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  생화학실험 | 완충용액 만들기 및 pH 측정 TIP 1. 여러 가지 지시약의 변색 범위를 이용하여 실험을 통해 얻은 완충용액의 pH를 측정할 수 있다. pH 미터기를 이용하여 pH 변화를 관찰하고 농도 변화와 pH관계를 적정곡선으로 나타낼 수 있다. 2. 또한 pH의 이론값과 실제 실험 값을 비교해 보고 그래프로 나타낸다. 3. 지시약을 통해 pH를 측정해본다. 수소이온농도 pH란 용액 1L 속에 존재하는 수소 이온의 몰수를 의미하며 물질의 산성, 알칼리성의 정도를 나타내는 수치로, 수소 이온 활동도의 척도이다. 체내 반응은 수소이온농도, 즉 pH에 따라 그 반응이 진행되기도 하고 비활성화 되기도 하며, pH가 맞지 않는다면 생명체는 치명적인 위험에 처하기도 한다. 이를 이해하기 위해 두 가지 종류의 완충용액을 제조하고 각종 방법을 이용한 pH측정.. Biology/생화학 2020. 6. 11.

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  생화학실험 | 단백질 정량 분석 - BCA법 & SDS-PAGE 분석 & Western Blot TIP BCA Method를 이용하여 우유 중의 단백질 함량을 분석하고 SDS-PAGE와 Coomassie Blue 염색을 통해 단백질의 전기영동 결과를 관찰한 것을 바탕으로 Western Blot을 시행하여 membrane에 transfer시켜, 항원-항체 반응을 이용하여 특정한 단백질의 정량 분석과 검출하는 방법을 실험을 통해 숙지한다. 실험 방법 1. 단백질 정량분석-BCA법 1) Sample & stardard 제조 ➀ 우유 속에는 약 5%의 단백질이 들어 있고, 1㎖속의 우유에는 약 50㎎이 들어 있는데, BCA법의 정략정 단백질 양 범위는 20～2000μg/㎖이므로 이를 1/100으로 희석하여 Epp. tube에 담았다. ➁ Albumin Standard Ampules의 농도는 2.0㎎/㎖이기.. Biology/생화학 2020. 6. 7.

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  일반생물학실험 | 신체 미생물 및 공중 낙하균 관찰 TIP 실제 우리 주변에서 생활하면서 접하게 되는 것들에게서 미생물을 배양함으로써, 주변에서 볼 수 있는 균의 종류를 알고, 우리 주변에 출현하는 미생물의 종류와 위생 상태를 점검할 수 있다. 실험 방법 1. 배지 만들기 1) DW 600㎖ + LB 15g(N:T:Y=2:2:1) + agar 9g을 준비한다. 2) 삼각플라스크에 넣고 magnetic stirrer넣고 hot plate에서 녹인다. 3) 잘 녹인후 auto clave 돌린다. 4) 은근한 열이 있을 때까지 식힌다. (굳지않게 유의) 5) petri-dish에 적당한 양을 부어주고 식혀 굳힌다. 6) 랩(or 파라필름테이프)에 싸서 4℃에 거꾸로 보관한다. 2. 신체 미생물 및 공중 낙하균 관찰 1) 냉장고에서 꺼낸 LB plate의 온도가.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 6. 7.

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  일반생물학실험 | 촉매와 효소반응 TIP 1. 화학 반응을 촉진시키는 촉매와 효소의 기능적인 공통점을 이해하고 전분 가수분해 효소인 아밀라아제(amylase)를 이용하여, pH, 효소농도 및 기질농도에 따른 효소활성의 변화를 알아 본다. 2. 효소 반응을 이해하고 전분 가수분해 효소인 α-amylase의 활성이 pH 조건에 따라 어떤 영향을 받는지 조사하고, 최적 조건을 알아본다. 효소 효소는 생물학적인 촉매로 화학 반응을 촉진시키는 물질이다. 촉매란 자신은 변하지 않으면서도 화학반응 속도를 빠르게 또는 느리게 하는 작용을 하는 물질로서 효소와 기질(반응 물질)의 복합체를 형성함으로써 기질 분자의 구조를 변화시킬 수 있는 활성화 에너지를 갖는다. 화학반응과 활성화 에너지 화학반응의 속도는 반응물이 어느 정도의 에너지를 받아 활성화되는 활.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 6. 3.

