• 

  미생물실험 | Biochemical Charcterization - β-galactosidase activity 실험 방법 1. 실험 과정 1) 균의 오염을 막기위해서 무균실에서 실험진행 2) 준비된 평판배지(LB agar)에 균들의 색 차이를 확인하기위해서 펜으로 구역을 나누어준다. 3) 백금선을 알코올램프에 달구어 빨갛게 변할때까지 끝까지 멸균해준다. 4) E.coli를 백금선으로 streak plating 해준다. 5) pGEMT easy vector을 주입한 E.coli 역시 ③∼④을 반복해준다. 6) steak plating 된 평판배지를 뒤집어놓는다. [미생물실험] Biochemical Charcterization - β-galactosidase activity 레포트 1. 실험 기구 및 시약 1.1. 실험 재료 1.1.1. 알코올램프, Pipet, 평판배지, 백금선, 펜 1.1.2. 미생물 : E.co.. Biology/미생물학 2020. 1. 7.

• 

  미생물실험 | Viable cell count - Serial dillution method 실험 방법 1. 실험 과정 1) 균의 오염을 막기위해서 무균실에서 실험진행 2) tube에 펜으로 labeling을 해준다. 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6 3) 준비된 tube (total volume:1㎖) 에서 균을 100㎕만큼 Pipetting 해준다음 900㎕의 H20가 들어있는 tube에 넣어서 total volume을 1㎖로 맞춰준다. (∴10-1희석) 4) 10-1 희석된 튜브에서 같은 방식으로 100㎕만큼 Pipetting 해준다음 각각의 tube에 넣어서 5) 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6 순서로 희석시켜준다. 6) 10-5 만큼 희석한 것을 100㎕만큼 Pipetting 해준다음 평판배지에 올려놓는다. 7) 준비된 삼각유리봉을 알코올.. Biology/미생물학 2020. 1. 4.

• 

  미생물실험 | 미생물의 현미경 관찰 Experiment 1. Gram positive/negative 1. 프레파라트 제작하기 ① 우선 준비된 4개의 슬라이드 글라스에 헷갈리지 않도록 펜으로 균주명을 적어놓는다. 그리고 프레파라트 제작 후 현미경 관찰과정에서 쉽게 균들을 관찰할 수 있게끔 펜으로 균을 놓을 곳의 뒷면에 원을 그려서 영역을 표시해준다. ② Smear – 4개의 튜브에 들어있는 각각의 균들을 Pipet을 이용하여 일정량( 을 각각의 슬라이드 글라스 위에 놓는다. 사용한 피펫팁은 알코올램프에 살짝 데어주어서 균에 의한 오염을 방지한다. ③ 알코올램프를 켜고 균이 올려진 슬라이드글라스의 뒷면을 알코올램프에 물기가 없어질 때까지 살짝 가져다대댄다. ④ Staining – 먼저 준비된 Crystal violet을 슬라이드글라스위의 균.. Biology/미생물학 2019. 12. 31.

• 

  미생물실험 | 자연계에 분포하는 미생물의 분리와 순수배양(one colony의 분리) - Screening and Streaking 실험 방법 1. 자연계에 분포하는 미생물의 분리(Screening) ① 실험에 이용할 소지품 등을 미리 준비해 놓은 다음, 여러방법을 이용하여 자연계에 분포하는 미생물을 채취한다. 빈플레이트에 증류수와 함께 담아 흔들어주는 방법과 면종을 이용해 닦는 방법과, 스포이드를 이용해 소지품을 들고 물로 흘러준다던지 배지에 직접 묻혀내는 방법 등이 있다. ② 배지가 담긴 플레이트에 살살 찍어(증류수를 이용하지 않아도 되는 경우) 배지에 미생물 이묻어날 수 있게 하거나, 증류수를 이용했을 경우 스포이드를 이용하여 배지가 담긴 플레이트에 2∼3방울 정도 떨어뜨려서 골고루 퍼지도록 하여 준비한다. 2. 순수배양 - one colony의 분리(Streaking) ① 먼저 백금이를 시너레이터에 넣어 살균한다. ② 살균된 .. Biology/미생물학 2019. 12. 27.

