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  일반생물학실험 | Cell lysis, Bradford Assay TIP Transfection, harvest가 잘 이루어졌는지 알기 위해 cell lysis를 하여 lysate를 얻고 Bradford assay를 통해 protein을 측정한 후 loading sample을 완성한다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) lysis buffer를 계산하여 만든다 2) Deep freezer에 얼려놓은 sample을 가져온다. 3) sample이 어느정도 녹은 후 만들어 놓은 lysis buffer를 140㎕씩 넣는다. 4) Pipetting을 하여 바닥에 붙은 cell을 떨어뜨리고 전부 E-tube에 담는다. 5) E-tube를 약 5초간 vortexing하고 ice에 넣어 10mins 기다린다. 6) Centrifuge (12500rpm, 12mins, 4℃) 7) Pe.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 27.

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  일반생물학실험 | 혈관, 혈액, 혈액형과 유전자 빈도 TIP 혈관 및 혈액에 대해 알아보고 혈액형의 판정과 유전자 빈도를 조사한다. 혈액의 구성 사람의 혈액은 무게가 체중의 8%를 차지하며, 물보다 점성이 5～6배 크고 pH는 약 7.4이다. 1. 혈구(blood cell) ① 적혈구(erythrocyte, red blood cell; RBC) : 직경이 6～8㎛ 정도인 가운데가 오목한 원반형이며, 핵이 없다. 적혈구는 혈구 중 가장 그 수가 많아서 혈액 1㎕ 당 약 400만～600만 개가 들어 있다. 적혈구에는 산소를 운반하는 혈색소인 헤모글로빈이 들어 있기 때문에 붉게 보이며, 그 결과 혈액 전체도 붉은 색을 띤다. ② 백혈구(leucocyte, white blood cell; WBC) : 백혈구는 직경이 12～25㎛ 정도로 모양이 일정하지 않으며 핵을.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 26.

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  일반생물학실험 | 발효와 호흡 TIP 발효와 호흡과정의 속도 비교와 함께, 발효의 산물에 대해 알아보고, 발효와 호흡의 차이를 알아보자 살아 있는 세포를 위한 가장 보편적인 연료는 포도당이다. 많은 다른 화합물은 먹이로서 제공된다. 그러나 이들의 거의 모두는 포도당으로 전환되거나 포도당 대사의 한 단계 한 단계에서 중간 대사물로 전환된다. 이 과정에서 세포는 ATP라는 형태의 에너지를 수확하게 된다. 기본적으로 세포의 이러한 연료전환 과정에는 발효와 호흡 과정이 포함되는데, 먼저 호흡은 산소를 이용할 수 있을 때 작동하여 이산화탄소와 물을 방출한다. 그리고 이것은 피루브산 산호, 시트르산회로, 호흡 사슬의 과정으로 구성된다. 다음으로 발효는 산소가 없는 조건하에서도 세포가 살아남기 위하여 에너지 생산과정을 하는 과정이다. 이 과정은 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 24.

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  일반생물학실험 | Transformation - bacterial genetics TIP E.coli의 일종인 DH5α를 transformation하고, LA배지와 LK배지에 배양하여 콜로니가 형성되는지 관찰한다. Transformation 원래 Transformation은 형질전환이란 말이다. 형질전환은 외부로부터 주어진 DNA에 의하여 생물의 유전적인 성질이 변하는 일을 말한다. 다당류로 이루어진 두꺼운 막, 즉 협막을 가진 S형균으로부터 DNA를 추출하여 이것을 다당류성 협막을 가지지 않은 R형균에 작용시키면 R형균의 일부가 S형균으로 변한다. 이것은 S형 세균의 DAN 가 R형 세균 속에 들어가서 유전자 발현을 하기 때문이다. 전환을 일으키는데 필요한 DNA의 최소량은 약 10만분의 1 mol이며, DNA의 single strand를 주는 것보다도 double strand를 주.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 22.

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  일반생물학실험 | 발효균의 관찰 TIP 현미경의 구조 및 사용법을 익혀 생물학 실험의 원활한 진행을 할 수 있으며 막걸리 속의 효모를 관찰함으로써 주의 사항을 습득한다. 효모의 특성 효모는 곰팡이와 같은 진균류(fungi)에 속하지만 일반적인 곰팡이와 달리 균사를 만들지 않고 단세포로 되어 있고 증식은 주로 출아법(budding)에 의한다. 효모는 공기의 존재와 무관하게 자라는 통성 혐기성 미생물로서 알코올발효능이 강한 종류가 많아서 예부터 양조, 알코올제조 제빵 등에 이용되어 왔으며 균체는 식량 및 사료용의 당백질, 비타민, 핵산물질의 원료 등으로 이용되기도 한다. 때로는 된장, 간장, 맥주, 포도주, 청량음료, 꿀 등을 변질시키기도 한다. 세포 형태는 구형이나 타원형을 나타나는 것이 많지만 소시지(sausage)형와 레몬형 등 다양.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 21.

