• 

  일반생물학실험 | 원핵세포 배양 및 관찰 실험 개요원핵세포란 원핵생물을 구성하고 있고 개체가 단 하나로만 이루어진 단세포이다. 원핵세포는 하나의 염색체만 가지고 있고 진핵세포와 다르게 유사분열을 하지 않으며, 진핵세포보다 요구하는 영양분이 까다롭지 않아 세포배양에 주로 쓰인다. 또한 원핵세포는 다른 세포와 달리 세포주기가 매우 짧아 번식과 증식이 빠르다. 세포배양에 쓰이는 대표적인 균인 대장균은 20분에 한 번씩 분열한다. 하지만 이것은 진핵세포를 완전히 배양하지 않는다는 것은 아니다. 진핵세포를 배양할 때에는 주로 세대수가 짧은 물고기나 생쥐를 이용한다. 세포배양은 생물학 연구 전체에서 가장 유용한 기술이다. 세포배양의 장점은 단일 배양세포를 대량으로 얻을 수 있고 그 중 돌연변이의 관찰도 비교적 용이한 것이다. 초기의 조직배양은 명확하지 않.. Biology/일반 | 세포 생물학 2024. 9. 30.

• 

  화학생물공정실험 | E. coli 와 Yeast의 Cell Culture 실험 요약 E. coli 와 Yeast Cell Culture의 생식과정을 살펴보고 Spectroscopy를 통해 이를 정량화하여 각 Cell Culture의 지수적 증식을 살펴보았다. 결과적으로 초기의 Lag Phase 를 제외하고는 대체적으로 지수적 증가를 따른다는 것을 확인할 수 있었으며 지수 증가적 모델을 통해 각 Cell Culture의 Specific Growth Rate 과 Doubling Time을 구할 수 있었다. 한편 계산된 E. coli 와 Yeast 의 Specific Growth Rate과 Doubling Time을 비교함을 통해 본 실험에 어느 정도의 오차가 있었다는 것을 알 수 있었고 이러한 결과를 토대로 실험의 오차를 예측해 보았다. 이외에도 생물학 실험에서 주로 사용되는 멸.. Engineering/화학생물공정 2023. 4. 20.

• 

  일반생물학실험 | Lycopene 배양 및 추출 발효와 부패의 차이 발효는 미생물의 작용에 의해 유기물이 분해되어 사람에게 유용한 물질이 생성되는 현상이다. 특정한 조건(온도, 시간, 무산소상태)에서만 발효가 일어나며, 발효균은 초산과 젖산, 알코올 등 좋은 효소를 분비하여 유해균을 무력화시킨다. 발효를 이용하여 만든 음식은 대표적으로 치즈, 요구르트, 막걸리, 와인, 맥주, 김치 등이 있다. 부패는 생물의 유해나 배설물 등 질소를 함유하는 유기물질이 혐기성 세균에 의해 불완전하게 분해되는 현상이다. 혐기성 세균에 의해 유기물질이 펩톤, 아미노산 등으로 분해되면서 아민, 황화수소가스, 암모니아가스, 메탄이 형성되어 악취가 풍기고 유해한 독성 물질이 발생한다. 실험 방법 1. lycopene 배양 1) 배양조건을 확인하고 배지를 만든다. Strain D.. Biology/일반 | 세포 생물학 2023. 3. 20.

• 

  미생물실험 | 균주 순수 분리 및 배양(Streaking, Spreading, Subculture) TIP 세균이 혼합된 시료로부터 단일 콜로니로 순수 분리하는 방법과 계대 배양하는 방법을 통해 single colony를 분리해 본다. 도말 자연 상태에서는 여러 종류의 생물종이 섞여 자라는데, 이러한 경우 한 종의 미생물을 연구하기 힘들다. 따라서 종의 특성을 연구할 때는 단일세포에서 자라난 세포 집단인 순수 배양체(pure culture)가 필요한데, 이를 얻는 방법이 도말이다. 도말에는 도말평판법과 획선평판법이 있는데, 도말평판법은 배지에 골고루 펴발라 도말하는 방법이고, 획선평판법은 한쪽 끝을 멸균하고 그곳의 접종원을 두 번째에서 멸균하는 과정을 반복하는 방법이다. 실험 방법 1. streak plate method 1) 미리 준비해 둔 LB plate의 온도가 실온이 될 때까지 실험대 위에 꺼낸.. Biology/미생물학 2022. 12. 31.