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  생화학실험 | Absorption Spectra TIP 분광광도계를 이용한 흡수 스펙트럼을 관찰해 본다. 분광광도계 분광광도계는 크게 광원, 단색화 장치, 검출기로 구성되어 있다. 광원에는 텅스텐 램프(320-2500㎚영역의 복사선), 중수소 아크 램프(200-400㎚영역의 자외선), 글로바(4000-200 의 적외선 복사선), 헬륨-네온 레이저(638㎚), 레이저 다이오드(680-1550㎚의 근적외선) 등이 있다. 단색화 장치는 빛을 각성분 파장으로 분산시키고 좁은 띠의 파장을 선택하여 시료 또는 검출기로 보낸다. 검출기는 광자가 검출기에 도달할 때의 전기 신호가 발생하는 원리를 이용하여 전류의 세기와 복사세기가 비례한다는 사실을 이용하여 흡광도를 측정한다. wavelenght range[㎚] color(absorbed) color observed .. Biology/생화학 2020. 6. 1.

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  일반생물학실험 | 단백질의 검출 TIP 생명현상과 생물체를 이루는 중요한 구성요소 중 단백질을 발색반응을 이용하여 화학적으로 검출하여 보는 실험이다. 확인 반응 1. 뷰렛반응 뷰렛 반응은 5%의 수산화 나트륨용액(또는 수산화 칼륨)과 1%의 황산구리 수용액을 섞어서 만든 뷰렛 용액(푸른색)을 이용하여 단백질을 검출하는 반응이다. 구리이온이 펩티드와 결합할때 색이 변합니다. (감도는 1-10mg 정도) 즉, 뷰렛 용액에 단백질을 넣으면 단백질의 작용기인 펩티드사슬이 구리와 나트륨과 결합하여 형성되는 비스뷰타렛구리(II)산 나트륨(수산화 칼륨의 경우 비스뷰타렛구리(II)산 칼륨)을 생성하면서 색이 보라색으로 변한다. 2. 로우리법(Lowry) 1951년에 이반응을 발견한 사람 이름을 사용하였다. 금속성 이온이 고리형구조의 잔기를 가진 아미.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 5. 30.

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  생화학실험 | Western Blotting - SDS-Page TIP 1. 단백질을 크기별로 분리하는 기술로 항원-항체 반응을 이용하여 전체 단백질에서 특정 단백질만을 Detection 할 수 있다. 2. 본 Western Blotting은 뉴런으로 분화하기 전인 Neuroblastoma(Ne,신경모세포)를 사용해 신경모세포가 암이 되게 유발하는 단백질을 찾을 수 있다. Gel electrophoresis에 대한 세부적인 이론이 복잡하고 현재로서는 불완전할지라도, 그 기본적인 개념은 쉽게 이해될 수 있다. 간단히 말해서 전기영동 분석은 전하를 띤 입자들이 외부에서 공급된 전기장의 영향을 받아서 반대 부호를 가진 전극 쪽으로 이동하는 데서 기인한다. 입자들의 움직임은 주위의 molecular sieve로서 역할을 하는 gel matrix와의 상호작용에 의해 지연된다... Biology/생화학 2020. 5. 28.

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  생태학실험 | 방형구법과 사각분법 현대 생태학에서는 생물군집을 밀도, 피도, 빈도, 생물량 등을 정량적으로 조사함으로써 그 특성을 파악하고 생물군집 사이를 비교한다. 이러한 자료조사를 통해서 생물군집을 비교할 수 있고 정량적으로 분석할 수 있는 것이다. 방형구법은 군집 내에서 사용하기 쉬우며 또한 충분히 개방적인 산림 군집에 대해서 적절하다. 사분각법은 각각이 넓은 간격으로 있거나, 또는 곧은 횡단선을 배열하기 어려울만큼 크고 밀집되어 있을 때에 적절하게 사용할 수 있다. 이 방법들은 2차원 서식지의 공간을 차지하는 식물 또는 동물의 군집에 적용할 수 있다. 방형구법 적어도 방형구법의 계획은 규정되어야 하고, 양적 자료를 포함한 유형도 결정되어야한다. 식물 군락이나 정착 동물 표본에는 종, 개체의 수, 그들의 피도 공간과 그것들에서 일어.. Biology/그외 생물학 2020. 5. 28.

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  일반생물학실험 | DNA work TIP 세균의 세포벽을 파괴하고 plasmid DNA를 분리한다. 분리한 plasmid DNA를 형질전환을 시키고 배지에서 키운다. 배지에서 키운후 제한효소를 이용해 잘라낸뒤 전기영동을 시켜서 관찰한다. 미생물학 실험을 수행하는 데 있어서 가장 기본이 되는 재료가 DNA이므로 많은 양의 DNA를 확보하는 것이 무엇보다 중요하다. 이를 수행하기 위해 외부 DNA를 숙주 세포 내로 도입시키는 방법인 형질전환(Transformation)을 이용하는데 이 방법은 박테리아 세포에 물리적 내지는 화학적 자극을 주어 Plasmid DNA를 받아들일 수 있는 상태로 만들어, DNA가 세포 내로 들어가게 한 다음, 이들 형질전환 된 세포들을 배양함으로써 이루어진다. 이처럼 DNA를 다량으로 얻는 것 이외에도 Librar.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 5. 27.

