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  일반생물학실험 | 단백질 정량 분석 단백질 정량 단백질 정량이란 시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정이다. 단백질을 가수분해하면 peptide bond가 끊어지면서 아미노산이 유리된다. 보통 peptide나 단백질을 6N HCl 용액이 들어있는 시험관에서 공기를 제거하고 밀봉한 후 100°에서 8-24시간 동안 가열하여 가수분해 시킨다. 이러한 가열조건에서는 모든 peptide bond가 파괴되고 glutamine과 asparagine의 경우에는 side chain의 amide bond도 파괴되게 된다. 또한 tryptophan과 serine, threonine 등의 아미노산은 파괴되기 때문에 이러한 단백질을 정량하기 위해서는 특별히 주의를 기울여야 한다. 산성 용액에서 파괴되는 아미노산을 분석하기 위해서는 별도로 단백.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 9. 8.

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  일반생물학실험 | 푸른곰팡이 포자 수 계측하기 TIP 푸른 곰팡이의 포자 수를 직접적 방법으로 관찰하고 평균 전제 포자수를 계산하기 포자 수 계측의 필요성 1. 포자 수 계측: 포자의 수를 세는 과정 2. 여러 분야에서의 포자 수 계측의 이용 3. 생태학: 생태 내(담수, 토양, 대기 등)에서의 균류의 다양성 확인을 위해 4. 의학, 병리학: 병원성 균류의 확인 및 관련된 실험을 위해 5. 농업, 식물병리학: 식물 병원성 균류의 확인 및 접종 실험을 위해 실험 방법 1. 실험 과정 1) 스포이드로 푸른곰팡이 배지에 증류수를 잠길 정도로 넣는다. 2) 푸른곰팡이 배지를 섞은 후 스포이드를 이용하여 튜브에 푸른곰팡이 포자 현탁액(5㎖)을 넣고 증류수(10㎖)를 넣는다. 3) 블텍싱 기계를 이용하여 푸른 곰팡이 포자 현탁액을 골고루 섞어준다. 4) 푸른 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 8. 7.

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  일반생물학실험 | 단백질 분해 효소의 활성측정 TIP 연육작용의 원리를 알아보고, 이러한 작용을 하는 과일 속에 들어있는 단백질 분해 효소의 종류에 따른 효소활성도의 차이를 비교해 본다. 육류의 연화 (tenderization of meat) : 육류 중의 프로테아제의 작용에 의해 육질이 연해지는 것 육류의 표면에 있는 근형질막이 파괴되고 actomyosin을 가수 분해시켜 근원섬유로 나누어지게 함 연결조직의 섬유상 단백질에도 작용하여 collagen이나 elastin을 분해시킬 때 완전한 근육분해가 일어남 효소활성측정 : 효소의 측정, 즉 활성을 측정한다는 것은 효소의 유효량을 규명하는 것 효소반응은 일반적으로 반응시간이 경과함에 따라 반응속도가 경감하기 때문에 활성측정에는 초기속도를 사용 효소반응속도식인 Michaelis-Menten 식도 이러한.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 7. 2.

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  일반생물학실험 | Bradford 법을 이용한 단백질 정량분석 - The quantitative analysis of proteins by Bradford method TIP 표준 단백질용액(standard protein solution)을 이용하여 단백질 농도 검량선을 작성하고 미지 시료의 단백질 농도를 측정한다. 단백질 분석 기존 켈달 정량분석 방법에서는 시료 중에 함유되어 있는 총 질소함량을 측정하여 단백질 함량을 계산할 수 있도록 되어 있어서 개략적인 분석만 가능케 되어 있는 단점이 있다. 이러한 단점을 보완하기 위하여 많은 학자들은 순 단백질의 총량을 정량할 수 있도록 하는 새로운 방법들을 개발하고 있다. 이들 중 현재까지 많이 이용되고 있는 몇 가지 방법에는 뷰렛방법, Lowry 방법, 탁도 측정법, 펩티드 측정법, 크로마토그래피, 비색법 및 분광광도법 등을 들 수 있다. 크로마토그래피는 두 개의 서로 다른 상을 이용하여 화합물을 분리한다. 즉, 정지상과 이.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 26.