• 

  생명공학실험 | Plasmid DNA preparation TIP Ampicillin에 대하여 저항성을 지닌 E. coli (XLI-Blue, Amp-r) 의 plasmid DNA pBluescript SKⅡ(+)를 isolation 한다. Plasmid DNA를 정제하기 위해서 여러 가지 방법들이 사용되는데 공통적으로 다음의 세 과정- 미생물의 배양과 플라스미드 증폭 ; 미생물 수거와 cell lysis ; plasmid DNA 정제-을 거친다. DNA를 분리하기 위해서는 일단 DNA가 세포 밖으로 유출되도록 세포벽 및 세포막을 분해 시켜야 하고, 이때 DNA 가수분해 효소들의 활성을 억제하는 조건에서 DNA를 분리해야 하며 단백질이나 RNA가 같이 회수되지 않도록 해야 한다. 세포벽을 가지는 박테리아의 경우에는 먼저 lysozyme을 처리하여 세포벽을 분해 .. Biology/생명 과학 | 공학 2022. 9. 24.

• 

  화학공정실험 | 미생물 성장속도 실험 - Escherichia coli 의 성장속도 TIP 1. 미생물의 성장 속도에 대해 이해한다. 2. E.coli 의 배양에 관하여 알고, 배경이론에 따라 성장곡선을 그려본다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 배양액, 삼각플라스크 준비하여 배양액 (LB Broth)를 제조한다. ① Yeast(5g) + Tripton(10g) + NaCl(10g) + Water로 total 1L를 autoclave로 멸균하여 LB medium을 준비한다. 2) 오염에 민감하므로 멸균 준비를 한다. ① 깨끗한 250㎖ armed flask와 stopper를 준비하여 autoclave로 멸균 처리한다. ② 고온, 고압의 멸균기로 멸균한다. 3) 배양을 할 Clean Bench의 조작한다. ① UV turn off → Fan on → FL on ② Clean Bench에 .. Engineering/화학생물공정 2022. 6. 14.

• 

  미생물실험 | Colony Isolation TIP 손에서 나온 여러 균 중에서 한 종류의 균만을 분리하여 획선평판법으로 배양한다. 배양배지가 준비되어 모든 생명체가 없어지도록 멸균하면, 여기에 생명체를 접종하여 성장을 지원하는 생장조건 하에서 배양할 수가 있다. 실험실 상황에서 보통은 순수배양으로 액체 또는 고체 배지에 접종한다. 액체 배양 배지는 대개 1～2%의 한천(agar)으로 고형화된다. 고체 배지는 세포를 고정하여 집락(colonies)이라 불리는 육안으로 보이는 분리된 덩어리로 자라게 한다. 미생물 집락은 미생물 종류, 배양 조건, 영양 공급, 생리저인 변수에 따라서 모양과 크기가 다양하다. 어떤 세균은 전체 집락의 색깔을 나타내는 색소를 생성한다. 집락은 미생물학자가 배양의 구성과 순도를 추정하도록 해준다. 배양접시에 두 종류 이상의.. Biology/미생물학 2022. 2. 20.

