반응형 유전학실험 | 혈액을 통해 유전자 검사하는 과정 채혈 1. 소독을 위해 70% isopropyl alcohol이 권장되며 채혈할 부위를 중심으로 바깥쪽으로 원형을 그리듯이 닦아낸다. 소독약이 마르지 않았을 때 채혈을 하면 용혈이 발생하므로 소독약이 완전히 마른 후에 채혈을 실시한다. 2. 압박대는 소독약이 마른 후 채혈 직전에 사용하거나, 묶은 상태로 1분 이상 방치해서는 안된다. 3. 채혈은 바늘 굵기가 18-23G인 주사기를 사용하거나 상품화된 진공채혈관과 일회용 채혈바늘을 사용하여 실시한다. 4. 주사기를 사용하여 채혈할 때는 주사바늘의 사면이 위로 향하게 하여 채혈하고자 하는 정맥에 찌른다. 5. 정맥내에 주사바늘이 들어갔음을 확인하고 지혈대를 푼 후에 혈액을 채취한다. 이때 혈액채취를 빨리하면 피가 잘 나오지 않거나 적혈구가 용혈되는 경우가 .. Biology/유전학 2019. 10. 28. 분자생물학개론 | Introduction of DNA into Living Cells - 생세포에서의 DNA 도입 TIP 1. 형질전환(Transformation) - 세균 세포에 의한 DNA uptake 2. 재조합체의 동정 3. Introduction of phage DNA into bacterial cells 4. Identification of recombinant phages 5. Transformation of non-bacterial cells 재조합 DNA 제조 후 다음 단계는 생세포(보통 세균)안으로 재조합 DNA를 도입시키는 것이며 그 세포는 클론을 생산하기 위해 성장, 분열하게 된다. 엄밀히 말해서, 클로닝이란 재조합 DNA제조 자체를 일컫는 것이 아니라 그 이후 과정만을 말한다. 형질전환(Transformation) - 세균 세포에 의한 DNA uptake 대부분의 세균 종들은 그들이 성장하는 .. Biology/분자생물학 2019. 10. 28. 생화학실험 | Digestion, Extraction and Ligation of DNA TIP 제한효소와 플라스미드에 대해 알아보고 DNA 재조합 과정을 이해한다. 유전정보를 가지는 거대분자인 DNA 분자, 즉 유전자를 인간의 손으로 시험관내에서 자유로이 절단하거나 붙여 어떤 생물의 염색체 중에 삽입하여 목적으로 하는 특정의 유전자를 증식시키고 발현시키는 것이 가능해 졌다. 이와 같이 유전자를 인위적으로 조작하여 어떤 생물의 유전자에 다른 생물의 유전자를 삽입하고 그 유전자를 단일 clone으로 증식시키거나 발현시키는 것을 DNA 재조합 또는 유전자 조작이라고 한다. 유전자 재조합 기술은 생물학의 연구에 있어 가장 기본이 되는 것으로, 원하는 유전자 만을 증폭하거나, 특정 유전자를 다른 유전자와 재조합 시킬 수 있으므로 그 유전자의 역할 구명에 큰 이바지를 하고 있다. 그런 유전자의 역할은.. Biology/생화학 2019. 10. 28. 생물학개론 | Triacylglycerol TIP 1. 트리아실글리세롤 2. 트리아실글리세롤 구성성분 3. 인체 내에서의 트리아실 4. 지방/기름에서의 트리아실글리세롤 5. 트리아실글리세롤의 분석 1. 트리아실글리세롤 글리세린에 포함된 3개의 히드록시기에 지방산 3분자가 에스테르 결합한 것이다. 식용유지의 대부분(보통 99% 이상)이 트리아실글리세롤로 구성되어 있다. 음식물로서 섭취하는 지방질의 95% 이상은 트리아실글리세롤이다. 결합하고 있는 지방산의 수에 따라 mono, di, triacylglycerol이라고 부른다. 따라서 트리아실글리세롤 1분자는 glycerol에 3분자의 지방산이 ester 결합한 것으로 중성지방질이다. 