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  일반생물학실험 | Transformation - 미생물에서 재조합 단백질 발현 TIP  E.coli의 transformation 실험을 통해서 유전 공학에 많이 쓰이는 transformation의 기작을 이해하고, 그 방법을 익힌다.   형질전환(TRANSFORMATION)형질전환이란 수용세포에 노출된 DNA가 흡수, 통합, 발현되는 과정을 나타내며 몇몇의 박테리아 사이에서 자연적으로 일어나는 현상이다 (예로 Stretococcus와 Bacillus). 대장균을 포함한 다른 종은 외부DNA를 흡수할 능력이 없다. 이러한 한계점을 극복하기 위해서 수용세포로 DNA를 삽입하기 위한 인공적인 방법이 고안되었고 수많은 실험생물에 적용되었다. 움직이게 할 수 있는 DNA의 2번째 방법인 형질전환은 1928년 Fred Griffith에 의해 발견되었다.  형질전환은 유전자 형태에서 수용성 C.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 20.

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  일반생물학실험 | 소화 효소의 활성과 온도 TIP 아밀라아제의 온도와 소화 효소의 관계를 실험해본다. 소화 몸이 흡수할 수 있을 정도의 작은 분자로 음식물을 잘게 부수는 과정으로 이러한 소화를 통해 고분자를 구성 단량체로 쪼개어 자신의 물질을 만드는 데 사용하거나, ATP를 생산하는데 사용한다. 1. 세포내 소화 : 내부에 세포 자체의 세포질을 소화시키지 않고 음식을 부수는 가수분해효소가 들어있어서 세포내에서 소화시키는 소화이다. 해면동물은 음식을 세포내 소화를 통해 소화시키는 동물이다. 2. 세포외 소화 : 세포외 소화는 동물의 외부와 연속적으로 연결된 구획 내에서 일어난다. 이러한 구획을 가지는 소화는 세포내 소화보다 더 큰 음식을 먹을 수 있게 해준다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 실험에 필요한 아밀라아제용액, 요오드용액, 베네딕트용액을.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 19.

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  일반생물학실험 | 뿌리 세포 관찰을 통한 체세포 분열 과정의 이해 TIP 양파의 뿌리로부터 표본을 만들어 체세포 분열의 과정을 직접 관찰하고, 체세포 분열의 각 시기를 관찰하고 구분함으로써 체세포 분열의 의미를 이해한다. 세포 분열 1. 핵분열 : 세포질분열(식물세포: 세포판형성, 동물세포: 원형질함입) 핵분열의 각 시기로써 연속적으로 일어난다. 핵분열 과정은 염색체의 행동을 중심으로 전기, 중기, 후기 말기로 구분한다. ① 전기 : 염색사가 응축하여 염색체를 형성한다. 염색체는 세로로 갈라져 두 개의 염색분체로 구성되어 있으며 각 염색분체에는 S기에 복제된 동일한 DNA분자가 들어있다. 핵막과 인이 사라지고 방추사가 나타난다. 동물세포에서는 중심립에서 가느다란 실 모양의 방추사가 뻗어 나오고, 식물세포에서는 양극에서 극모가 나타나 여기에서 방추사를 형성한다. ② 중기.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 19.

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  일반생물학실험 | 양파 근단 세포의 유사분열 관찰 TIP 체세포의 세포분열 과정인 유사분열의 전 과정을 관찰하고 염색체의 구조와 기능을 이해한다. 동물세포와 식물세포 세포질 분열 1. 동물세포 세포질 만입은 세포막이 밖에서 안으로 함입하여 들어오면서 세포질을 분리함으로 2개의 딸세포를 형성한다. 세포의 양극 사이의 중앙부에서 액틴 필라멘트가 세포의 주위를 띠 모양으로 둘러싸고 이 띠가 수축함에 따라 세포가 함입되는 것이다. 2. 식물세포 세포판 형성으로 세포의 중앙에 세포판이 만들어지고, 이것이 바깥쪽으로 성장하여 세포질을 분리함으로써 2개의 딸세포를 형성한다. 식물세포는 세포벽으로 둘러싸여 있기 때문에 단순한 응축에 의해 세포질 분열이 일어날 수 없다. 대신에 막으로 둘러싸인 세포판을 형성하게 된다. 이 세포판은 골지체로부터 조그마한 막성 소낭이 추적.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 15.