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  일반생물학개론 | 단백질 결정화 - Supersaturation TIP 1. 단백질 과포화 가. Absorbance 나. Trp, Tyr 다. Spectrophotometer 라. Supersaturation Supersaturation 과포화란 일반적인 상태에서 용액에 녹을 수 있는 용질보다 더 많은 용질이 녹아 있는 상태를 의미한다. Figur 4. 은 단백질의 과포화 곡선으로 침전제의 농도에 따른 단백질 농도 변화를 보여주며 nucleation과 metastable zone에 도달하는 4가지의 결정화 방법이 소개되어 있다. 과포화 용액은 특정 상태에서 결정화를 겪게 된다. 포화된 용액의 용해도를 온도, pH 압력 등을 변화 시켜 용해도를 감소시킬 경우 과포화 상태가 된다. 그러나 과포화 상태가 되지 않을 경우 용질의 침전이 일어난다. 그 이유는 과포화 상태는 에.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 26.

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  일반생물학실험 | 단백질 정량 우리 몸을 구성하는 중요한 물질 중 하나인 단백질. 단백질은 효소로도 작용하기도 하고 우리 몸의 조직을 구성하기도 합니다. 다양한 용도에 쓰인 단백질이 세포나 샘플에 얼마나 포함되어 있는지 그 농도와 양을 구하기 위해서 단백질 정량이라는 실험을 합니다. 단백질 정량은 대부분의 생명과학 실험의 기본이며 대학원생들이 굉장히 많이 하는 실험이라고 알려져 있습니다. 이번 실험에서는 주어진 수용액에 녹아있는 단백질 양을 정량하는 데에 Bradford assay 방법을 사용하였으며 여러 농도의 용액을 사용하여서 흡광도와 농도간의 관계나 패턴이 있는지에 대해서 알아보았습니다. Bradford assay 방법에 사용하는 브래드포드 지시약은 평상시에는 녹갈색을 띄고 있다가 단백질과 결합하면 청색을 띄는 특징이 있고 색이.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 19.

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  일반생물학실험 | 흡광도를 이용한 BSA의 단백질 정량 및 미지 농도의 BSA 용액 농도 추정 TIP 본 보고서에서는 Beer-Lambert Law를 이용해 서로 다른 농도의 Bovine Serum Albumin(BSA) 용액을 만들어 흡광도계로 흡광도를 측정하고 선형 회귀곡선을 그려 미지 농도의 BSA용액의 농도 추정을 목표로 한다. 생명체에 있어서 모든 종류의 고분자 물질은 생명체에 필수적인 기능을 담당하지만 단백질처럼 광범위한 범위의 기능을 담당하는 물질은 좀처럼 찾아보기 힘들다. 생물학에서 단백질은 떼려야 뗄 수 없는 분야이다. 생물학의 중추를 이루는 효소, 면역체계, 항상성, 수용체 등등은 모두 단백질로 구성되어 있다. 이러한 단백질을 정량하는 방법으로 여러 가지 많은 방법들이 사용되고 있는데 그 중의 하나가 바로 Beer–Lambert Law를 이용한 방법이다. Beer-Lambert .. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 6. 18.

