반응형 일반생물학실험 | 혈액에서 DNA 추출 TIP 1. 혈액에서 DNA를 추출한다 2. 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction; PCR) 산물을 만든다. PCRDNA 사슬 중에서 목적하는 일부분만을 대량으로 증폭시키는 방법으로 뮬리스에 의해 고안된 방법이다. 처음에는 대장균에서 분리한 DNA 중합효소 I을 사용하였으므로 사이클이 지날 때마다 효소를 첨가해야 하는 불편 때문에 널리 이용되지 않았으나 사이키가 높은 온도에서도 그 활성이 없어지지 않는 Taq DNA 중합효소를 발견한 후 실험방법이 보편화되었다. 실험 방법1. 시작하기 전에1) 프로테아제 K 1병을 뉴클레아제 프리워터 1,250pl에 완전히 녹인다.2) WA1 버퍼에 30㎖ absolute ethanol 넣는다. 2. 전혈에서 DNA 추출 1) 단백.. Biology/일반 | 세포 생물학 2024. 7. 2. 생화학실험 | PCR과 전기영동 TIP PCR은 아주 소량의 시료로도 우리가 원하는 DNA 서열을 엄청난 양과 높은 정확도로 증폭시킬 수 있다. 전기영동은 전하를 띤 분자화합물에 일정한 전압을 걸어주어 분자량, 전하량등의 물리화학적 성질의 차이에 따라 분리시키는 방법이다. PCR 정의 PCR(polymerase chain reaction, 중합효소 연쇄반응)이란 DNA polymerase를 이용하여 원하는 부위의 DNA를 선택적으로 대량 복제 하는 방법이다. 1983년 PCR이 고안되어 적은 양으로 존재하는 DNA서열 탐지와 cloning이 가능하게 되었다. 방법은 표적 DNA서열의 증폭(amplification)에 기초를 두고 있다. 증폭하고자 하는 DNA내 표적 strand 3' 말단에 상보적인 두 개의 특정 oligonucleot.. Biology/생화학 2022. 10. 5. 일반생물학실험 | DNA Electrophoresis TIP 전기영동의 의미를 이해하고 DNA의 크기 및 구조에 따른 결과차이를 이해한다. Agarose gel에 DNA와 loading dye를 넣고 전기를 걸어주면 DNA는 인산기 때문에 매질을 타고 양전하 방향으로 움직이게 된다. 이때 움직이는 속도는 DNA의 크기에 다라 다르므로 매질 내에서 종류에 따라 분리하게 되며 전기영동은 DNA의 크기에 따른 분리를 한다. DNA 전기영동의 원리와 특성 전기영동은 dna와 같은 전하를 띤 물질을 크기에 따라 구분하기 위해 사용되는 기술이다. Dna는 인산기로 인해 음전하를 띄기 때문에 전류가 가해졌을 때 gel안에서 이동할 수 있다. 이 때 gel은 한쪽에 양전하와 반대쪽에 음전하가 가해져 DNA가 이동할 수 있게 되어있다. DNA크기가 작을수록 gel을 더 빠.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 10. 28. 일반생물학실험 | PCR(Polymerase Chain Reaction) TIP PCR과 전기영동법을 이해하고 증폭된 DNA를 관찰하기 위해 실험을 시행한다. PCR(Polymerase Chain Reaction) 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)은 1983년 Kary Mullis에 의해 고안 되었는데 이는 80년대 제한효소의 발견에 의한 Gene Cloning법에 이어 90년대를 화려 하게 장식한 생명공학 연구의 혁명적인 사건이다. PCR은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법으로서, 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA 합성이 가능하므로 분자 생물학적으로 제한효소의 발견만큼 획기적인 것이라고 할 수 있다. 중합효소 연쇄반응을 통하여 in vitro상에서 특정 부.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 12. 20. 화공기초실험 | 염색체 DNA의 정제 및 분석 Agarose gel의 전기영동법 단백질이나 핵산 등의 고분자물질은 전하를 띄므로 이를 기초로 하여 이들 분자를 전기장에서 이동 분리시켜 이들의 순도나 성질의 분석 및 분리 등에 사용하는 방법을 전기영동법이라고 한다. 전기영동에서 하전 분자의 이동 방향은 그 분자가 갖는 전하의 부호에 의하여 결정되지만, 전기영동에서 고분자를 움직이는 힘은 전장의 세기(E)이다. 전기영동에 필요한 세가지 성분은 1)전하를 띤 입자, 2)전장, 3)이동이 일어날 수 있는 medium이다. 본 실험에서 DNA분자를 사용했는데 이는 DNA 골격 축에 존재하는 인산 때문에 전기적으로 음전하를 뛰어서 전기장에 놓일 때 양전극을 향해 이동하게 된다. 이때 이동하는 속도는 1)분자의 net electric charge, 2)분자의 크.. Engineering/화학 공학 | 단위조작 | 유체역학 2020. 