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  생화학실험 | Western Blot TIP 항원에 대한 항체의 특이적 결합을 이용하여 단백질 혼합물로부터 어떤 특정 단백질을 분석하는 western blot의 원리를 이해하고, 단백질의 SDS-PAGE분리, 단백질의 gel로부터 membrane으로의 transfer, 항체반응 및 항체에 부착된 효소의 반응에 의한 발색반응 등의 실험기법을 습득한다. Immunoblot(western blot)의 원리 immuno blot이라고도 부르는 western blot은 antigen과 antibody사이의 특이적인 결합을 이용하여 시료 속에 위치한 단백질을 정성적/정량적으로 분석하는 방법이다. 단백질이 transfer되어있는 membrane에 원하는 단백질의 antibody를 넣어주면 항원 항체반응을 일으켜 antibody가 원하는 단백질 band에.. Biology/생화학 2020. 5. 26.

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  식물생태학실험 | Ordination TIP CANOCO 프로그램을 이용해 생태학적인 서열화 분석법에 대해 간략히 이해해본다. 군생태학(community ecology)에서는 종(species), 장소(sites) 그리고 환경변수(environmental variables) 사이의 관계를 규명함으로써, 어느 한 종이 어떤 환경과 어떤 장소에 적합한지 살펴보고, 환경인자의 동적 변화에 따라 종의 분포가 어떻게 변화하는지 예측하는데 높은 연구관심을 두고 있다. 이러한 목적을 위해 군생태학에서는 서열화방법(ordination method)을 사용하는데, 서열화방법은 환경변수의 유무에 따라 서열분석(ordination analysis) 및 정준서열분석(canonical ordination analysis)으로 구분된다. 서열분석은 종별 분포를 대표.. Biology/그외 생물학 2020. 5. 24.

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  일반생물학실험 | 개미의 섭식행동 관찰 TIP 1. 개미는 대표적인 사회적 동물로 군락을 이루어 생활한다. 각각의 개미는 자신의 역할을 수행하며 이 모든 개미의 행동은 자기 자신의 DNA보존이라는 생물의 본능적 원칙을 만족시킨다고 한다. 2. 본 실험에서 일본왕개미와 곰개미에 대해서 먹이를 찾고 운반하는 행동을 관찰하였으며, 이 관찰을 통해 개미의 먹이를 찾는 방식, 제공된 먹이에 대한 반응의 차이를 알아보았다. 나아가서 개미의 의사소통방식과 사회성에 대해서도 고찰해보았다. 개미 동식물 > 동물 > 절지동물 > 곤충류 > 벌목. 벌목[膜翅目] 개미과 곤충의 총칭. 현존하는 곤충 과들 중 약9500여종이 서식하는 것으로 알려진 개미는 군집(Colony)이라고 불리는 고도의 조직사회를 구성한다. 특히, 개미군집은 구성원들 상호간에 먹이, 휴식, .. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 5. 24.

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  생화학실험 | Plasmid DNA Purification Plasmid는 bacteria 세포의 염색체와는 별도로 존재하면서 self-replication을 할 수 있는 원형 DNA 분자로 적은 수의 gene을 가지고 있다. 이 plasmid는 유전자 재조합 시 재조합 DNA 조작을 위한 vector DNA(숙주에 이종의 DNA를 운반하는 DNA)로 사용되며 원하는 DNA 단편을 넣어 gene cloning 등에 널리 이용된다. Plasmid는 주로 대장균 세포에서 증식되며 vector DNA로 사용되기 위하여 대량 증식된 대장균 세포로부터 분리하여 사용하게 되는데 대장균 세포내에서 염색체와는 별도로 존재하기 때문에, plasmid DNA 분리는 염색체 DNA가 포함되지 않게 분리하는 방법이 사용되게 된다. 이러한 분리 방법 중 널리 사용되는 방법 중 하나가 .. Biology/생화학 2020. 5. 23.

