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  일반생물학실험 | Gene Cloning Gene cloning 생물체의 특정 유전자를 세포에서 추출한 후 그 유전자를 벡터 DNA에 삽입하고 Competent Cell에서 증식시킴으로써 균일한 유전자 집단을 생성하는 기술이다. DNA preparation, Insert DNA PCR, 제한효소 처리, Ligation, Transformation의 5가지 과정을 거쳐 진행된다. 먼저 원하는 유전자가 삽입될 플라스미드를 준비하기 위해 대장균을 배양한 후 Alkaline lysis를 이용해 균을 높은 pH에서 강한 음이온 세정제인 SDS로 처리하여 세포벽을 파쇄한다. 이때 염색체 DNA와 단백질, 깨진 세포벽 등은 SDS와 함께 침전되어 가라앉고 플라스미드 DNA는 용액 속에 유리되는데 이들을 원심분리하여 상층액으로부터 플라스미드 DNA를 분리 정.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 4.

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  일반생물학실험 | 흰점박이 꽃무지 유충의 혈장 관찰 - 동물세포관찰 TIP 흰점박이 꽃무지를 통해 동물의 혈장을 관찰하고, 관찰을 통해 동물세포의 특징에 대해 이해한다. 흰점박이 꽃무지 몸 길이는 17～22㎜이며 몸은 광택이 강한 녹갈색이나 구릿빛 또는 붉은빛을 띠는데 녹색, 남색, 흑남색, 흑자색 등의 변이도 있다. 후경절 안쪽의 털은 회갈색이며, 중흉돌기의 끝은 은행모양이고, 딱지날개의 끝은 뾰족하게 돌출하였다. 교미구는 가는 직선형이며, 내판은 좁고 긴데 끝에 둥글게 돌출한 부분이 있다. 한국, 일본, 러시아에 분포하며 성충은 한여름에 많이 활동한다. 참나무의 진액, 자두나무, 살구나무, 포도나무 등에 모이며 수박과 같은 과일에도 잘 모인다. 일반적으로 유충은 굼뱅이라고 불린다. 유충은 동의보감에도 기록되어있는 약재이다. 약재뿐만 아니라 식용으로도 사용되는데, 먹을.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 4.

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  일반생물학실험 | 단백질 분해 효소의 활성측정 TIP 연육작용의 원리를 알아보고, 이러한 작용을 하는 과일 속에 들어있는 단백질 분해 효소의 종류에 따른 효소활성도의 차이를 비교해 본다. 육류의 연화 (tenderization of meat) : 육류 중의 프로테아제의 작용에 의해 육질이 연해지는 것 육류의 표면에 있는 근형질막이 파괴되고 actomyosin을 가수 분해시켜 근원섬유로 나누어지게 함 연결조직의 섬유상 단백질에도 작용하여 collagen이나 elastin을 분해시킬 때 완전한 근육분해가 일어남 효소활성측정 : 효소의 측정, 즉 활성을 측정한다는 것은 효소의 유효량을 규명하는 것 효소반응은 일반적으로 반응시간이 경과함에 따라 반응속도가 경감하기 때문에 활성측정에는 초기속도를 사용 효소반응속도식인 Michaelis-Menten 식도 이러한.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 2.

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  일반생물학실험 | 효소의 활성 측정 TIP 1. pH의 변화에 따른 효소의 반응속도를 비교하고 최적의 pH를 알아낸다. 2. 온도변화에 따른 효소의 반응속도를 비교하고 최적의 온도를 알아낸다. 효소(enzyme) 일반적으로 화학반응에서 반응물질 외에 미량의 촉매는 반응속도를 증가시키는 역할을 한다. 생물체 내에서 일어나는 화학반응도 촉매에 의해 속도가 빨라진다. 특별히 생물체 내에서 이러한 촉매의 역할을 하는 것을 효소라고 부르며 단백질로 이루어져 있다. 단백질로 이루어져 있기 때문에 무기촉매와는 달리 온도나 pH(수소이온농도) 등 환경 요인에 의하여 기능이 크게 영향을 받는다. 즉, 모든 효소는 특정한 온도 범위 내에서 가장 활발하게 작용한다. 대개의 효소는 온도가 35∼45℃에서 활성이 가장 크다. 하지만 온도가 그 범위를 넘어서면, .. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 29.