5. 6. 일반생물학실험 | DNA 추출 및 PCR TIP 쥐의 근육세포에서 DNA를 추출하여 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction : PCR) 실험에 이용할 product를 만들고 전기영동으로 그 결과를 확인한다. DNA 복제 DNA가 단백질의 아미노산 배열순서를 결정하는 것은 먼저 DNA 2중나선의 일부분이 풀리고, 풀린 두 외가닥 사슬의 어느 한쪽 사슬에서 전령 RNA(messenger RNA:mRNA)가 만들어진다. 이 mRNA는 DNA와 마찬가지로 염기-펜토오스-인산으로 된 뉴클레오티드의 기다란 연결체인데 펜토오스가 리보오스이며, 염기의 종류가 A,G,C 그리고 U(DNA의 T 대신 U이다)인 점이 다르다. 또 DNA처럼 2중나선이 아니고 외가닥 사슬로만 존재한다. DNA의 한 쪽 가닥 위에서 만들어진 mRNA는 그 염.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 4. 22. 생화학실험 | PCR-Mediated Mutagenesis TIP PCR의 종류와 원리에 대해서 알아보고 PCR-mediated deletion 실험을 통해 DNA의 원하는 부위를 제거하여 증폭할 수 있다. Site-directed mutagenesis Site-directed mutagenesis는 특정 DNA 염기서열에 돌연변이를 도입하는 기법으로 분자생물학의 핵심기술이다. PCR을 응용한 다양한 site-directed mutagenesis 기법이 개발되었으며 계속 진화하고 있다. 이를 "PCR-mediated site-directed mutagenesis"라고 한다. 최근 가장 진화한 형태인 "overlap extension PCR"이 널리 이용되고 있다. Overlap extension PCR은 돌연변이(substitution, insertion, an.. Biology/생화학 2020. 2. 10. 분자생물학실험 | RNA Isolation and analysis TIP 세포에서 RNA를 추출하기 위해서 RNA를 RT–PCR 하여 cDNA 상태로 만들고 cDNA를 PCR 하여 sample을 loading 하고 band를 확인하기 위함이다. RNA 추출 원리 포유세포는 보통 한 세포 당 10-5㎖ RNA를 포함하고 있으며 이 중 80∼85%가 rRNA, 15∼20% 가 tRNA, 1∼5%가 mRNA로 이루어져 있다. 리보솜 RNA나 tRNA 등은 일정한 크기와 염기서열을 가 지고 있기 때문에 전기영동, 초 원심 분리 및 크로마토그래피에 의해 순수하게 분리할 수 있는 반면, mRNA는 크기도 다양하고 많은 종류가 혼합되어 있기 때문에 한 종류의 mRNA를 순수 분리하기가 쉽지 않다. 그러나 진핵세포 mRNA는 3말단에 poly(A)를 가지고 있기 때문에 리보솜 RNA.. Biology/분자생물학 2020. 2. 10. 식물분자생물학 연습 | Polymerase chain reaction Agarose Gel Analysis Polymerase chain reaction 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법으로서, 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA 합성이 가능하므로 분자 생물학적으로 제한효소의 발견만큼 획기적인 것이라고 할 수 있습니다. 즉 genomic DNA와 같은 아주 큰 DNA로부터 원하는 DNA 부분만을 선택적으로 증폭시킨 후 일반적으로 사용되는 agarose gel이나 polyacrylamide gel 상에서 뚜렷하게 보이는 band로 가시화할 수가 있습니다. 중합효소 연쇄반응을 통하여 in vitro 상에서 특정 부위의 DNA를 ∼ 배까지 수 시간내에 증폭시킬 수.. Biology/분자생물학 2020. 1. 21. 분자생물학실험 | RNA 추출과 RT-PCR RNA 추출 원리 포유세포는 보통 한 세포 당 10-5㎖ RNA를 포함하고 있으며 이 중 80∼85%가 rRNA, 15∼20% 가 tRNA, 1∼5%가 mRNA로 이루어져 있다. 리보솜 RNA나 tRNA 등은 일정한 크기와 염기서열을 가 지고 있기 때문에 전기영동, 초 원심 분리 및 크로마토그래피에 의해 순수하게 분리할 수 있는 반면, mRNA는 크기도 다양하고 많은 종류가 혼합되어 있기 때문에 한 종류의 mRNA를 순수 분리 하기가 쉽지 않다. 그러나 진핵세포 mRNA는 3말단에 poly(A)를 가지고 있기 때문에 리보솜 RNA나 tRNA 등으로부터 분리해 낼 수 있다. RNA를 추출할 때 가장 주의해야 할 점은 핵산 가수분해효소에 의해 분해되지 않고 완전하게 얻는 것이며, 또한 단백질이 제거된 순수한.. Biology/분자생물학 2020. 1. 18. 