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  일반생물학실험 | 전기 영동 실험 배경 전기영동의 원리는 단백질 분자들은 표면의 여러 부위에 양전하 또는 음전하를 띄고 있어, 단백질 혼합액 속에 전극을 설치하고 직류전압을 가하면 음극 또는 양극으로 이동하게 된다. 이처럼 전기장 안에서 하전된 입자가 양극 또는 음극 쪽으로 이동하는 현상을 전기영동이라고 한다. 이동하는 속도는 입자의 전하량, 크기와 모양, 용익의 pH와 점성도, 용액에 있는 다른 전해질의 농도와 이온의 세기, 지지체의 종류등 여러가지 요인에 따라 결정된다. 이러한 성질에 의해 전기영동법은 아미노산, 뉴클레오티드, 단백질 등과 같은 하전된 물질들을 분리하거나 분석하는데 매우 효과적인 방법으로 이용된다. 전기영동법은 여러 종류가 있는데, 첫 번째로는 이동계면 전기영동법이다. 두 번째는 띠 전기영동법이다. 이 방법은 적.. Biology/일반 | 세포 생물학 2024. 1. 22.

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  보건환경미생물학실험 | Observation of the expressed protein via SDS-PAGE TIP SDS-PAGE를 통해서 미생물이 발현한 단백질을 크기로서 구분해내고자 한다. 2-D electrophoresis 후에 그 튜브는 수직판 겔의 윗부분과 수평적으로 위치하고 단백질의 그 튜브 밖으로 나와서 크기에 따라 분리되는 젤로 이동한다. 그것이 2-D gel이며, SDS가 사용되고, 계면활성제는 단백질의 소수성 부위에 붙어 모두 음전하를 만든다. 단백질은 같은 전하이므로 전하보다는 M.W.에 의해 분석된다. 음전하를 띠는 단백질은 양전하 쪽으로 이동한다. 실험 방법 1. IPTG Induction 1) pPSC1(pPROEX-1 + pnrB)가 도입되어 있는 E. coli BL21을 LB에서 37℃ overnight로 배양한다. 2) 계대배양으로 pPSC1 : LB를 1:100 또는 1:50으.. Engineering/환경 | 토양 | 폐기물처리 공학 2022. 10. 11.

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  세포생물학실험 | SDS-Page TIP  SDS-PAGE는 DNA를 전기영동으로 분리하여 크기를 알아보듯이 단백질도 SDS를 이용하여 전하는 모두 잃게 하고 크기에 의해 분리되게 만들어 전기영동을 통해 단백질의 크기를 알아본다.   Sodium dodecyl sulfate-polyacryamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)는 단백질을 정제하는 동안 이를 monitor하고, 정제된 단백질의 동질성(homogeneity)을 알기 위한 가장 좋은 방법이다. SDS-PAGE는 일반적으로 단위체의 분자량을 결정하고, 정제된 단백질의 단위체 구성을 알기 위해 사용된다. SDS-PAGE는 더 깊은 연구를 위한 충분한 단백질을 얻기 위해 scale up될 수 있다.   실험 방법1. 실험 과정1) 각 lane 별로 30㎕.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 30.

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  일반생물학실험 | Expression of recombinant α-synuclein gene 실험 방법 1. 실험 과정 1) BL21의 transformation을 시행한 후 배양시킨 배지로부터 E.coli colony를 따서 LB+Amp liquid Media 25㎖에 접종하여 suspension culture를 했다. overnight culture를 한 후 LB+Amp liquid media 325㎖에 부었다. OD를 측정하기 위해서는 처음에 박테리아가 없는 것을 0으로 잡고 우리가 접종하여 키우던 것을 큐벳에 넣고 흡광도를 측정하면 된다. 2) 처음에 OD가 0.1이었고 2시간 후 0.2였다. 37℃에서 좀 더 culture하여 1시간 후 OD가 0.6가 되었다. 이 때 1mM의 IPTG 350㎕(1mM)를 넣은 후 15℃에서 8시간 동안 induction을 시킨다. 이 과정에서 IPTG.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 10. 7.