• 

  미생물학실험 | 평판배양법을 이용한 구강미생물 배양 배지란 미생물이나 동식물의 조직을 배양하기 위하여 배양체가 필요로 하는 영양물질을 주성분으로 하는 것을 말한다. 기체상으로 얻어지는 것을 제외한 생존, 발육에 불가결한 물을 비롯하여 영양물질로서 탄소원, 질소원, 무기염류, 발육인자 등이 포함되어있다. 배지는 물리적 상태에 따라 고체배지와 액체배지로 구분한다. 고체배지는 액체배지에 한천, 젤라틴, 실리카겔 등 젤을 형성하는 물질을 첨가하여 제조한다. 고체배지는 목적에 따라 평판배지, 사면배지, 고층배지로 구분 할 수 있다. 본 실험에서는 평판배지를 이용하였으며 한천(agar)을 이용하여 고체의 형태로 만들었다. 한천(agar)은 홍조류에서 추출한 복합 다당류로 100℃에서 녹으므로 배양 시 고체 상태를 유지 할 수 있다. 일단 녹으면 45∼50℃까지 액체.. Biology/미생물학 2019. 12. 24.

• 

  병원미생물실험 | 토양 속 미생물 채취 및 배양 및 streaking을 이용한 부차 배양 TIP 토양을 채취한 후 그 속의 미생물의 배양 방법을 습득한다. 미생물은 눈에 보이지 않는 생명체를 말하며, 주로 세균과 곰팡이 그리고 바이러스가 대표적인 생명체이다. 특히. 세균은 다양한 자연환경에 존재하며, 일반적으로 독립적으로 생활하고 있다. 세균을 배양하기 위해서는 배양하고자 하는 세균의 특성을 고려하여 잘 자랄 수 있는 환경을 제공해 주여야 한다. 이러한 환경에는 온도와 pH가 중요하다. 온도는 배양기를 이용하여 조절하며, pH는 배지를 만들 때 조정한다. 준비된 배지에 세균을 접종하기 위해서는 다른 미생물이 들어오지 않도록 무균조작을 하여야 한다. 일반적으로 무균조작을 위하여 clean bench를 사용하는데, 이는 외부의 공기가 침입하지 않도록 차단 막을 만들고, 외부로부터 오염된 공기가 .. Biology/미생물학 2019. 12. 21.

• 

  미생물실험 | 용혈성 검사 TIP Horse blood agar plate에서 실험미생물을 배양하여 용혈현상 유무로 안전성을 판단해보자. 용혈 현상 : 적혈구막이 터져 헤모글로빈이 세포 밖으로 유출되는 현상 1. 생체 내에서의 용혈 - 적혈구막이 선천적으로 약한 경우난 적혈구 파괴의 항진 시에 나타나며, 이형 수혈의 경우에도 발생 2. 물리적 용혈 - 진탕, 가열, 저온, 방사선, 삼투압 변화 등에 의해 용혈이 일어나기도 함. 3. 화학적 용혈 - 산, 알칼리, 지방산, 사포닌 등에 의해 발생 4. 동․식물성의 혈액 독 - 뱀, 벌, 전갈, 지네 등의 동․식물성 혈액 독에 의해서 용혈이 발생 5. 세균성 독소에 의한 용혈 - 포도구균, 연쇄구균 및 콜레라균 등의 독성에 의해서도 발생 6. 자기면역성 용혈 - 적혈구막에 대한 자기 .. Biology/미생물학 2019. 12. 17.