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  일반생물학실험 | Bradford 법을 이용한 단백질 정량분석 - The quantitative analysis of proteins by Bradford method TIP 표준 단백질용액(standard protein solution)을 이용하여 단백질 농도 검량선을 작성하고 미지 시료의 단백질 농도를 측정한다. 단백질 분석 기존 켈달 정량분석 방법에서는 시료 중에 함유되어 있는 총 질소함량을 측정하여 단백질 함량을 계산할 수 있도록 되어 있어서 개략적인 분석만 가능케 되어 있는 단점이 있다. 이러한 단점을 보완하기 위하여 많은 학자들은 순 단백질의 총량을 정량할 수 있도록 하는 새로운 방법들을 개발하고 있다. 이들 중 현재까지 많이 이용되고 있는 몇 가지 방법에는 뷰렛방법, Lowry 방법, 탁도 측정법, 펩티드 측정법, 크로마토그래피, 비색법 및 분광광도법 등을 들 수 있다. 크로마토그래피는 두 개의 서로 다른 상을 이용하여 화합물을 분리한다. 즉, 정지상과 이.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 26.

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  일반생물학실험 | Kjeldahl 법을 이용한 단백질 정량 질소정량법으로는 여러 가지 방법이 있지만 1883년 Kjeldahl이 제안한 방법이 오늘날 널리 이용되고 있다. 이 방법의 원리는 다음과 같다. 즉 일정량의 시료에 진한 황산과 촉매를 가열하면 식품성분의 분해반응과 동시에 산화, 환원 반응이 발생하여 시료 중의 질소는 모두 암모니아로 되는데 이 암모니아는 반응액의 황산과 결합하여 황산암모늄의 형태로 분해액 중에 남는다. 이 황산암모늄은 식품의 다른 여러 가지 분해물과 같이 존재하기 때문에 황산암모늄을 구성하는 질소의 양을 정량하기가 어려우므로 이 질소만을 따로 분리하기 위하여 과잉의 알칼리를 가하고 가열하면 황산암모늄 중의 질소는 알칼리와 반응하여 암모니아 기체로 변하여 식품 중의 다른 분해물과 분리된다. 암모니아는 휘발성이 강하기 때문에 일정량의 산성 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 24.

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  일반생물학실험 | 항산화 효능 검증 및 Data 분석 - DPPH TIP Spectrophotometer의 원리와 사용법을 이해한 후 각 시료의 항산화 능력을 테스트하고 data를 비교 분석한다. 세포의 산화적 스트레스를 줄여주는 항산화제의 작용 기작 우리가 호흡을 하게 되면 산소가 몸속으로 유입되고 이상적으로는 우리에게 필요한 산소량만큼 호흡으로 들이마시면 좋겠지만 실제로 그렇게 정확히 맞추기는 힘들다. 특히 운동 후 가쁜 숨을 몰아쉬게 될 때도 산소를 과잉 공급할 가능성이 있다. 필요이상으로 많은 산소가 체내에 들어왔을 경우 잔여 산소 중 일부는 활성이 큰 자유기(free radical)인 활성산소가 된다. 이 반응성이 큰 자유기는 체내의 세포를 공격하게 되고 공격으로 인해 손상된 세포는 유전자의 복구 명령에 따라 복구를 시작하게 되고, 이 복구 과정에서 간혹 비정.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 23.