트리아실글리세롤에는 구성 지방산의 종류나 이들의 결합위치에 따라 많은 분자 종이 있고, 다른 물리화학적 성질을 나타낸.. Biology/일반 | 세포 생물학 2019. 10. 26. 미생물실험 | 온도에 따른 미생물 생장 TIP 균의 생장에 관여하는 주변 환경 중에 온도에 따른 균의 생장속도를 알아보는 실험으로, 한 종류의 균을 실온, 27℃, 32℃ 3곳으로 분류하여 생장하는 과정을 관찰함으로써, 균이 생장하기 위한 최적의 온도를 알 수 있다. 실험 방법 1. 배지만들기 ① PDA(POTATO DEXTROSE AGAR)를 삼각플라스크에 담아 가열한 후 액체로 된 상태 에서 잘 섞이도록 흔들어주고 6개의 Petri dish에 부어 반 정도 채운다. ② 배지가 굳을 때까지 기다린다. 2. 접종하기 ① 배양할 균(W.cocos)이 들어있는 Petri dish를 준비하고 알콜램프로 소독한 Cork Borer를 이용하여 새로 자라고 있는 균이 있는 쪽(Petri dish 바깥쪽)에 쿡쿡 찍는다. ② 백금이 끝부분을 알콜램프로 소.. Biology/미생물학 2019. 10. 25. 유전학실험 | subcloning I(digestion) TIP 우리가 확인하고자 하는 promoter의 활성을 측정하기 위한 실험과정중 하나로써, 이미 vector에 붙어있는 promoter에서 일부분을 자르기 위해 vector를 restriction enzyme(restriction endonuclease)을 이용하여 잘라낸 후 그 크기들을 확인한다. 1. genomic DNA와 plasmid DNA의 차이 2. subcloning 3. electrophoresis 4. restriction enzyme 5. promoter gene & reporter gene 실험 방법 1. 실험 과정 1) plasmid DNA인 pMB01을 준비한다. 2) Microfuge tube에 DDW 12.5㎕, DNA(pMB01) 5㎕, enzyme(BamHI)을 일정량 넣고.. Biology/유전학 2019. 10. 24. 생명과학실험 | SDS PAGE gel 제조 & Gel Loading & Coomassie Brilliant Blue Staining TIP 단백질을 SDS urea나 2-mercapto ethanol과 같은 환원제로 용해시킨 후, SDS로 (-)전하를 띄게 하여 size별로 분리 해 보자. SDS-PAGE Gel 제조시 각 materials의 역할 Buffer의 선택은 gel의 resolution에 영향을 준다. Buffer는 반응을 하지 말아야 하고, 대부분의 protein과도 반응을 하거나 protein을 변화시켜도 안된다. 이때 Tris-HCl buffer는 이러한 성질을 가장 잘 갖추고 있는 buffer이다. 또한 Tris-HCl buffer는 pH값을 원하는 값으로 안정 시켜 준다. 그 다음으로 알아 볼 buffer는 acrylamide이다. 이 buffer는 물에서 vinyl addition polymerization이라는.. Biology/생명 과학 | 공학 2019. 10. 24. 분자생물학개론 | Manipulation of Purified DNA - 정제된 DNA의 조작 TIP 1. DNA를 조작하기 위해 사용되는 효소들의 종류 2. DNA 절단용 효소 : 제한 효소(Restriction endonucleases) 3. Ligation - DNA 분자들을 서로 연결시키기 1. DNA를 조작하기 위해 사용되는 효소들의 종류 이들 효소는 이들이 촉매하는 반응의 유형에 따라 5가지로 나눌 수 있다. (1) 핵산 분해 효소(Nucleases) : 포스포디에스테르 결합을 끊음으로써 DNA 분자들을 분해시킴 1) Exonuclease(엑소뉴클레아제 또는 외부 핵산 분해 효소) : DNA 말단부터 한번에 하나씩의 뉴클레오티드를 제거시키는 효소로서, 이중가닥을 공격할 때 분해시키는 가닥의 수로 세분한다. ① BAL31(from the bacterium Alteromonas espeji.. Biology/분자생물학 2019. 