• 

  미생물실험 | 세균의 분별 염색법 TIP 그람염색법의 원리와 방법을 실험을 통해 터득하고, 주어진 박테리아들을 그람양성과 그람음성으로 구분해 본다. 그람 염색법 세포벽을 이루고 있는 성분과 구조적인 차이에 의해 그람양성균과 그람 음성균으로 구별하는 염색법이다. 그람양성세균은 크리스탈 바이올렛 등의 염기성 염료로 염색되어 탈색제 처리 후에도 탈색 되지 않고 보라색을 나타내는 세균이며, 그람음성세균은 탈색제에 의해 크리스탈 바이올렛이 탈색되고 대응 염색제에 의해 염색되어 붉은색을 나타내는 세균이다. 그람 음성균의 세포벽 펩티도글리칸층이 한 겹으로 매우 얇으며, 이 층 외부에는 인지질 등으로 구성된 외막이 감싸고 있는 형태로 세포벽이 이루어져 있다. 이 때 펩티도글리칸층은 주변세포질공간이라고 불리는 여러 효소와 기질이 존재하는 작은 공간이 생.. Biology/미생물학 2019. 12. 11.

• 

  미생물학실험 | 세균의 단염색 미생물 염색 미생물세포는 작아서 빛, 투과성이 강하며, 뚜렷한 모습을 드러내지 않는다. 따라서 세포구조, 모양, 부속물, 소기관 등을 관찰하기 쉽도록 미생물에 염료를 입히는 것이 염색이며 염료로는 산성염료와 염기성 염료가 있다. 산성 염료는 음전하를, 염기성 염료는 양전하는 띄며, 미생물이 음전하를 띄는 경우가 많아서 염기성 염료가 주로 사용된다. 염색의 종류에는 단순염색, 비교 염색(그람 염색, 항산성 염색), 특별 염색(배경염색, 포자염색, 편모염색) 등이 있으나 이번 실험에서는 단순염색 Simple staining에 대해 알아보기로 한다. Simple staining Crystal violet, Safrain, Methylene blue 등의 염료를 사용하여 미생물을 한번만 염색하여 관찰하는 방법 .. Biology/미생물학 2019. 12. 8.

• 

  미생물실험 | Nutrient agar plate 만들기 - Pure culture by the streak plate method TIP agar를 이용해 배지를 만들고, 도말 평판 배양법(streak plate method)으로 4종의 미생물을 도말하여 순수분리 배양한다. 배지의 종류(사용형태에 의한 분류) 1. 액체 배지 : 미생물의 생화학적 연구, 대량 배양 등에 이용 2. 고체 배지 : 액체배지에 한천 1.5∼2.0%를 첨가하여 굳힌 것. 순수 분리 배양 등에 이용 (페트리 접시에 평평하게 배양하는 평판배지, 시험관에 비스듬하게 굳힌 사면배지, 시험관의 2/3정도를 평평하게 채운 고층배지 등이 있음) 3. 반고체 배지 : 한천의 양을 0.6% 정도로 첨가하여 굳힌 것. 완전히 굳히는 것이 아니라 젤리 형태로 굳힌 것 균의 접종 방법 1. 분산 도말법(Spread Plate Method) 시료 중에 어떤 종류의 균이 존재하는지.. Biology/미생물학 2019. 12. 4.

• 

  미생물 실험 | 평판배양법에 의한 생균수 측정 TIP 평판배양법에 의하여 세균의 생균수를 측정하는 방법을 이해한다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 고체배지(agar medium) : MR-VP 고체배지를 제조한 후 고압증기 멸균(120℃, 15분)하고 크린벤취에서 고체평판배지를 만든다. 2) 희석(dilution) : 세균 배양액을 멸균한 생리식염수 혹은 증류수로 희석한다. 3) 도말(smearing) : 마이크로피펫으로 희석한 배양액 1㎖를 완전히 굳은 고체 평판배지에 넣고 좌우로 기울이거나 돌려 골고루 분산되도록 한다. 4) 건조(drying) : 평판배지상의 배양액을 자연건조로 건조시켜 수분을 완전히 제거한다. 5) 밀봉(sealing) : Sealing film(para film)으로 밀봉하고 실험자, 날짜, 배지명, 희석배수 들을 표시한다.. Biology/미생물학 2019. 12. 1.