분자생물학실험 | Polymerase chain reaction(PCR)에 의한 DNA절편의 증폭 TIP PCR의 원리를 이해하고 실제로 DNA의 절편을 증폭하여 본다. PCR과 체내 DNA 합성 1. DNA 두 가닥을 푸는 방법 ① PCR : 온도를 높여 주어서 DNA 이중나선을 푼다. ② 체내 DNA 합성 : 헬리카아제(DNA helicase)라는 효소를 이용하여 DNA 이중나선을 풀고, 단일 가닥 DNA 결합단백질(single strand DNA binding protein)이 분리된 DNA 사슬이 다시 되붙지 못하도록 막는다. 2. 사용하는 polymerase ① PCR : DNA 이중나선이 풀어서 합성해야 하므로, 내열성 DNA polymerase인 Taq polymerase를 사용한다. ② 체내 DNA 합성 : 체내에서는 많은 효소를 사용하기 때문에 내열성 DNA polymerase를 필요.. Biology/분자생물학 2020. 1. 2. 생명과학실험 | Simple tandem repeat를 이용한 인간유전형 분석 개인은 동일한 형태인 상동염색체라 하는 chromosome을 1쌍씩 가지고 있다. 여기서 같은 function을 갖는 유전자는 한 위치에 일정하게 존재하는데 이것을 locus라고 한다. 상동염색체는 한 쌍의 유전자이기 때문에, 개인의 형질을 결정하는 locus는 각 한 개씩 두 개가 있다. 이 두 개의 locus에 있는 유전자를 합쳐서 allele라 한다. 이 allele는 개인마다 서로 차이를 가지므로 이러한 차이를 집단크기로 분석하여 allelic variation을 조사할 수 있다. Allelic variation을 간단하게 조사하는 데에는 STR(simple tandem repeat)을 이용하는 방법이 있다. STR은 DNA에서 2개 이상의 nucleotides나 simple sequences가 .. Biology/생명 과학 | 공학 2019. 11. 22. 분자생물학개론 | The Polymerase Chain Reaction(PCR) TIP 1. The polymerase chain reaction in outline 2. PCR in more detail 3. Applications of PCR DNA의 원하는 부분을 복제·증폭시키는 분자생물학적인 기술이다. 이 기술은 사람의 게놈과 같은 매우 복잡하며 양이 지극히 미량인 DNA 용액에서 연구자가 원하는 특정 DNA 단편만을 선택적으로 증폭시킬 수 있다. 또한 증폭에 필요한 시간이 2시간 정도로 짧으며, 실험 과정이 단순하고, 전자동 기계로 증폭할 수 있기 때문에, PCR과 여기서 파생한 여러가지 기술은 분자생물학, 의료, 범죄 수사, 생물의 분류 등 DNA를 취급하는 작업 전반에서 지극히 중요한 역할을 담당하고 있다. 1970년대에 gene cloning기술의 개발은 이전에 불가능.. Biology/분자생물학 2019. 11. 21. 생화학실험 | PCR & DNA Gel Electrophoresis TIP 1. PCR을 이용하여 DNA를 증폭한 후 Agarose gel electrophoresis를 통해 DNA를 분리한다. 2. PCR의 원리를 이해하고 전기영동에 이용된 시약의 특성을 이해한다. PCR 유전자를 분석하고 연구하는데 있어서 가장 큰 문제점은 복잡한 전체 genome중에 연구 하고자 하는 유전자가 희귀하다는 것인데, PCR은 특정 DNA Sequence의 copy수를 기하 급수적으로 증폭시킬 수 있다는 점이다. 이러한 PCR을 소개하기에 앞서서 간단히 분자 생물학적인 사항을 review해 보면 먼저 DNA의 구성을 살펴보면, DNA는 다음과 같이 phosphate group(인산기) - sugar(당) - base(염기)의 세 가지 요소로 구성되는 nucleotide라는 모듈이 쌍으로 .. Biology/생화학 2019. 10. 18. 분자생물학개론 | 유전자 클로닝이 중요한 이유(Why Gene Cloning and DNA Analysis are Important) TIP 1. 초창기 유전학의 발달(The early development of genetics) 2. 유전자 클로닝의 출현 3. 유전자 클로닝이란 무엇인가 ?(What is gene cloning?) 4. 유전자 클로닝을 위해선 특수한 도구 및 기술들이 필요하다. 5. 왜 유전자 클로닝이 이토록 중요한가 ? 6. 왜 PCR(Polymerase chain reaction)이 또한 중요한가 ? 19세기에 Gregor Mendel 이 생물학적 특징들의 유전을 설명하기 위해 법칙들을 공식화시킨 이래 이 법칙들의 기본적인 가정은 한 생물체의 유전 가능한 각각의 특징이 gene(유전자)이라 불리우는 인자에 의해 제어된 것이며 gene은 세포 내 어딘가에 존재하는 물리적인 입자라고 생각되었다. 1900년 Mendel.. Biology/분자생물학 2019. 10. 11. 이전 1 다음 반응형
