반응형 분자생물학개론 | Cell Banking TIP 1. 세포주 동결보존의 필요성 2. 동결에서 세포에 나타나는 현상 3. 동결보존제의 종류 및 역할 4. 동결보존 방법 5. 해동방법 6. 무혈청 배지를 이용한 장기 동결보존 세포주 동결보존의 필요성 1) 의약품 생산에 있어서 동물세포는 장기간 동안 세포주의 특성을 유지할 수 있어야 한다. 2) 동결보존에 의해 세포 배양 및 유지의 어려움 극복 가능 3) 세균이나 mycoplasma 의 오염을 방지 4) 세포주의 형질 전환 방지 5) 실험 및 생상의 재현성을 확립하는데 중요한 역할을 함. 동결에서 세포에 나타나는 현상 1) 온도 급속히 냉각 시, 세포막 외부가 먼저 동결되어 형성된 얼음 결정에 의해 세포막 파괴 및 각종 세포기관에 손상과 같은 세포내부의 물리적 손상이 나타남 2) 온도 천천히 냉각 .. Biology/분자생물학 2019. 12. 15. 분자생물학개론 | Reversed-Phase High-Performance Liquid Chromatography TIP 1. Reversed-Phase High-Performance Liquid Chromatography 2. 이동상 조성에 따른 분류 3. RP-HPLC Materials 4. RP-HPLC Methods 5. RP-HPLC elution profile illustrating the purification of a synthetic peptide. 6. The Ligands 7. C18 Column 8. Free Silanol 9. Column Packing Geometry 10. Column Dimensions 11. The Ionic Additive 12. Mobile phase 13. Gradient Time and Shape 14. LC컬럼의 특성 이동상 조성에 따른 분류 1. Isocrat.. Biology/분자생물학 2019. 12. 11. 분자생물학개론 | HPLC of peptides and proteins TIP 1. Basic Theory and Methodology 2. Liqiud Chromatogaphy의 종류 3. High Performance Liquid Chromatography 4. Retention and Bandwidth Relationships 5. Diagram of the retention parameters that describe a chromatographic separation 6. Capacity factor, k' 7. Equilibrium Distribution Coefficient 8. Selectivity Factors(Seperation factor, α) 9. Column Efficiency (N=Theoretical Plate Number) 10. Resolut.. Biology/분자생물학 2019. 12. 8. 분자생물학개론 | Studying gene expression and Function TIP 1. Studying the transcript of a cloned gene 2. Studying the regulation of gene expression 3. Identifying and studying the translation product of cloned gene 모든 유전자들은 기능하기 위해 발현되어야만 한다. 발현의 첫번째 단계는 상보적인 RNA가닥으로 유전자가 전사되는 것이다. 일부 유전자 - 예를 들어 tRNA 그리고 rRNA분자들을 암호화하고 있는 유전자 - 에서는 전사체 자체가 기능적으로 중요한 분자이다. 다른 유전자들의 경우에, 전사체는 단백질 분자로 번역된다. 유전자가 어떻게 발현되는지를 이해하기 위해서는 RNA 전사체를 연구해야만 한다. 특히 분자생물학자는 그 전사.. Biology/분자생물학 2019. 12. 3. 분자생물학개론 | The Structure and Function of Biological Membrane - 생체막의 구조와 기능 TIP 1. 생체막(生體膜, Biological Membrane) 2. 생체막의 구조와 합성 3. 생체막의 특징(막 단백질) 4. 생체막의 구성성분 5. 생체막의 기능 6. 막의 정지전위와 활동전위 7. 생체 카오스의 구조 8. 생물분자막을 이용한 생물전자소자의 개발 동향 9. 생체막 측정을 위한 아질산 미소감지기(Nitrite microsensor) 개발 10. 인공 세포막 제작 11. 생체막의 연구방향 1. 생체막(生體膜, Biological Membrane) 세포나 세포 내의 미토콘드리아·소포체·골지체·핵·리소좀 등을 구성하는 막으로, 대부분 단백질과 지질로 이루어진다. 외계와의 경계로서 핵산, 단백질, 기타의 생체물질이 외부로 흩어지는 것을 방지하고 독립된 환경을 형성하여 생명활동을 영위하도록 한.. Biology/분자생물학 2019. 11. 29. 분자생물학개론 | Studying Gene Location and Structure TIP 1. How to study the location of a cloned gene 2. DNA sequencing - working out the structure of a gene 3. Using cloned genes to study genome structure Cloning 실험은 원하는 유전자를 지닌 재조합 DNA분자의 복사본들을 가지고 있는 colony나 plaque를 제공한다. 많은 경우에 있어서, 연구계획에서 다음 단계는 그 재조합 DNA분자를 정제하여, 조작된 유전자에 대해 가능한 많은 정보를 얻는 것이다. 