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  일반화학실험 | 아스피린 분석 TIP 합성한 아스피린 내의 불순물인 salicylic acid의 함량을 흡광도를 이용하여 구하고, 이로부터 아스피린의 순도를 구한다. 분광법(Spectroscopy) 분자의 구조와 성질을 규명하기 위해 분자내의 에너 지와 빛 에너지 사이의 상호작용을 이용하는 방법. 분자는 외부로부터 분자에 빛 에너지를 쪼이면 회전, 진동, 전자에너지의 분자에너지에 해당하는 일정한 에너지의 파장만을 흡수하게 된다. 분자의 화학결합 상태나 구조적인 특성에 따라 흡수되는 정도가 달라져 서로 다른 흡수스펙트럼을 나타내게 된다. 이러한 성질을 이용하여 정성 및 정량분석을 할 수 있는 것이다. 실험 방법 1. 검정곡선 그리기 1) 노트북을 켜고, 노트북과 LabPro interface, Colorimeter를 연결한다. 2) 파.. Chemistry/일반화학 2021. 5. 4.

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  분자생물학실험 | 6X His tagged eGFP 단백질의 정제와 분석 실험 방법 1. 실험 과정 재조합 단백질(6X His tagged eGFP)의 발현과 정제를 위한 실험이다.먼저 GFP 발현하기 위해서 첫번째로 BL21 inoculation을 진행한다. 균을 다루는 실험(접종/배양)에서는 오염 방지를 위해 알코올 램프 위에서 진행한다. LB 5㎖을 시험관에 넣고, 여기에 Kanamycin 5㎕을 넣어준다. Loop를 살균하고 plate 뚜껑에서 식힌 후에 미리 spreading 해둔 BL21 plate(pET28a::egfp)에서 colony를 pick한다. BL21 inoculation completed라고 라벨링을 한 후에 37℃ shaking incubator에서 배양액에 공기의 공급이 잘 되게 튜브를 비스듬히 넣고 Overnight cultivation시킨다. .. Biology/분자생물학 2021. 3. 28.

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  분자생물학실험 | Scalp와 Skin에서의 미생물 DNA 추출 그리고 NGS를 통한 미생물 분석 성공적으로 DNA를 만드는 것은 더 이상의 농축이 필요 없는 아주 진한 농도의 DNA 용액을 얻는 것이다. 그렇지만, 때때로 희석용액이 얻어지기 때문에 DNA 농도를 증가시키는 방법을 고려하는것이 중요하다. 가장 널리 사용되는 농축 방법은 에탄올 침전법(Ethanol precipitation)이다. 염 존재하에서, -20나 그 이하의 온도에서 무수 에탄올은 고분자 핵산을 효과적으로 침전시킨다. DNA의 농축용액에서는 에탄올이 샘플의 위층에 놀이게 되어, 분자들이 두 층 사이에 침전된다. 에탄올이 묽은 DNA 용액과 섞여질 때는 침전이 원심분리에 의해 모아질 수 있으며 적당한 부피의 물에 재용해될 수 있다. 에탄올 침전법은 용액에 짧은 길이와 단량체 핵산 성분을 남게하는 잇점이 추가로 있다. 그러므로 ri.. Biology/분자생물학 2021. 3. 14.

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  분석화학실험 | 분광광도법에 의한 철의 정량 TIP 철(Ⅱ) 이온이 pH2～9 범위에서 1,10-페난트롤린 용액과 정량적으로 빨간색의 킬레이트 착물을 형성하는 것을 이용, 분광 광도계를 사용하여 흡수 최대값의 파장에서의 흡광도를 특정함으로써 철을 정량할 수 있다. 투광도와 흡광도의 측정 여러 가지 수동식 광도계와 분광 광도계는 T=0에서 100%까지 선형 눈금을 갖는 표시판이 설치되어 있다. 그러한 기기로 투광도를 읽으려면 두 가지의 예비조정, 즉 0% T 또는 암전류 조정과 100% T조정을 하여야 한다. 0% T조정은 기계적으로 셔터에 의해 검출기에서 광원을 차단한다. 여러 검출기는 복사선이 없어도 작은 암전류를 나타내므로 독해장치에 눈금이 나타나도록 알맞은 역신호(전위)를 걸어준다. 100% T조정은 셔터를 열고 용매를 빛의 통로에 놓고 조절.. Chemistry/분석화학 2020. 12. 31.