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  식물생태학실험 | Arabidopsis 및 조직배양을 이용한 식물의 일생관찰 Arabidopsis의 일생 관찰 1. Arabidopsis thaliana growth stages 1) Germination 후 8일 seedling상태의 cotyledon, hypercotyl, primary root이 생겨남 2) Germination 후 15일 작은 size의 4~6개의 Rosette leaves가 생김 3) Germination 후 29일 Rosette의 잎 수가 10~12개로 증가하고 잎이 커짐 4) Germination 후 34일 Stem elongation하고 flower bud 형성됨 5) Germination 후 44일 Flower가 천천히 open되며 silique가 생김 6) Germination 후 50일 silique안의 seed가 붉어지며 꽃은 더 이상 ope.. Biology/그외 생물학 2020. 5. 20.

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  생화학실험 | Purification of Plasmid DNA TIP Bacteria의 plasmid에 대해 알아보고 DNA의 구조에 의한 추출 원리를 이해한다. Plasmid 세균세포내에서 염색체와 독립적으로 존재하며 증식할 수 있는 환형DNA. 모든 플라스미드는 복제 개시점이 될수 있는 적어도 한 개의 DNA염기서열을 가지며 큰 플라스미드는 자체에 복제 효소를 가지기도 한다. 세균의 생존에 필수적인 유전정보를 가지고 있는 것은 아니지만 플라스미드에서 약제에 대한 저항성을 가진 내성인자,세균의 자웅을 결정하는 성결정인자등이 발견되고 있다. 제한효소로 고리를 끊은 뒤, 진핵생물의 DNA를 삽입하여 잡종 플라스미드를 만들어도 세균안에서 정상적으로 작동하고 증식하며, 이를 이용한 유전자 재조합을 통해 유용한 단백질을 얻을 수 있다. Vector 필요한 유전자를 잘라내어.. Biology/생화학 2020. 5. 19.

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  일반생물학실험 | 잎의 색소 분리 TIP 1. 광합성색소의 종류를 안다. 2. 크로마토그래피 이용한 광합성 색소의 분리 원리를 이해한다. 3. 분광광도기를 이용하여 색소의 최대흡수 파장을 알아본다. 4. Paper Chromatography를 이용해 잎에서 색소를 분리하고 각 색소의 최대흡수 파장을 알아본다. Photosynthesis(광합성) 광합성 색소 광합성은 엽록체라 불리는 식물의 특수한 기관에서 수행된다. 엽록체의 thylakoid membrane 에는 빛 에너지를 흡수하는 광합성 색소들이 분포 되어있며, 주요 광합성 색소들로는 chlorophyll a, chlorophyll b, carotenoid 등이 있다. 엽록소(chlorophyll)는 빛 에너지를 흡수하는 주 색소이나 , 보조색소(carotenoid) 역시 빛을 흡수하.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 5. 19.

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  생화학실험 | 형질전환 - 대장균 DNA 전기영동 관찰 형질전환 형질전환(transformation)은 외부로부터 주어진 DNA에 의하여 생물의 유전적 성질을 변하게 하는 일을 말한다. 이는 1928년 영국의 그리피스가 Diplococcus pneumonia를 이용하여 실험한 것이 계기가 되어 발견된 실험 방법이다. 세포는 외부의 DNA를 받아들임으로써 원래 갖고 있는 성질과는 다른 새로운 유전형질을 발현할 수 있게 된다. Transformation 에서는 외부의 DNA를 벡터를 이용해 bacteria cell에 주입해 준다. 이러한 벡터를 이용한 외부 DNA를 세포에 주입하는 방법으로는 또한 Transfection이 있다. Transfection은 Transformation과 같이 외부 DNA를 세포에 주입한다는 것은 같지만 가장 큰 차이점으로 Transf.. Biology/생화학 2020. 5. 15.

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  생화학실험 | 다당류의 구조 분석 및 아이오딘 산화(Periodate Oxidation) 반응 TIP 아이오딘 산화(Periodate Oxidation)반응을 이용하여 단당류와 이당류의 농도를 계산하고 다당류(Glycogen)의 1차적 구조를 알기 위한 것이다. 아이오딘 산화(Periodate Oxidation) 반응 반응시료가 아래와 같을 때 periodate(NaIO4)와 반응하면 산화와 탄소-탄소 결합의 분해를 동시에 가져온다. 두 개의 하이드록실기가 이웃하거나 한 개의 하이드록실기가 알데히드 또는 케톤과 이웃하고 있을 때, 각각의 알데히드와 케톤과 동적평형을 이루는 당의 헤미아세탈과 헤미케탈은 알데히드와 케톤처럼 작용한다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 실험 진행 일주일 전 ① 100mM Glycerol 10㎖를 정확히 재서 10㎖의 0.4M NaIO4 용액을 넣고 Parafilm으로 s.. Biology/생화학 2020. 5. 12.