예를 들면 Plasmid와 같은 작은 DNA molecule 또는 chromosome과 같이 큰 DNA molecule에서의 유전자 위치를 알아내는 여러 방법이 있다. 이를 위.. Biology/분자생물학 2019. 11. 25. 분자생물학개론 | The Polymerase Chain Reaction(PCR) TIP 1. The polymerase chain reaction in outline 2. PCR in more detail 3. Applications of PCR DNA의 원하는 부분을 복제·증폭시키는 분자생물학적인 기술이다. 이 기술은 사람의 게놈과 같은 매우 복잡하며 양이 지극히 미량인 DNA 용액에서 연구자가 원하는 특정 DNA 단편만을 선택적으로 증폭시킬 수 있다. 또한 증폭에 필요한 시간이 2시간 정도로 짧으며, 실험 과정이 단순하고, 전자동 기계로 증폭할 수 있기 때문에, PCR과 여기서 파생한 여러가지 기술은 분자생물학, 의료, 범죄 수사, 생물의 분류 등 DNA를 취급하는 작업 전반에서 지극히 중요한 역할을 담당하고 있다. 1970년대에 gene cloning기술의 개발은 이전에 불가능.. Biology/분자생물학 2019. 11. 21. 분자생물학개론 | How to Obtain a Clone of a Specific Gene TIP 1. The Problem of Selection 2. Direct Selection 3. Identification of a Clone from a Gene Library 4. Methods for clone identification 1. The Problem of Selection 가장 간단한 생물체인 E. coli 조차도 수천개의 유전자를 가지고 있으며, 따라서 전체 세포의 DNA가 제한 효소로 처리되면 원하는 유전자를 가진 단편뿐만 아니라 다른 유전자를 가진 또 다른 많은 단편들이 생기게 될 것이다. Ligation 반응동안 개개의 단편을 선별할 수 없으며 서로 다른 DNA조각을 가진 수많은 재조합 DNA분자들이 생성될 것이다. 그 결과 형질전환과 plating한 후에 다양한 재조합 cl.. Biology/분자생물학 2019. 11. 16. 분자생물학개론 | Cloning Vectors for Organisms Other than E. coli TIP 1. Vectors for Yeast and Other Fungi 2. Cloning Vectors for Higher Plants 3. Cloning Vectors for Animal Cells 대부분의 cloning 실험은 숙주로서 E. coli 와 함께 수행되며, 매우 다양한 cloning vector 들이 이 생물체에 대해 유용하다. Cloning 실험의 목적이 유전자 구조와 기능 같은 분자생물학적인 기본적 특징을 연구할 때 특히 그렇다. 그러나 어떤 경우에는 gene cloning 실험을 위해 다른 숙주를 이용하는 것이 바람직할 수도 있다. 이것은 그 목적이 유전자 연구가 아니라 중요한 대사산물(ex, hormone)의 합성을 조절하거나 향상시키고, 또는 생물체의 특징을 변화시키는(ex,.. Biology/분자생물학 2019. 11. 12. 분자생물학개론 | Cloning vector for E. coli TIP 1. Cloning vectors based on E. coli plasmids 2. Cloning Vectors Based on M13 Bacteriophage 3. Cloning Vectors Based on λ Bacteriophage 4. λ and other high capacity vectors enable genomic libraries to be constructed 5. Vectors for other bacteria 1. Cloning vectors based on E. coli plasmids Gene cloning에서 가장 널리 사용되는 가장 단순한 cloning vector들은 작은 bacterial plasmid에 기초하고 있다. 매우 많은 plasmid vector들이 .. Biology/분자생물학 2019. 11. 4. 분자생물학개론 | Introduction of DNA into Living Cells - 생세포에서의 DNA 도입 TIP 1. 형질전환(Transformation) - 세균 세포에 의한 DNA uptake 2. 재조합체의 동정 3. Introduction of phage DNA into bacterial cells 4. Identification of recombinant phages 5. Transformation of non-bacterial cells 재조합 DNA 제조 후 다음 단계는 생세포(보통 세균)안으로 재조합 DNA를 도입시키는 것이며 그 세포는 클론을 생산하기 위해 성장, 분열하게 된다. 엄밀히 말해서, 클로닝이란 재조합 DNA제조 자체를 일컫는 것이 아니라 그 이후 과정만을 말한다. 형질전환(Transformation) - 세균 세포에 의한 DNA uptake 대부분의 세균 종들은 그들이 성장하는 .. Biology/분자생물학 2019. 10. 28. 