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  일반생물학실험 | 현미경 사용법 및 동물조직 관찰 TIP 1. 광학현미경의 각 부분의 명칭과 기능을 알아본다 2. 현미경 사용 시의 주의사항을 익히고, 작동원리를 이해한다. 3. 동물조직의 슬라이드 표본을 관찰하여 조직의 구조와 형태를 이해한다. 4. 관찰한 동물조직을 통해 배율, 해상도 등 현미경의 특성을 이해한다. 심장근과 골 조직 샘플을 재료로 생물체의 기본적인 단위인 세포의 구조를 알아보고, 또한 광학현미경의 사용법을 익히고 특성을 이해해보고자 한다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 광학 현미경의 광원을 켜고 광도조절기로 광을 중간 정도 까지만 올린다. 2) 회전판을 돌려 저배율에 맞춘다. (처음에는 저배율로 검경한다.) 3) 준비된 조직 슬라이드를 재물대 위 중앙에 고정시킨다. 4) 옆에서 보면서 조동나사를 돌려 대물대와 대물렌즈를 최대한 가까.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 21.

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  일반생물학실험 | 현미경 사용법 및 원생동물의 관찰 TIP 호숫물에 서식하는 원생동물의 형태와 운동성을 현미경을 통하여 관찰한다. Kingdom Protista(원생생물계) 원생동물은 대부분 단세포상태로 살아가는 진핵생명체로 다양한 기능을 수행하는 여러 세포기관을 갖고 있다. 이런 세포기관에는 세포의 이동 및 먹이의 포획에 관여하는 위족(pseudopodium), 섬모(cilium), 편모(flagellum)와 삼투압의 조절에 관여하는 수축포(contractile vacuole), 세포내 소화기관인 식포(food vacuole), 및 세포구(cytostome)등이 있다. 이들은 모두 타가 영양체(heterotroph)로 다른 미생물이나 고형영양물을 체내로 섭취하여 세포내소화를 하여 살아간다. 이들의 분류는 주로 이들의 운동방법, 즉 편모, 섬모, 또는 위.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 20.

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  일반생물학실험 | 단백질 정량 우리 몸을 구성하는 중요한 물질 중 하나인 단백질. 단백질은 효소로도 작용하기도 하고 우리 몸의 조직을 구성하기도 합니다. 다양한 용도에 쓰인 단백질이 세포나 샘플에 얼마나 포함되어 있는지 그 농도와 양을 구하기 위해서 단백질 정량이라는 실험을 합니다. 단백질 정량은 대부분의 생명과학 실험의 기본이며 대학원생들이 굉장히 많이 하는 실험이라고 알려져 있습니다. 이번 실험에서는 주어진 수용액에 녹아있는 단백질 양을 정량하는 데에 Bradford assay 방법을 사용하였으며 여러 농도의 용액을 사용하여서 흡광도와 농도간의 관계나 패턴이 있는지에 대해서 알아보았습니다. Bradford assay 방법에 사용하는 브래드포드 지시약은 평상시에는 녹갈색을 띄고 있다가 단백질과 결합하면 청색을 띄는 특징이 있고 색이.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 19.

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  일반생물학실험 | 흡광도를 이용한 BSA의 단백질 정량 및 미지 농도의 BSA 용액 농도 추정 TIP 본 보고서에서는 Beer-Lambert Law를 이용해 서로 다른 농도의 Bovine Serum Albumin(BSA) 용액을 만들어 흡광도계로 흡광도를 측정하고 선형 회귀곡선을 그려 미지 농도의 BSA용액의 농도 추정을 목표로 한다. 생명체에 있어서 모든 종류의 고분자 물질은 생명체에 필수적인 기능을 담당하지만 단백질처럼 광범위한 범위의 기능을 담당하는 물질은 좀처럼 찾아보기 힘들다. 생물학에서 단백질은 떼려야 뗄 수 없는 분야이다. 생물학의 중추를 이루는 효소, 면역체계, 항상성, 수용체 등등은 모두 단백질로 구성되어 있다. 이러한 단백질을 정량하는 방법으로 여러 가지 많은 방법들이 사용되고 있는데 그 중의 하나가 바로 Beer–Lambert Law를 이용한 방법이다. Beer-Lambert .. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 18.

