 일단 녹으면 45∼50℃까지 액체.. Biology/미생물학 2019. 12. 24. 미생물실험 | 미생물 희석법과 생균수 측정 - Spread/Pour plate 세균의 계수 식품이나 물에 존재하는 미생물의 수를 알아보는 방법이며, 배양된 배지에 나타나는 미생물의 colony의 수를 계수하는 것이다. colony의 수를 계수하는 이유는 식품위생과 관련이 깊다. 미생물은 다양한 장소 곳곳에서 존재한다. 우리가 먹는 음식물도 예외가 아니다. 생균수의 측정은 식품의 현재 오염정도나 부패의 진행도 등을 알기위해 측정한다. 우선 식품의 위생검사 목적중 위생성, 보존성의 여부가 생균수 측정만으로 가능하며 각 식품에 정해져 있는 미생물 기준치가 있는데, 그 기준치와 실제 측정하는 식품의 미생물 수를 비교해 보면서 식품이 오염됐는지 알아볼 수 있고, 면역이 약한 환자의 음식 등과 같은 상황에 따라 임의로 미생물의 수를 낮추거나 올리며 조절할 수도 있다. 균을 측정하는 경우에는 .. Biology/미생물학 2019. 11. 26. 이전 1 다음 반응형