• 

  미생물실험 | 미생물 희석법과 생균수 측정 - Spread/Pour plate 세균의 계수 식품이나 물에 존재하는 미생물의 수를 알아보는 방법이며, 배양된 배지에 나타나는 미생물의 colony의 수를 계수하는 것이다. colony의 수를 계수하는 이유는 식품위생과 관련이 깊다. 미생물은 다양한 장소 곳곳에서 존재한다. 우리가 먹는 음식물도 예외가 아니다. 생균수의 측정은 식품의 현재 오염정도나 부패의 진행도 등을 알기위해 측정한다. 우선 식품의 위생검사 목적중 위생성, 보존성의 여부가 생균수 측정만으로 가능하며 각 식품에 정해져 있는 미생물 기준치가 있는데, 그 기준치와 실제 측정하는 식품의 미생물 수를 비교해 보면서 식품이 오염됐는지 알아볼 수 있고, 면역이 약한 환자의 음식 등과 같은 상황에 따라 임의로 미생물의 수를 낮추거나 올리며 조절할 수도 있다. 균을 측정하는 경우에는 .. Biology/미생물학 2019. 11. 26.

• 

  미생물학실험 | 배지만들기 및 공중낙하 미생물 측정 TIP 대기와 개천 등에 여러 가지 미생물이 먼지, 부패물들과 함께 부유하고 있다. 이러한 것들은 물이나 환경에 오염을 일으키고 그 미생물이 병원체일 경우 질병의 원인이 될 수도 있다. 따라서 대기 중에 존재하는 세균이나 진균의 종류 및 그 수치를 측정함으로서 미생물에 의한 대기의 오염을 알 수 있으며, 대기 중에는 존재하는 미생물이 어떠한 미생물의 분포를 이루느지 알 수 있는 것이다. 미생물의 종류와 특징 공중에서 관찰 할 수 있는 미생물의 종류에는 세균과 진균류가 있다. 세균은 일반적으로 공기중에 부유하거나 낙하되는 것으로 부유세균과 낙하세균으로 나누어 볼 수 있다. 또한 측정방법상에도 차이를 둘 수 있다. 공기중에 부유하고 있는 세균은 먼지나 농도에 정비례한다는 사실을 미루어보아 공기 청정도와 밀접.. Biology/미생물학 2019. 11. 23.

• 

  미생물실험 | 공중 낙하균 TIP 1. 대기 중에 존재하는 균의 종류와 위생 상태를 점검할 수 있으며 그 수치를 측정함으로서 미생물의 분포를 알 수 있다. 2. 청정도 테스트의 한 방법인 공중 낙하균 검사는 공중미생물의 종류와 수를 검사하는 것은 식품위생상의 의의가 있다. 공중 낙하균 일정면적의 한천평판배지를 일정시간 어느 환경속에 방치하고 공기 중에 떠다니고 있는 미생물이 낙하하는 균을 말한다. 배지위에 발육하는 균은 생균 또는 먼지 등에 포함된 생균. 곰팡이, 효모류의 포자, 세균의 아포, 구균류 등이 있다. 이 방법은 측정이 용이하고 저렴한 이점이 있지만 단위용적 당 공기 중 세균농도의 평가는 할 수 없다. 공중 낙하균 방법 1) 한천배지를 지정장소에서 일정시간동안 뚜껑을 열고 공중낙하균을 부착시킨다. 2) 37℃의 인큐베이.. Biology/미생물학 2019. 11. 20.