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  물리화학실험 | Absorption spectrum of a conjugated dye TIP 1. 대칭적인 conjugation 염료의 UV-Vis 흡수 스펙트럼을 분석하고 Free Electron Model을 이용해 해석한다. 2. Conjugated 된 Dye의 흡수 스펙트럼을 관찰하고 Partical in a box에서 얻어낸 식과 실제 실험에서 측정한 값을 비교해 본다 3. Conjugated dye의 가시광선 흡수 스펙트럽을 측정하고 측정한 스펙트럼을 “자유전자 모델”을 이용하여 분석한다 컨쥬게이션(Conjugation) 2개 이상의 다중결합이 단일결합을 하나씩 사이에 끼고 존재하며 이들 결합이 일정 정도 상호작용을 일으키는 현상으로서 이것은 불포화 결합 사이에 있는 단일 결합이 일정 정도 불포화 결합성을 보이기 때문에 일어난다. 이 상호작용은 공명에 기인한 것으로, 불포화 결합.. Chemistry/물리화학 2020. 12. 16.

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  물리화학실험 | 분광광도계를 이용한 약산의 평형상수 결정 TIP 1. 분광광도계 사용법과 그 원리를 이해한다. 2. 분광광도계 측정후 나온 데이터를 그래프로 그리고 흡광도 값을 찾아 약산의 평형상수를 구한다. 0.001M HCl 용액, 0.001M NaOH 용액을 만들고 티몰블루 용액을 0.001M HCl 용액, 0.001M NaOH 용액, Ph 9.0 완충용액에 넣는다. 그리고 큐벳 5개에 base라인을 측정할 증류수 2개와 아까 만든 용액 3개를 넣고 파장 400㎚～700㎚사이에서 분광광도계를 이용해 측정한다. 결과로 나온 흡수스펙트럼을 가지고 약산의 평형상수를 구할 수 있다. 실험 방법 1. 용액제조 1) 약 0.001M HCl 용액 제조 : 0.1M HCl 약 1㎖ 취하고 증류수 100㎖첨가 2) 약 0.001M NaOH 용액 제조 : 0.1M NaOH.. Chemistry/물리화학 2020. 12. 7.

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  일반생물학실험 | 식물색소의 분리 및 광학적 정성분석 TIP 시금치잎으로부터 chromatography를 해서 색소를 분리해내서 value를 구한다. 그리고 먼저 측정한 spectrum으로부터 661.6, 644.8, 470㎚에서의 흡광도를 찾고 농도를 계산하고 chromatography로 추출한 각 색소의 band가 무엇이었는지를 알아본다. 엽록체의 구조 내막이 변형된 얇은 막이 여러층 포개져 있는 라멜라구조를 이루며, 라멜라의 일부가 부 풀어 형성된 납작한 주머니 모양(원반상)의 틸라코이드(thylakoid)가 있다. 원반상의 틸라코이드가 층층이 쌓여 동전을 쌓아 놓은 것과 같은 그라나를 이루며, 그라 나 주위의 기질로 채워져 있는 공간을 스트로마라 한다. ① grana thylakoid : 틸라코이드가 서로 중첩된 라멜라(lamella), 광합성 색소.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 12. 1.

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  물리화학실험 | Iodination of Acetone TIP 화학반응에서 반응속도에 영향을 주는 요인들 중 농도변화에 따른 반응의 kinetics를 알아본다 반응속도에 영향을 미치는 요인 반응속도에 영향을 주는 요인은 고유의 반응속도, 농도, 온도, 촉매가 있다. 1. 고유의 반응속도 : 화학종마다 고유의 반응속도를 가진다. 2. 농도 : 반응 물질의 농도가 증가하면 충돌수가 증가하여 반응속도는 빨라진다. 3. 온도 : 온도가 증가하면 활성화에너지보다 큰 운동에너지를 가지는 분자수가 증가하며 분자의 충돌현상도 빈번해지게 된다. 4. 촉매 : 반응에 직접 참여하지 않으면서 반응물의 반응에 필요한 활성화에너지를 낮추거나(정촉매) 높임(부촉매)으로써 반응속도를 변화 시킨다. 반응속도론 (Reaction kinetics) 반응속도의 물질 농도에 대한 의존성을 연구.. Chemistry/물리화학 2020. 11. 29.