• 

  일반생물학실험 | Colony Dilution 및 Spreading TIP 배지를 만들고 그 배지에 colony를 희석하여 colony의 개수를 직접 확인하고 계산하여 본다. 식품, 토양, 생체, 그 밖의 환경에서 미생물상(microflora)을 알아보면 미생물들은 단일종으로 존재하는 것은 거의 드물고 여러 가지 종류의 미생물군이 공존하고 있음을 알게 된다. 몇 가지 종류의 미생물이 서식하며 우점종(dominant) 등을 알아보는 생태학적인 연구를 위해서는 무엇보다 먼저 서식처로부터 단일종의 미생물을 분리하는 일과 배양하는 기술이 중요하다. 실험실 내에서 인공적으로 미생물을 증식하는 수단을 배양(culture)이라 하는데 두 종 이상의 세균이 동시에 배양될 때 혼합 배양(mixed culture)이라 하고, 혼재된 균군 중에서 원하는 균만 따로 분리하여 배양하는 것을 순.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 9. 25.

• 

  일반생물학실험 | 미생물 유전정보 분석 TIP 균을 장기간 보관할 수 있는 stock solution와 균을 배양학 위한 LB agar 배지를 직접 제작해본다. 이 과정에서 마이크로피펫을 포함한 다양한 실험 기구들의 사용방법을 익힌다. 또한 PCR과 겔 전기영동의 원리를 이해하고 이를 활용해 배양한 균의 염기서열을 직접 산출해낸다. 산출된 염기서열을 sequencing과정을 통해 미생물의 종을 확인해보며 Hydrolysis test, 그람염색법 그리고 Oxidase, catalase test을 이용해 실험으로 확인할 수 있는 균들의 특징을 확인해 보는 것까지가 이번 실험의 목표이다. 실험 방법 1. 배지 제작 및 미생물 배양 1) 플라스크에 증류수를 150㎖와 LB media 3.75g, Agar 2.25g를 넣는다.(단, LB media와 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 9. 1.

• 

  일반생물학실험 | 배지의 종류와 제조 배지의 종류와 제조 방법 미생물의 분리, 배양에는 미생물의 종류 및 사용 목적에 맞는 배지가 필요하다. 미생물은 종류에 따라 영양 요구성이 다르며, 배지에 따라 대상으로 하는 미생물의 생육에 필요한 영양소를 적당량 가지고 있어야 하며, pH와 물리성이 맞아야 하고 무균적 이어야 한다. 주요 성분 : 미생물 중에는 탄소원으로 탄산가스, 질소원으로 공기 중의 질소를 이용할 수 있는 것이 있으나, 일반적으로 탄소원은 당류, 유기산에서, 질소원으로는 무기, 유기 질소화합물을 요구함과 동시에 각종 무기염류를 필요로 한다. 그 외에 일부 미생물은 비타민이나 미량의 요소를 필요로 한다. ① 탄소원 : 대부분 glucose와 sucrose를 가장 많이 사용한다. 미생물의 종류, 목적에 따라 fructose, malto.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 4. 23.

• 

  일반생물학실험 | Observation of Microorganism using Grams Stain Method - 그람염색법을 이용한 미생물의 관찰 TIP 고체배지에서 배양한 미생물에 그람염색법을 이용하여 염색한 뒤 현미경으로 배양시 킨 미생물을 관찰해보자. 그램 염색법은 각종 검체 및 배양집단의 현미경적 검사에 이용되며 미생물에 의한 감염여부를 조기에 진단할 수 있게 해준다. 그램 양성균의 경우 세포벽이 두꺼운 peptidoglycan layer와 풍부한 teicoic acid로 이루어져 있어서 organic decolorizer(탈색제)로 탈색 시 쉽게 탈색되지 않으며 따라서 염색액 crystal violet이 계속 세균내에 남아있어서 보라색으로 염색된다. 그램 음성균은 peptidiglycan layer가 단일충으로 되어있으며 세포벽은 지방성분이 풍부한 lipopolysaccharide(LPS)로 이루어져 있어 탈색제에 의해 crystal vi.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 4. 2.