• 

  미생물실험 | Mini-Prep (Hybrid-Q Plasmid Rapid prep Kit) Mini Prep DNA-isolation에 있는 원리 중 하나로 Plasmid DNA분리에 사용되는 방법이며 많은 후보를 빠른 시간 내에 분석하는 방법이다. Prep은 Prepartion의 약자.DNA를 소량으로 추출한다는 의미. 주로 이용되는 Alkylation lysis(denaturation)법과 boiling method, Iithium method법이 있다. DNA와 plasmid의 고유 형태구조 원리에 의한 분리 방법으로써 세포내에 DNA는 일반적인 double-helix의 형태를 가지는 반면 plasmid는 supercoiled형태를 가짐으로써 pH변화에 따라서도 plasmid의 형태와 구조가 크게 변하지 않아 순수한 plasmid만을 추출하는 구조적 기본원리에 의한 방법이다. 실험 방법 .. Biology/미생물학 2019. 11. 16.

• 

  미생물실험 | 식품의 생균수 측정 TIP 본 실험은 우유 속에 살아 있는 세균의 전체 수를 정량적으로 산출해 보며 생균수 측정법, 총균수 측정법, 페트리필름 사용법에 대해 알아보자 생균수 측정법 생균수(viable cell count)는 대상으로 하는 식품 중의 총 세균수라는 뜻은 아니며 일정한 조성의 배지에서 일정 온도로 유지하여 일정 시간 후에 한천 평판 위에 형성된 호기성균의 colony 수를 나타낸 것이다. 생균수 측정에 가장 많이 사용되는 방법은 시료를 적당히 희석하여 한천배지에서 배양한 다음 colony를 형성하는 균의 수를 측정 하는 평판계수법(plate count)이다. 생균수 측정에 의하여 얻어진 균의 수는 집락 형성 단위(cfu/㎖ 또는 cfu/g)로 표시하는데 이것은 각각의 colony는 한 개의 단일 세포에서 유래되.. Biology/미생물학 2019. 11. 12.

• 

  미생물학실험 | 생균수 측정 실험(MPN법) TIP 대장균을 이용한 생균수의 측정법과 정의를 알아본다. MPN법(Most Probably Number) 시료에 있는 균수를 최적합수법에 의해 산출하기 위해서이다. 최적합수, Most Probably Number란 통계학적으로 가장 확실한 수치를 말하며 옛날부터 공식적으로 사용하고있는 확률론적 추계방법이다. MPN법은 연속 희석한 일련의 시료를 액체배지가 든 여러 개의 시험관에 접종하고 배양하여 자라는 시험관의 수를 세어 통계학적인 방법으로 시료 속의 미생물 밀도를 결정하는 방법으로써 다중시험관 발효법이라고도 한다. 이 방법에서는 최소한 시료를 3단계까지 연속 희석하는데, 10㎖, 1.0㎖, 0.1㎖, 0.01㎖ 과 같이 순차적으로 10배마다 희석해 각 5개씩 시험관을 가진다. 이렇게 복수 배양한 시험.. Biology/미생물학 2019. 11. 9.

• 

  미생물실험 | 식품의 미생물 검사 – 진균수 측정 (고체 샘플링) TIP 진균을 배양하고 형태를 관찰함으로써 진균을 분리확인동정하는 기술을 습득하기 위함이다. 실험 방법 1. Potato Dextrose Agar+10% tartaric acid배지 만들기 1) 메스실린더에 증류수 150㎖를 채워 삼각플라스크에 절반만큼 넣는다. 2) Potato Dextrose Agar 5.85g 시약을 저울에 수저로 덜어서 잰 후, 삼각플라스크에 넣는다. 3) 메스실린더에 남은 물을 삼각플라스크에 넣고 흔들어준다. 4) tartaric acid를 2.00g만큼 넣고, 멸균생리식염수 18.00g만큼 넣어 10%의 tartaric acid를 20g이 되도록 만들어준 후, Autoclave에 넣고 돌려서 멸균시킨다. 5) 삼각플라스크 입구에 호일을 씌우고 Autoclave에 넣고 돌려서 멸.. Biology/미생물학 2019. 11. 5.