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  생화학실험 | 대표적인 생화학 실험 TIP 1. 플라스미드 DNA를 통한 박테리아의 형질전환을 관찰한다. 2. selection marker의 원리를 이해하고, 박테리아를 selection한다. 3. PCR에 필요한 재료와 PCR의 원리를 이해하고, 플라스미드의 일부분을 증폭한다. 4. selection한 박테리아로부터 플라스미드를 추출하여 제한효소와 반응시킨다. 5. 제한효소와 반응시킨 플라스미드와 PCR로 증폭한 DNA를 λ/HindⅢ 마커와 같이 아가로오즈 겔로 전기영동을 하여 나오는 결과를 분석하고 이해한다. pBluescript SK & GDA의 구성 및 특징 Plasmid DNA의 일종인 pBluescript Ⅱ SK(+)는 [그림 1]과 같이 구성이 되어있으며 형질 전환시 암피실린의 내성이 생기는 DNA가 selection m.. Biology/생화학 2020. 2. 17.

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  분자생물학실험 | Gene Cloning TIP Gene cloning으로 DNA를 자르고 붙이고 변형시켜서 실험에 필요한 재조합 DNA를 제조하고, 기본적인 효소의 처리와 DNA의 분리 및 조작방법 이용하여 분자생물학의 기본을 배우기 위함이다. Gene cloning 동식물의 한 개체에서 수정을 거치지 않고, 무성생식에 의하여 양친과 똑같은 유전자 조성을 가진 개체를 얻는 기술이다. 그 개체군을 클론이라고 하며, 꺾꽃이, 접붙이기, 포기나누기 등으로 증식시킨 개체도 클론이라고 일컫는다. 클로닝은 암수의 유전자가 서로 섞이지 않으므로 우수한 품종을 보존하기 위한 가장 좋은 방법이다. 당근, 담배 등과 같은 식물에서는 성공사례가 많으며, 육종에 효과적으로 이용하고 있다. 동물의 경우도 양서류에서 성공하고 있다. 1963년 J.B 가든은 아프리카 .. Biology/분자생물학 2020. 2. 6.

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  분자생물학실험 | Western blotting TIP 1. PTM(post-translational modifications)의 의미와 N-linked 와 O-linked glycosylation의 차이를 알 수 있다. 2. 균주 Hansenula polymorpha를 YPM배지에서 배양한 후, TCA down을 통해 세포외 단백질을 농축하여 얻고 cell lysis를 통해 세포내 GOD 단백질을 얻고 OD값 측정으로 단백질 정량을 할 수 있다. 3. SDS-PAGE의 방법과 원리를 이해하고 만들어 Western blotting을 통해 GOD 단백질의 발현 여부와 그 크기를 알 수 있다. SDS-Page Acrylamide를 가교제 (cross-linker)로 중합한 polyacrylamide gel은 acrylamide와 가교제의 농도 및 비율에 .. Biology/분자생물학 2020. 1. 31.

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  생명과학실험 | DNA extraction TIP 병균에 대한 항생제를 만들거나 복제생물을 만들기 위해 자신이 원하는 DNA를 얻는다. 세포막은 인지질 이중층 구조 (미셸 구조)를 가지며, 바깥은 친수성, 안은 소수성 부분으로 나누어져 있다. 그리고 계면활성제 또한 친수성과 소수성으로 나뉘어져 있어서 소수성부분이 기름에 붙어서 분리해주는 것처럼, 세포막과 핵막을 녹여 DNA를 육안으로 관찰하기 위해서는 물과 분리해야하므로 DNA 보다 몰과의 친화력이 강한 에탄올을 사용하여 분해해준다. 전기영동은 gel 구멍에 염색된 DNA를 넣어 주면, DNA가 (-)전하를 띄는 점을 사용해서 두 전극 사이에 위치시켜 양극으로 움직이게 하는 원리를 이용한다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) Sample에 Seed extraction buffer 400㎛을 넣고 .. Biology/생명 과학 | 공학 2020. 1. 28.