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  생명과학실험 | Protein Purification과 Electrophoresis(SDS-PAGE) TIP 추출해낸 Protein을 Purification하여 원하는 단백질만을 얻어내는 방법을 알아보고, SDS-PAGE Gel을 이용해 Electrophoresis하여 직접 눈으로 확인한다. 친화성 크로마토그래피 (affinity chromatography) 1) 친화성 크로마토그래피는 단백질과 지지체 위에 결합되어 있는 ligand 사이의 특이한 화학적 상호작용에 기초로 하는 분리 방법 예) 효소-억제제, 항원-항체 반응 2) Ligand 와 단백질 사이의 친화성 결합은 분자의 크기와 모양에 특이적인 결합 (Specific binding) 3) Column 내 정지상에 단백질과 상호작용하는 ligand 를 결합시킨 지지체 사용 4) 친화성 크로마토그래피에서 ligand 를 붙일 때 고체 matrix 에.. Biology/생명 과학 | 공학 2020. 9. 14.

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  생화학실험 | Western Blotting - SDS-Page TIP 1. 단백질을 크기별로 분리하는 기술로 항원-항체 반응을 이용하여 전체 단백질에서 특정 단백질만을 Detection 할 수 있다. 2. 본 Western Blotting은 뉴런으로 분화하기 전인 Neuroblastoma(Ne,신경모세포)를 사용해 신경모세포가 암이 되게 유발하는 단백질을 찾을 수 있다. Gel electrophoresis에 대한 세부적인 이론이 복잡하고 현재로서는 불완전할지라도, 그 기본적인 개념은 쉽게 이해될 수 있다. 간단히 말해서 전기영동 분석은 전하를 띤 입자들이 외부에서 공급된 전기장의 영향을 받아서 반대 부호를 가진 전극 쪽으로 이동하는 데서 기인한다. 입자들의 움직임은 주위의 molecular sieve로서 역할을 하는 gel matrix와의 상호작용에 의해 지연된다... Biology/생화학 2020. 5. 28.

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  생화학실험 | Western Blot TIP 항원에 대한 항체의 특이적 결합을 이용하여 단백질 혼합물로부터 어떤 특정 단백질을 분석하는 western blot의 원리를 이해하고, 단백질의 SDS-PAGE분리, 단백질의 gel로부터 membrane으로의 transfer, 항체반응 및 항체에 부착된 효소의 반응에 의한 발색반응 등의 실험기법을 습득한다. Immunoblot(western blot)의 원리 immuno blot이라고도 부르는 western blot은 antigen과 antibody사이의 특이적인 결합을 이용하여 시료 속에 위치한 단백질을 정성적/정량적으로 분석하는 방법이다. 단백질이 transfer되어있는 membrane에 원하는 단백질의 antibody를 넣어주면 항원 항체반응을 일으켜 antibody가 원하는 단백질 band에.. Biology/생화학 2020. 5. 26.

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  분자생물학실험 | Western blotting Western blot은 여러 단백질의 혼합물로부터 어떤 특정단백질을 찾아내는 기법으로서 찾고자 하는 단백질에 대한 항체를 사용하여 항원-항체 반응을 일으킴으로써 특정단백질의 존재여부를 밝혀낸다. 특정 단백질을 찾기 위해서 먼저 gel electrophoresis를 이용하여 크기별로 분리해낸다. 단백질을 순수하게 크기별로 분리해 내기 위해서는 단백질의 단위 질량당 charge와 3차원 folding 구조를 모두 같게 해줘야 한다. 이런 이유로, 단백질은 SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electro phoresis)를 수행한다. 이는, SDS를 detergent로서 이용하여 단백질을 모두 단위 질량당 같은 정도의 negative charge를 띠.. Biology/분자생물학 2020. 4. 24.