분자생물학개론 | Manipulation of Purified DNA - 정제된 DNA의 조작 TIP 1. DNA를 조작하기 위해 사용되는 효소들의 종류 2. DNA 절단용 효소 : 제한 효소(Restriction endonucleases) 3. Ligation - DNA 분자들을 서로 연결시키기 1. DNA를 조작하기 위해 사용되는 효소들의 종류 이들 효소는 이들이 촉매하는 반응의 유형에 따라 5가지로 나눌 수 있다. (1) 핵산 분해 효소(Nucleases) : 포스포디에스테르 결합을 끊음으로써 DNA 분자들을 분해시킴 1) Exonuclease(엑소뉴클레아제 또는 외부 핵산 분해 효소) : DNA 말단부터 한번에 하나씩의 뉴클레오티드를 제거시키는 효소로서, 이중가닥을 공격할 때 분해시키는 가닥의 수로 세분한다. ① BAL31(from the bacterium Alteromonas espeji.. Biology/분자생물학 2019. 10. 21. 분자생물학개론 | Purification of DNA from Living Cells - 생세포로부터의 DNA 분리, 정제 TIP 1. Total cell DNA의 분리 2. 플라스미드 DNA의 분리 3. 박테리아파지 DNA의 분리 유전 공학을 위한 DNA분리는 3가지 유형으로 구분할 수 있다. 제 1 Type : 세포 전체 DNA(total cell DNA)이며 클로닝될 유전자를 얻기 위해 필요 제 2 Type : 순수한 플라스미드 DNA이며 분리방법은 기본적으로 total cell DNA분리와 같지만 어느 단계에서는 염색체 DNA와 분리되어야 한다. 제 3 Type : 파지 DNA이며 파지 클로닝 벡터로 이용될 때 필요. 파지 DNA는 감염세포로부터 보다는 파지 자체에서 분리되는 것이 일반적이기 때문에 세균 DNA에 의해 오염되는 문제는 없다. 그러나 파지 캡시드(단백질)를 제거하기 위해선 특수한 방법이 필요하다. 예외적.. Biology/분자생물학 2019. 10. 18. 분자생물학개론 | Vectors for Gene Cloning - Plasmids and Bacteriophages TIP 1. 플라스미드(Plasmids) 2. 박테리오파지(Bacteriophages) 벡터는 숙주세포 안에서 복제할 수 있어야만 하고 10 kb 이하로 비교적 작아야 할 필요가 있다(너무 큰 경우, 조작 중 파괴될 가능성이 높아짐). 이러한 기준을 만족시키는 두 종류의 DNA분자는 세균 세포에서 발견된다.(플라스미드 및 박테리오파지 염색체) 벡터로서의 특징 ① 숙주 세포 내에서 복제할 수 있다. ② 또한 비교적 작을 필요가 있으며 10kb 이하가 이상적이다. 플라스미드(Plasmids) (1) 플라스미드의 기본적인 특징 플라스미드는 세균 세포내에 독립적으로 존재하는 원형의 DNA분자이다. 플라스미드는 거의 항상 하나 이상의 유전자를 가지고 있으며 이들 유전자는 종종 숙주세균에 의해 나타나는 유용한 특징.. Biology/분자생물학 2019. 10. 14. 분자생물학개론 | 유전자 클로닝이 중요한 이유(Why Gene Cloning and DNA Analysis are Important) TIP 1. 초창기 유전학의 발달(The early development of genetics) 2. 유전자 클로닝의 출현 3. 유전자 클로닝이란 무엇인가 ?(What is gene cloning?) 4. 유전자 클로닝을 위해선 특수한 도구 및 기술들이 필요하다. 5. 왜 유전자 클로닝이 이토록 중요한가 ? 6. 왜 PCR(Polymerase chain reaction)이 또한 중요한가 ? 19세기에 Gregor Mendel 이 생물학적 특징들의 유전을 설명하기 위해 법칙들을 공식화시킨 이래 이 법칙들의 기본적인 가정은 한 생물체의 유전 가능한 각각의 특징이 gene(유전자)이라 불리우는 인자에 의해 제어된 것이며 gene은 세포 내 어딘가에 존재하는 물리적인 입자라고 생각되었다. 1900년 Mendel.. Biology/분자생물학 2019. 10. 11. 분자생물학개론 | 미생물 배양을 위한 배지(Culture Medium) TIP 1. 미생물 분야와 배지개발의 역사 2. 배지(culture midium) 3. 미생물 성장 조건 4. 배지성분과 배양환경 5. 미생물 배지 제조법 1900년대 초기에 식물의 일부분을 떼어내어 배양하려는 시도로부터 조직배양이 시작되어 1930년대 초기내에서 뿌리를 유기시켰고 1930년대 후기에 당근과 같은 저장조직의 일부분을 배양하여 callus를 유기시켰다(Fowler와 Rayns, 1993). George와 Sherrington(1984)에 의하면 ꡒ1957년 Skoog와 Miller가 배지내 auxin과 cytokinin의 상호작용이 조직이나 기관 배양시 기관형성 및 분화에 영향을 주는 것을 발견ꡓ한 이후 여러 학자들이 배지 및 형태형성 등 식물세포의 전형성능에 관해 집중적으로 연구한 결과 .. Biology/분자생물학 2019. 10. 7. 분자생물학개론 | Protein Purifying TIP 1. The Preparative Ultracentrifuge 2. Organelles and Macromolecules Can Be Separated Separated by Ultracentrifugation 3. Cell fractionation by centrifugation 4. Velocity Sedimentation 5. Equilibrium Sedimentation 6. The Separation of molecules by Column Chromatography 7. Ion-Exchange Chromatography 8. Ion-Exchange Matrix 9. Protein purification by Ion-Exchange Chromatography 10. Gel-filtrati.. Biology/분자생물학 2019. 10. 4. 이전 1 2 3 다음 반응형