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  분석화학실험 | 광도계에 의한 철의 함량분석 TIP 분광 광도계를 이용해 철 표준용액으로부터 철 이온이 가장 흡수를 잘하는 파장을 찾고 흡광도를 측정하여 검정 곡선을 그려본다. 본 실험은 분광광도계를 이용해 철의 함량 분석하고 분광광도계의 원리를 이해하는 것이다. 표준용액을 제조 하고 분광광도계를 이용해 빛을 가장 잘 흡수하는 파장을 찾았다. 철 이온만 있는 용액에서는 파장이 나타나지 않았고 Phenanthroline 용액을 첨가한 용액에서는 510㎚ 의 파장에서 빛에서 흡광도가 가장 크게 나왔다. 510㎚ 파장에서 1,2,3,4,5ppm 의 표준용액으로 검정곡선을 그려 보았다. 검정곡선은 직선이 나왔고 흡광도는 Beer의 법칙처럼 시료의 농도에 비례한다는 것을 알 수 있었다. 분광 광도계 물질을 통과하는 빛의 투광도를 측정하는 기기이다. 빛이 시.. Chemistry/분석화학 2020. 11. 27.

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  분석화학실험 | UV/Vis spectrophotometer를 이용한 미지 물질의 정량분석 TIP 어떤 물질의 구성성분이 무엇인지와 정량적으로 얼마의 량이 함량 되어 있는가를 알기 위해서 여러 가지 기기 분석기를 이용한다. 그 여러 가지 기기 분석기 중에 UV/Vis Spectrophotomer는 물질의 농도를 분석하는데 간편할 뿐만 아니라 정확성 또한 우수하므로 오래 전부터 널리 이용되고 있다. 본 실험에서 이 UV/Vis Spectrophotomer를 통한 물질의 농도 분석을 통해 분광분석기의 원리와 시료처리 기법을 습득하고, 또한 물질의 화학구조와 빛의 흡수관계를 이해하여 정성분석법의 원리를 이해하고, 마지막으로 농도와 빛의 흡수량과의 상호작용을 통해 정량분석법을 이해하고자 한다. 1. 분광분석기의 원리 이해 2. 시료처리 기법 습득 3. 물질의 화학구조와 빛의 흡수관계 이해 (정성분석법.. Chemistry/분석화학 2020. 11. 12.

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  일반화학실험 | 지시약의 작용원리 TIP 산¯염기 지시약 용액의 pH를 변화시키면서 흡광도를 측정하여 지시약의 이온화 상수와 변색 범위를 알아낸다. 지시약 지시약은 적정을 하면서 중화점을 알기 위해, 혹은 수소이온의 농도를 알기 위해서 주로 사용된다. 지시약은 용액의 상황이 변함에 따라 눈에 띄는 변화가 나타나는 물질로, 이러한 변화가 색깔로 나타나는 지시약도 있고, 형광이나 발광 등으로 나타나는 것도 있다. 용액이 혼탁해지거나 침전물이 생성되는 경우도 있다. 이 중 가장 널리 사용되는 것은 색깔의 변화가 나타나는 지시약이다. 지시약의 종류는 매우 다양하며 변화가 나타나는 시점이 각각 다양하므로 중화점을 예측하여 그 근처에서 변화가 나타나는 지시약을 사용하면 실험을 효과적으로 할 수 있다. 가장 흔하게 쓰이는 지시약은 산염기지시약으로, .. Chemistry/일반화학 2020. 11. 10.