• 

  식품미생물학실험 | 세균의 접종과 배양 TIP 세균을 액체배지와 고체배지에 접종하고 배양해 봄으로써 배지의 종류를 익히고 실험기구 사용법을 습득한다. 실험 방법 1. 고체배지 → 액체배지 1) 백금이의 끝이 빨개질 때까지 가열하여 멸균한다. 2) 멸균한 백금이를 E. coli가 없는 고체배지의 사이드에서 온도를 확인한다. (치직 소리가 나지 않을 정도, 고체배지가 녹지 않을 정도) 3) E. coli가 있는 고체배지에서 백금이로 E. coli를 딴다. (백금이에 힘을 주지 않고 고체배지의 겉면에 살짝) 4) 백금이에 붙어 있는 E. coli를 액체배지에 넣어 살살 흔들어 털어낸다. 5) E. coli를 접종한 액체배지를 37°C의 incubator에 넣고 24시간 배양한다. 6) 배지를 확인한다. 2. 액체배지 → 고체배지 1) 시작 전 액체.. Engineering/식품 영양 | 공학 2021. 1. 31.

• 

  일반생물학실험 | 멸균법 관찰 멸균법 미생물을 배양하기위해 도말할때, 또는 채취할 때 필수적으로 거쳐야 하는 과정이 멸균이다. 이름을 보면 알 듯이 균을 멸한다, 즉 (물리적인 방법으로) 미생물을 사멸시키는 것을 의미한다. 멸균법에는 다음과 같은 종류가 있다. 건열 : 건조한 상태에서 높은 온도를 유지시켜 세균을 제거하는 방법. ① 화염멸균법 : 멸균시킬 물체를 직접 불꽃에 접촉시켜 표면의 미생물을 제거하는 방법. 가스버너, 알코올램프등을 사용하며 금속기구, 유리기구나 자기제품의 일부, 백금선(혹은 백금이)등을 멸균할때 사용된다. 가장 완벽하고 쉬운 멸균법이다. ② 건열멸균법 : 건열멸균기(dry oven)를 사용하여 160～180℃에서 1～2시간 동안 건열처리하며 미생물을 산화또는 탄화시켜 미생물 및 포자를 완전히 멸균하는 방법.유.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 12. 28.

• 

  미생물실험 | 순수 분리 및 배양 미생물에 대한 연구 시, 미생물의 생태적, 생화학적, 분자생물학적 등 다양한 생물학적 특징을 밝혀야 하며 이를 위해 목표하는 미생물을 순수 분리하고 배양할 필요가 있다. 다른 종류의 생명체가 섞여 있지 않은 단일 종의 미생물의 배양을 순수 배양이라 하며, 적절한 환경에서 다른 미생물의 노출 및 오염 없이 배양해야 한다. 미생물의 배양은 미생물의 먹이가 되는 배지(media)를 이용하며, 배지의 상태에 따라 액체 배지와 고체 배지로 나눈다. 본 실험에서는 Luria Bertani media (이하 LB 배지)를 이용하여 실험하였으며, LB배지는 균 배양액의 생장에 필요한 질소, 탄소, 비타민, 및 무기염류 등을 제공한다. 실험에서는 배지에 균 배양액을 streak plate method(획선 평판법)와 s.. Biology/미생물학 2020. 9. 23.

• 

  미생물실험 | 환경오염의 원인인 황화합물 제거를 위한 미생물(T.1082) 배양 최근 환경문제가 대두되고 있는 가운데 오염물질을 처리하는 기술개발에 대한 연구 필요성이 중대해 지고 있다. 악취는 특성상 저 농도에서도 불쾌감이 발생되는 특성을 가지고 있어 지역 주민들의 피해가 급증하고 있으며 세균번식으로 인한 대기오염 등의 환경오염 문제도 생겨나고 있다. 본 실험은 대기오염의 원인이 되고 있는 황화합물 악취가스를 제거하고자 분리한 황화합물 분해균주의 배양특성 하여 오염물질의 정화를 통해 환경 문제를 해결 하는 것에 목적을 두고 있다. 악취 제거와 오염세균 번식을 방지하기 위하여 사용할 수 있는 방법은 화학적, 물리적, 생물학적 3가지 방법이 있다. 환경오염의 원인이 되고 있는 황화합물 분해, 제거를 위해 물리적, 화학적, 생물학적 방법 중 미생물을 이용하여 오염원을 분해하는 생물학적 .. Biology/미생물학 2020. 9. 3.