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  분자생물학실험 | 제한효소 처리 및 Agarose gel에서 DNA 회수 TIP 본 실험에서는 플라스미드 DNA를 이용한 제한효소처리를 통하여, 이론적으로만 배웠던 제한효소의 반응원리를 실제로 수행하였다. 이를 통해 서로 다른 제한효소의 특성을 이해하고, 제한효소 반응 시 고려해야 할 점을 알아보았다. 그리고 Agarose gel 전기영동 결과를 관찰해 봄으로서 절단된 DNA 조각들의 크기를 알아보고 제한효소 처리가 잘 되었는지 확인해보았다. 또한 DNA 분자에서 여러 제한효소의 인식염기서열의 상대적인 위치를 알 수 있으므로 제한효소 지도를 작성해 보고자 한다. 유전자 클로닝이나 재조합, DNA의 생화학적 연구, 유전자의 구조 연구나 유전자의 발현 조절 연구의 기본이 되는 유전자 조작 기술에는 DNA의 절단과 연결, DNA 증폭이나 RNA 합성 또는 특별한 작용기의 첨가와 제.. Biology/분자생물학 2020. 1. 27.

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  식물분자생물학 연습 | Polymerase chain reaction Agarose Gel Analysis Polymerase chain reaction 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법으로서, 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA 합성이 가능하므로 분자 생물학적으로 제한효소의 발견만큼 획기적인 것이라고 할 수 있습니다. 즉 genomic DNA와 같은 아주 큰 DNA로부터 원하는 DNA 부분만을 선택적으로 증폭시킨 후 일반적으로 사용되는 agarose gel이나 polyacrylamide gel 상에서 뚜렷하게 보이는 band로 가시화할 수가 있습니다. 중합효소 연쇄반응을 통하여 in vitro 상에서 특정 부위의 DNA를 ∼ 배까지 수 시간내에 증폭시킬 수.. Biology/분자생물학 2020. 1. 21.

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  일반생물학실험 | 세포 사멸 관찰 TIP 1. 세포의 죽음을 초래하는 두 가지 기전의 차이점을 비교한다. 2. 세포 사멸에 따르는 세포막의 변화를 관찰한다. 3. 세포 사멸에 따르는 핵의 변화를 관찰한다. 프로그램 된 세포 사멸(programmed cell death, apoptosis) 세포 수와 조직의 크기를 조절하며 생체의 발생 및 항상성 유지에 필요한 과정으로 세포 분열 만큼 중요하며 활발한 분자적 작용기적이 수반된다. 핵 내에 존재하는 크로마틴이 응축되어 핵막에 늘어선 뒤 핵의 붕괴와 더불어 세포 표면이 돌출되어 세포막에 둘러싸여 떨어져 나와 세포 사멸체(apoptotic body)를 형성한다. 이러한 apoptotic body는 대식세포에 의해 제거된다. 실험 방법 1. Cell seeding과 세포사멸 유도 1) HEK293.. Biology/일반 | 세포 생물학 2019. 12. 9.

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  유전공학실험 | Plant Genomic DNA isolation TIP 1. 식물에서의 DNA 추출하는 방법을 안다. 2. Agaros Gel Electrophoresis 방법과 그에 따른 식물 DNA 양상을 안다. 식물의 DNA 식물은 진핵생물이므로 그 DNA 또한 진핵생물의 일반적인 DNA와 거의 유사하다고 할 수 있다. 최근에 이 식물세포가 동물과 거의 유사한 유전자의 구조와 기능을 가지고 있으나, 광합성 등 식물에 특이적인 기능에 관련된 유전자 및 유전현상 또한 많이 존재하고 있기 때문에 그러한 현상들을 근본적으로 분자의 측면에서 접근하는데 노력하고 있다. 또한 동물과 비교하여 식물은 외부유전자의 삽입을 통한 새로운 형질을 얻는 과정이 용이한 장점을 가지고 있다. 이러한 장점으로 인해 재조합 DNA기술을 이용하고 식물유전자를 cloning하여 유전자 조작 및 .. Biology/유전학 2019. 12. 3.

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  미생물실험 | Mini-Prep (Hybrid-Q Plasmid Rapid prep Kit) Mini Prep DNA-isolation에 있는 원리 중 하나로 Plasmid DNA분리에 사용되는 방법이며 많은 후보를 빠른 시간 내에 분석하는 방법이다. Prep은 Prepartion의 약자.DNA를 소량으로 추출한다는 의미. 주로 이용되는 Alkylation lysis(denaturation)법과 boiling method, Iithium method법이 있다. DNA와 plasmid의 고유 형태구조 원리에 의한 분리 방법으로써 세포내에 DNA는 일반적인 double-helix의 형태를 가지는 반면 plasmid는 supercoiled형태를 가짐으로써 pH변화에 따라서도 plasmid의 형태와 구조가 크게 변하지 않아 순수한 plasmid만을 추출하는 구조적 기본원리에 의한 방법이다. 실험 방법 .. Biology/미생물학 2019. 11. 16.