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  일반생물학실험 | PTC(phenylthiocarbamide) 미각검사 TIP  PTC(phenylthiocarbamide) 용액을 농도차이에 따라 분류해 쓴맛의 정도를 비교하는 실험이다.   PTC 용액몹시 쓴맛이 있는 물질. plassma thramboplastin component의 약자이다. PTC용액은 미각이 얼마나 활성화 되있는가를 Test 할수있는 용액이지만, 과량 마시게 되면 사망할수 있는 독성을 갖고 있다.   PTC 미각 유전PTC에 대한 맛을 느낄 수 있는지의 여부는 유전에 의해 결정되는데, 이 유전은 한 쌍의 대립유전자에 의해 이루어진다. PTC의 쓴맛을 느끼는 능력은 우성형질(T)이며, 맛을 느 끼지 못하는 것은 열성혈질(t)로서, 표현형은 미각자와 미맹자로 분류되지만, 유전자형은 TT, Tt, tt로 구성된다. 대립유전자형이 T-(TT, Tt)인 사.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 15.

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  일반생물학실험 | 미생물 배양 및 세균검사 박테리아의 동정 TIP 1. 미생물 실험의 기초가 되는 멸균과 소독의 개념을 이해하고 배양배지를 만들어 식품위생검사를 위한 균의 접종 및 배양방법을 익히도록 한다. 2. 미생물을 그람 염색하여 염색된 세균의 표본을 관찰한 후 동정된 균의 형태적, 생리적 특성을 파악한다. 미생물 육안의 가시한계를 넘어선 0.1㎜ 이하의 크기인 미세한 생물로 주로 단일세포 또는 균사로써 몸을 이루며, 생물로서 최소 생활단위를 영위한다. 조류(algae), 균류(bacteria), 원생동물류(protozoa), 사상균류(mold), 효모류(yeast)와 한계적 생물이라고 할 수 있는 바이러스(virus) 등이 이에 속한다. 배지의 정의 및 분류 1. 배지 실험실에서 식물 및 동물세포, 미생물의 배양에 필요한 각종 영양분을 섞어 인위적으로 만.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 14.

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  일반생물학실험 | 배의 석세포 관찰 TIP 배의 과육내부에 다량으로 존재하는 석세포를 관찰하기 위해 배는 유달리 다른 과일들의 과육에 비해 까끌까끌한 특징을 가지고 있으며, 배를 먹다보면 가끔 딱딱하고 잘 씹히지 않는 부분이 있습니다. 그것의 정체가 바로 석세포이다. 식물의 세포는 세포벽의 형태에 따라 유세포, 후각세포, 후벽세포로 나눌 수 있습니다. 유세포와 후각세포는 1차세포벽만 있고 2차 세포벽이 없는점은 같으나, 유세포의 세포벽이 좀 더 얇고 연한 느낌이 있습니다. 그래서 유세포는 생리기능을 하며, 석세포를 제외한 과육세포가 유세포에 해당된다. 후벽세포는 두껍고 강한 2차 세포벽을 가지고 있는 세포이다. 바로 석세포가 후벽세포에 해당되어 배가 까끌까끌한 느낌이 나는 것이다. 1) 석세포 덩어리는 배의 과육속에 분포되어 있다. 2) .. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 13.