• 

  미생물학실험 | 미생물 배양 및 관찰 배지(medium) 미생물을 배양하고 옮기거나 저장하는 데 사용되는 고체 또는 액체 물질 1. 사용목적에 의한 분류 ① 일반배지 : 대량증식용 배지 ② 선택배지(selective medium) : 특정 균종의 성장을 도모하고 다른 미생물의 성장을 억제함으로서 원하는 균종만 선택적으로 배양하기 위하여 사용하는 배지 ③ 분별배지(differential medium) : 배지에 특수한 생화학적 지시약을 넣어줌으로서 한 종의 미생물을 다른 종과 구별할 수 있게 하는 배지 2. 배지형태(상태)에 의한 분류 ① 고체(고형)배지(solid medium) : 액체배지에 한천(agar) 등의 고형화 물질이 일정량 포함된 것, 미생물의 분리 및 보존을 위해 사용됨(일반적으로 한천(agar)을 1.5～2.0% 정도 넣어서 .. Biology/미생물학 2020. 2. 11.

• 

  미생물학실험 | MRS Agar 배지의 제조 앞으로 미생물들을 연구하기 위해서는 배지에 미생물을 배양하는 것이 실험의 기초가 될 것이다. 그리고 그 베이스 위에 여러 미생물의 특성에 맞는 실험 방법 응응하여야 할 것이다. 미생물의 배양에 필요한 배지는 배양하고자 하는 미생물의 종류에 따라 그 특성에 가장 적합한 것들을 선택하여 사용해야 하는데, 이는 단순히 미생물만 배양하는 것뿐 아니라, 집락의 형태와 특성, 생화학적 특성, 당 분해 성질, 유전적 특성, 배지의 선택, 구성 성분, 제조방법에 따라 미생물의 성패가 결정되기 때문이다. 그래서 이번 실험을 통하여 기본적인 미생물 배양을 익히고 그 방법을 숙지 하고자한다. 본 실험은 MRS를 사용 만든 액상배지의 L. acidophilus을 고체배지를 직접 배양해 보고 배양 후 일정시간 후에 colony.. Biology/미생물학 2020. 1. 11.

• 

  미생물실험 | 자연계에 분포하는 미생물의 분리와 순수배양(one colony의 분리) - Screening and Streaking 실험 방법 1. 자연계에 분포하는 미생물의 분리(Screening) ① 실험에 이용할 소지품 등을 미리 준비해 놓은 다음, 여러방법을 이용하여 자연계에 분포하는 미생물을 채취한다. 빈플레이트에 증류수와 함께 담아 흔들어주는 방법과 면종을 이용해 닦는 방법과, 스포이드를 이용해 소지품을 들고 물로 흘러준다던지 배지에 직접 묻혀내는 방법 등이 있다. ② 배지가 담긴 플레이트에 살살 찍어(증류수를 이용하지 않아도 되는 경우) 배지에 미생물 이묻어날 수 있게 하거나, 증류수를 이용했을 경우 스포이드를 이용하여 배지가 담긴 플레이트에 2∼3방울 정도 떨어뜨려서 골고루 퍼지도록 하여 준비한다. 2. 순수배양 - one colony의 분리(Streaking) ① 먼저 백금이를 시너레이터에 넣어 살균한다. ② 살균된 .. Biology/미생물학 2019. 12. 27.