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  일반생물학실험 | 유사 분열 TIP 유사분열의 전 과정을 관찰하고 시기별 염색체 양상을 알 수 있다. 세포 분열은 세포에서 세포로의 유전적인 연속성을 유지해주므로 생물의 성장이나 중식의 바탕이 된다. 세포분열의 과정은 핵분열과 세포질 분열로 나누어지며 핵분열은 다시 그 양상에 따라 유사분열과 무사분열로 구별되는데 체세포분열과 감수분열은 모두 유사분열에 속한다, 체세포 분열은 동물의 배양세포에서 관찰이 가능하나 특수한 기술이 요구되므로 양파나 보리 등의 식물의 뿌리세포를 실험재료로 주로 사용하게 된다. 세포분열의 두 가지 방식 중 하나는 유사분열이다. 다세포 생물에 있어서 모든 체세포는 두 개의 배우자 세포가 융합하여 이루어진 집합자인 한 개의 모세포로부터 유사분열이라고 하는 분열의 고정을 통해 유리된 것이다. 유사분열의 기능은 각 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 12.

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  일반생물학실험 | 세포 분열 관찰 - 유사분열 TIP 현미경을 이용하여 유사분열을 관찰하고 그의 특징을 알아본다. 유사 분열 1개의 세포가 2개의 세포로 갈라져 세포의 개수가 불어나는 생명현상을 말한다. 이 과정에서 분열되는 세포를 '모세포', 분열 결과 새로 생겨난 세포를 '딸세포'라 한다. 딸세포는 모세포와 같은 수의 염색체를 가지고 있다. 세포주기는 G1기, S기, G2기, M 기 등 4단계로 나누어진다. G1기, S기, G2기를 합쳐 간기(Interphase)라고도 한다. G1기와 G2기에 물질대사가 활발하게 일어나고 S기 동안에는 DNA가 합성된다. 염색체들은 유사분열이 시작되기 전 S기 동안 복제되고, 간기 동안에 핵 내에는 느슨한 형태의 풀어진 염색체가 존재한다. 그 다음 단계는 유사분열(M기)로 전기, 중기, 후기, 말기의 단계로 이루.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 10.

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  일반생물학실험 | 단백질의 정량 및 정성 분석 TIP 정성분석(뷰렛방법)을 통해 단백질의 포함 유무를 분석하고 정량분석(BCA법)을 통해 단백질의 양을 측정한다. 단백질 모든 단백질은 널리 존재하는 20가지 종류의 아미노산이 특징적인 선상의 서열로 공유결합된 것이다. 이러한 각 아미노산은 각각의 특유의 화학적인 성질을 나타내는 곁사슬을 가지고 있으며 이 20가지 종류의 전구체 분자로 된 집단은 단백질 구조의 언어로 쓰이는 알파벳과 같다고 볼 수 있다. 단백질은 몇 개의 아미노산 잔기로 이루어진 비교적 간단한 펩타이드에서 분자량이 수백만이나 되는 거대한 중합체(polymer)까지 존재한다. 아미노산은 R기의 극성과 전하(pH7에서)에 따라 5가지 종류로 분류할 수 있다. 비극성, 지방족 R기 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 글라이신, 메싸이오닌, .. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 8.

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  일반생물학실험 | 종이 크로마토그래피에 의한 물질 분리 TIP 종이 크로마토그래피(paper chromatography)를 이용하여 광합성 색소와 아미노산을 분리한다. 종이 크로마토그래피(paper chromatography; PC) 종이 크로마토그래피에서는 여과지 표면에 흡착되어 있는 물이 고정상이고 전개액으로 사용된는 유기용매가 이동상이 된다. 혼합물은 모세관 현상에 의해 전개액을 따라 여과지를 이동할 때 물(고정상)과 전개액(이동상)에 녹는 비에 따라 이동 속도에 차이가 난다. 즉, 물은 여과지의 하이드록시기(-OH)와 수소결합을 하면서 혼합물간에 이동 속도의 차이를 만들고, 이에따라 혼합물은 분리된다. 따라서 유기용매에 잘 녹는 물질이 덜 녹는 물질이 덜 녹는 물질보다 멀리까지 이동한다. 여과지는 정지상을 지지해 주는 지지체(supporting med.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 6.

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  일반생물학실험 | Gene Cloning Gene cloning 생물체의 특정 유전자를 세포에서 추출한 후 그 유전자를 벡터 DNA에 삽입하고 Competent Cell에서 증식시킴으로써 균일한 유전자 집단을 생성하는 기술이다. DNA preparation, Insert DNA PCR, 제한효소 처리, Ligation, Transformation의 5가지 과정을 거쳐 진행된다. 먼저 원하는 유전자가 삽입될 플라스미드를 준비하기 위해 대장균을 배양한 후 Alkaline lysis를 이용해 균을 높은 pH에서 강한 음이온 세정제인 SDS로 처리하여 세포벽을 파쇄한다. 이때 염색체 DNA와 단백질, 깨진 세포벽 등은 SDS와 함께 침전되어 가라앉고 플라스미드 DNA는 용액 속에 유리되는데 이들을 원심분리하여 상층액으로부터 플라스미드 DNA를 분리 정.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 4.