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  영양생화학실험 | SDS-PAGE에 의한 단백질 분리와 Western Blotting TIP SDS-PAGE로 단백질을 분리한 후 전기영동을 통해 단백질의 분자량을 측정, 단백질항체이용 분석을 할 수 있다. Western Blot 표적 단백질에 대한 항체를 이용하여 항원-항체 반응으로 그 단백질을 확인하는 방법. 단백질을 비특이적으로 결합하는 nitrocellulose paper의 특성을 이용하여 SDS-PAGE 방법으로 분리된 단백질을 NC종이로 전기이동 시킨 다음 특정 단백질에 대한 항체를 이용하여 그 특정 단백질의 존재 여부, 위치, 양 등을 확인할 수 있다. 먼저 NC종이로 옮겨진 단백질이 더 이상 비특이적으로 결합하지 않게 하기위해서 blocking 한 후 특정 단백질에 대한 항체인 1차 항체를 결합시킨다. 항체에 대한 단백질의 결합은 특이적이므로 강하게 붙어 있는다. 이를 보기.. Engineering/식품 영양 | 공학 2020. 4. 2.

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  생화학실험 | β-Galactosidase purification & activity & SDS PAGE TIP 음이온교환 크로마토그래피를 이용하여 우리가 얻고자 하는 β-galactosidase를 분리해낸 후 ONPG와 반응시켜 효소의 활성을 확인하고 SDS-PAGE를 이용하여 정제된 β-galactosidase의 밴드 존재유무와 위치를 알아보는 것이었다. 크로마토그래피(Chromatography) 크로마토그래피는 혼합물로부터 그 성분들을 순수하게 분리하거나 확인, 정량하는데 사용하는 편리한 방법 중의 하나이다. 이 방법에 의한 물질의 불리는 혼합물이 정지상(stationary Phase)이나 이동상(mobile phase)에 대한 친화성이 서로 다른 점을 이용하는 것으로, 이 친화성에 중요한 영향을 미치는 인자는 흡착, 이온화 및 분배계수들로써 여러 종류의 크로마토그래피는 이들 인자가 서로 합하여 작용하.. Biology/생화학 2020. 3. 15.

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  분자생물학실험 | Western blotting TIP 1. PTM(post-translational modifications)의 의미와 N-linked 와 O-linked glycosylation의 차이를 알 수 있다. 2. 균주 Hansenula polymorpha를 YPM배지에서 배양한 후, TCA down을 통해 세포외 단백질을 농축하여 얻고 cell lysis를 통해 세포내 GOD 단백질을 얻고 OD값 측정으로 단백질 정량을 할 수 있다. 3. SDS-PAGE의 방법과 원리를 이해하고 만들어 Western blotting을 통해 GOD 단백질의 발현 여부와 그 크기를 알 수 있다. SDS-Page Acrylamide를 가교제 (cross-linker)로 중합한 polyacrylamide gel은 acrylamide와 가교제의 농도 및 비율에 .. Biology/분자생물학 2020. 1. 31.

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  생화학실험 | Protein Purification & SDS-PAGE TIP Protein Purification을 이해하고 SDS-PAGE 를 이용하여 Protein 을 정제해본다 전기영동 전기영동(electrophoresis)은 이온교환크로마토그래피와 마찬가지로 단백질분자의 전하를 이용한 분리, 분석법이다. 단백질 분자는 보통 등전점 이외의 pH에서는 양 또는 음의 전하를 가지고 있어서 일정한 pH의 완충액 중에서 직류전류를 가하면 양극 또는 음극방향으로 이동한다. 즉 단백질 분자의 전하량, 분자의 크기에 따라 전장 중에서 이동하는 속도가 다른 점을 이용하여 분리, 분석하는 것이다. 단백질을 여과지, 전분이나 agarose와 같은 다당류 gel, polyacrylamide gel 등과 같은 것을 담체로 하여 전기영동하면 단백질은 band를 형성하여 분리되므로 분리, 분.. Biology/생화학 2019. 11. 6.