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  생화학실험 | Protein Purification & SDS-PAGE TIP Protein Purification을 이해하고 SDS-PAGE 를 이용하여 Protein 을 정제해본다 전기영동 전기영동(electrophoresis)은 이온교환크로마토그래피와 마찬가지로 단백질분자의 전하를 이용한 분리, 분석법이다. 단백질 분자는 보통 등전점 이외의 pH에서는 양 또는 음의 전하를 가지고 있어서 일정한 pH의 완충액 중에서 직류전류를 가하면 양극 또는 음극방향으로 이동한다. 즉 단백질 분자의 전하량, 분자의 크기에 따라 전장 중에서 이동하는 속도가 다른 점을 이용하여 분리, 분석하는 것이다. 단백질을 여과지, 전분이나 agarose와 같은 다당류 gel, polyacrylamide gel 등과 같은 것을 담체로 하여 전기영동하면 단백질은 band를 형성하여 분리되므로 분리, 분.. Biology/생화학 2019. 11. 6.

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  유전학실험 | 혈액을 통해 유전자 검사하는 과정 채혈 1. 소독을 위해 70% isopropyl alcohol이 권장되며 채혈할 부위를 중심으로 바깥쪽으로 원형을 그리듯이 닦아낸다. 소독약이 마르지 않았을 때 채혈을 하면 용혈이 발생하므로 소독약이 완전히 마른 후에 채혈을 실시한다. 2. 압박대는 소독약이 마른 후 채혈 직전에 사용하거나, 묶은 상태로 1분 이상 방치해서는 안된다. 3. 채혈은 바늘 굵기가 18-23G인 주사기를 사용하거나 상품화된 진공채혈관과 일회용 채혈바늘을 사용하여 실시한다. 4. 주사기를 사용하여 채혈할 때는 주사바늘의 사면이 위로 향하게 하여 채혈하고자 하는 정맥에 찌른다. 5. 정맥내에 주사바늘이 들어갔음을 확인하고 지혈대를 푼 후에 혈액을 채취한다. 이때 혈액채취를 빨리하면 피가 잘 나오지 않거나 적혈구가 용혈되는 경우가 .. Biology/유전학 2019. 10. 28.

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  생화학실험 | DNA purification & DNA Gel Electrophoresis TIP 1. DNA, RNA, Protein 등의 혼합물, RNA, Protein과 같은 contaminants를 제거하여 Pure DNA를 얻는다. 2. 미생물에서 Plasmid DNA를 분리하고 PCR을 이용하여 DNA를 증폭하고, 제한효소를 이용하여 DNA를 절단한 후 Mini gel을 이용하여 전기영동법에 의해 DNA를 분리하고 확인하여 본다. 3. Plasmid DNA를 이용하여 미생물 형질전환을 한 후 미생물 형질전환체를 선별하는 기술까지 분자생물학을 공부하는데 필수적인 실험 기술을 습득한다. Plasmid DNA 분리법 원핵세포에는 염색체 DNA 외에도 작은 DNA가 발견된다. 보통 플라스미드(Plasmid)라 불리는 이들 DNA는 염색체 DNA보다 상당히 작고(4kb～100kb) 스스로 복.. Biology/생화학 2019. 10. 21.

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  생화학실험 | PCR & DNA Gel Electrophoresis TIP 1. PCR을 이용하여 DNA를 증폭한 후 Agarose gel electrophoresis를 통해 DNA를 분리한다. 2. PCR의 원리를 이해하고 전기영동에 이용된 시약의 특성을 이해한다. PCR 유전자를 분석하고 연구하는데 있어서 가장 큰 문제점은 복잡한 전체 genome중에 연구 하고자 하는 유전자가 희귀하다는 것인데, PCR은 특정 DNA Sequence의 copy수를 기하 급수적으로 증폭시킬 수 있다는 점이다. 이러한 PCR을 소개하기에 앞서서 간단히 분자 생물학적인 사항을 review해 보면 먼저 DNA의 구성을 살펴보면, DNA는 다음과 같이 phosphate group(인산기) - sugar(당) - base(염기)의 세 가지 요소로 구성되는 nucleotide라는 모듈이 쌍으로 .. Biology/생화학 2019. 10. 18.