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  일반생물학실험 | 흰점박이 꽃무지 유충의 혈장 관찰 - 동물세포관찰 TIP 흰점박이 꽃무지를 통해 동물의 혈장을 관찰하고, 관찰을 통해 동물세포의 특징에 대해 이해한다. 흰점박이 꽃무지 몸 길이는 17～22㎜이며 몸은 광택이 강한 녹갈색이나 구릿빛 또는 붉은빛을 띠는데 녹색, 남색, 흑남색, 흑자색 등의 변이도 있다. 후경절 안쪽의 털은 회갈색이며, 중흉돌기의 끝은 은행모양이고, 딱지날개의 끝은 뾰족하게 돌출하였다. 교미구는 가는 직선형이며, 내판은 좁고 긴데 끝에 둥글게 돌출한 부분이 있다. 한국, 일본, 러시아에 분포하며 성충은 한여름에 많이 활동한다. 참나무의 진액, 자두나무, 살구나무, 포도나무 등에 모이며 수박과 같은 과일에도 잘 모인다. 일반적으로 유충은 굼뱅이라고 불린다. 유충은 동의보감에도 기록되어있는 약재이다. 약재뿐만 아니라 식용으로도 사용되는데, 먹을.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 4.

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  일반생물학실험 | 단백질 분해 효소의 활성측정 TIP 연육작용의 원리를 알아보고, 이러한 작용을 하는 과일 속에 들어있는 단백질 분해 효소의 종류에 따른 효소활성도의 차이를 비교해 본다. 육류의 연화 (tenderization of meat) : 육류 중의 프로테아제의 작용에 의해 육질이 연해지는 것 육류의 표면에 있는 근형질막이 파괴되고 actomyosin을 가수 분해시켜 근원섬유로 나누어지게 함 연결조직의 섬유상 단백질에도 작용하여 collagen이나 elastin을 분해시킬 때 완전한 근육분해가 일어남 효소활성측정 : 효소의 측정, 즉 활성을 측정한다는 것은 효소의 유효량을 규명하는 것 효소반응은 일반적으로 반응시간이 경과함에 따라 반응속도가 경감하기 때문에 활성측정에는 초기속도를 사용 효소반응속도식인 Michaelis-Menten 식도 이러한.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 2.

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  일반생물학실험 | 효소의 활성 측정 TIP 1. pH의 변화에 따른 효소의 반응속도를 비교하고 최적의 pH를 알아낸다. 2. 온도변화에 따른 효소의 반응속도를 비교하고 최적의 온도를 알아낸다. 효소(enzyme) 일반적으로 화학반응에서 반응물질 외에 미량의 촉매는 반응속도를 증가시키는 역할을 한다. 생물체 내에서 일어나는 화학반응도 촉매에 의해 속도가 빨라진다. 특별히 생물체 내에서 이러한 촉매의 역할을 하는 것을 효소라고 부르며 단백질로 이루어져 있다. 단백질로 이루어져 있기 때문에 무기촉매와는 달리 온도나 pH(수소이온농도) 등 환경 요인에 의하여 기능이 크게 영향을 받는다. 즉, 모든 효소는 특정한 온도 범위 내에서 가장 활발하게 작용한다. 대개의 효소는 온도가 35∼45℃에서 활성이 가장 크다. 하지만 온도가 그 범위를 넘어서면, .. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 29.

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  일반생물학실험 | Bradford 법을 이용한 단백질 정량분석 - The quantitative analysis of proteins by Bradford method TIP 표준 단백질용액(standard protein solution)을 이용하여 단백질 농도 검량선을 작성하고 미지 시료의 단백질 농도를 측정한다. 단백질 분석 기존 켈달 정량분석 방법에서는 시료 중에 함유되어 있는 총 질소함량을 측정하여 단백질 함량을 계산할 수 있도록 되어 있어서 개략적인 분석만 가능케 되어 있는 단점이 있다. 이러한 단점을 보완하기 위하여 많은 학자들은 순 단백질의 총량을 정량할 수 있도록 하는 새로운 방법들을 개발하고 있다. 이들 중 현재까지 많이 이용되고 있는 몇 가지 방법에는 뷰렛방법, Lowry 방법, 탁도 측정법, 펩티드 측정법, 크로마토그래피, 비색법 및 분광광도법 등을 들 수 있다. 크로마토그래피는 두 개의 서로 다른 상을 이용하여 화합물을 분리한다. 즉, 정지상과 이.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 26.