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  일반생물학실험 | PTC taste test TIP  PTC 미맹의 개념을 통해 유전 원리 이해, 사람의 유전 형질의 다양성 이해.   PTC에 대한 맛을 느낄 수 있는지의 여부는 유전에 의해 결정되는데, 이 유전은 한 쌍의 대립유전자에 의해 이루어진다. PTC의 쓴맛을 느끼는 능력은 우성형질(T)이며, 맛을 느끼지 못하는 것은 열성형질(t)로서, 표현형은 미각자와 미맹자로 분류되지만, 유전자형은 TT, Tt, tt로 구성된다. 대립유전자형이 T-(TT, Tt)인 사람은 미각자로서 PTC의 맛을 느낄 수 있고, tt인 사람은 PTC의 맛을 느낄 수 없는 미맹자이다. 이와 같이 PTC 미각유전은 PTC에 대한 미각을 결정하는 대립인자의 유전자형이 열성동형일 때 미맹이 되는 열성유전형식을 취하며, 일반적으로 미각자와 미맹자의 비율은 인류집단에 따라 일.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 12.

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  일반생물학실험 | 현미경 사용 및 프레파라트 관찰 (동물조직 및 세포) TIP 1. 광학현미경의 구조를 파악하고 사용법을 익힌다. 2. 배율 및 광도를 조절하는 방법을 익힌다. 3. 신경세포, 상피세포를 관찰하고 그 구조와 특징을 이해한다. 광학현미경 광학현미경 (light microscope, LM) : 빛을 이용하여 물체를 보는 현미경 물체의 형상을 보기 위해서 가시광선을 이용. 얇게 잘라 염색하여 관찰 1. 대물렌즈 : 피검체에 가까운 렌즈로서 4x, 10x, 40x, 100x 등이 있다. 2. 접안렌즈 : 대물렌즈에 의해 생긴 확대상을 확대하는 기능을 하며 5x, 8x, 10x, 25x 등이 있다. 3. 재물대 : 관찰 대상을 올려놓는 곳 4. 조동나사 : 재물대의 위치를 높이거나 낮추며 대강의 초점을 맞추는 장치 5. 미동나사 : 정확하고 미세한 초점을 맞추기 위한.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 10.

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  일반생물학실험 | 혈청 관찰 TIP 1. 혈액형 검사와 혈구관찰을 통한 실험결과로 혈청에 관한 정보를 확인할 수 있다. 2. 혈청은 혈장속에서 섬유소원이 분리된 것으로 이 분리된 혈청을 통해 다양한 검사가 가능하고 건강검진을 통해 가장 많이 접할 수 있는것이 혈청검사입니다. 이렇듯 일상생활에서도 많이 사용되는 혈청의 역할을 알아보는 것이 이 실험의 목적이다. 또한, 이 혈청관찰의 목표는 혈액의 응집반응을 통해 혈액형을 알아보고 혈구의 모양을 관찰하는 것이다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 채혈침을 새것으로 교체한후 손가락에서 혈액을 채취하여 슬라이드 글라스에 1～2방울씩 총 4번을 떨어뜨린후 채혈한 손가락을 알콤솜으로 소독한다. 2) 각 혈액에 A혈청 B혈청 D혈청을 떨어뜨린후 핀셋이나 클립으로 섞이는지 여부를 관찰한다 슬라이드 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 9.

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  일반생물학실험 | Macromolecules - Proteins Carbohydrates Lipids TIP 1. 세포를 이루고 있는 생체 거대분자의 존재를 생화학적인 실험 방법을 통해서 확인하고 이들의 양을 정량 하는 기술을 습득한다. 2. 표준 단백질용액(standard protein solution)을 이용하여 단백질 농도 검량선을 작성하고 미지 시료의 단백질 농도를 측정한다. 세포를 이루는 분자는 단순한 구조와 기능을 가지고 있는 유기분자들이 모여서 거대분자 (macromolecule)를 형성한다. 세포 내 거대분자는 크게 4 종류로 나눌 수 있다: 단백질 (proteins), 탄수화물 (carbohydrates), 지질 (lipids), 핵산 (nucleic acid). 단백질은 원형질과 효소의 구성요소이며, 탄수화물은 에너지원으로 중요한 역할을 한다. 지질은 모든 생체막 (biomembrane.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 8.