10. 21. 생화학실험 | DNA purification & DNA Gel Electrophoresis TIP 1. DNA, RNA, Protein 등의 혼합물, RNA, Protein과 같은 contaminants를 제거하여 Pure DNA를 얻는다. 2. 미생물에서 Plasmid DNA를 분리하고 PCR을 이용하여 DNA를 증폭하고, 제한효소를 이용하여 DNA를 절단한 후 Mini gel을 이용하여 전기영동법에 의해 DNA를 분리하고 확인하여 본다. 3. Plasmid DNA를 이용하여 미생물 형질전환을 한 후 미생물 형질전환체를 선별하는 기술까지 분자생물학을 공부하는데 필수적인 실험 기술을 습득한다. Plasmid DNA 분리법 원핵세포에는 염색체 DNA 외에도 작은 DNA가 발견된다. 보통 플라스미드(Plasmid)라 불리는 이들 DNA는 염색체 DNA보다 상당히 작고(4kb~100kb) 스스로 복.. Biology/생화학 2019. 10. 21. 일반생물학실험 | 세균의 분리 및 관찰 TIP 세상에는 많은 수의 박테리아(세균)들이 존재한다. 이 세균들의 특성을 연구하기에는 너무 개체수가 많기 때문에 비슷한 특성을 가지는 세균들끼리의 분류가 필요할 것이다. 세균들의 분류를 통해서 새로운 종류의 세균의 특성을 추측할 수도 있을 것이다.(같은 분류에 속한 세균은 비슷한 성질을 가질 가능성이 높다고 생각된다.) 그래서 세균을 분류하는 여러 가지 방법이 생겨났는데 그중에서 대표적인 분류방법을 본 실험을 통해서 배우고자 한다. 1. 세균의 분류와 동정에 사용되는 몇 가지 실험법을 이해한다. 2. 세균의 관찰 및 분류에 이용되는 그람 염색법을 실시한다. 3. 세균의 활성 중 전분 가수 분해 능력을 시험한다. 개체들의 자연적 특성이나 유사성에 의해 그룹으로 분리하고 그 개체나 그룹에 이름을 붙인다는.. Biology/일반 | 세포 생물학 2019. 10. 21. 면역학개론 | 단일클론항체의 원리와 응용 TIP 1. 단일클론항체의 원리 2. 단일클론항체의 응용 단일클론항체(monoclonal antibody)의 원리 항체는 일반적으로 외부 물질(antigen)을 생물체 내에 주입, 체액성 면역반응을 유도하여 항체(antigen)생성을 유도하고, 혈액을 채취하여 얻게 된다. 이러한 방법으로 얻은 항체는 대게 polyclonal antibody(다클론 항체)이다. 체액성 면역반응에서 항원은 여러 가지 epitope로 B cell에 노출되고 B cell를 활성 시켜 항체를 만들 수 있는 plasma cell로 분화시킨다. 생물체내에서는 여러 종류의 plasma cell이 각기 다른 여러 종류의 항체를 분비한다. 한 종류의 plasma cell에서 만들어짐 한 종류의 항체만을 monoclonal antibody.. Biology/면역학 2019. 10. 20. 일반미생물학실험 | 배지 조제 TIP 1. 미생물 배양에 필요한 고체배지를 만들어 보고 고압증기멸균(Autoclave)하는 방법을 숙지한다. 2. 우리 주위의 환경 속에서 분포하는 미생물들을 배양할 수 있다. 실험 기구 1. Auto clave 단어를 검색해보니 고압증기멸균기 라는 기계의 설명이 나왔다. 고압증기멸균기 는 병원에서 멸균을 하는데 사용하는 기계로써 고온·고압하에서 합성·분해·승화·추출 등의 화학처리를 하는 내열·내압성 용기이다. 멸균대상물에 따라 적절한 온도와 압력을 설정하여 가열한 포화수증기로 효소와 조직 단백질의 비가역적인 응고작용과 변성으로 미생물을 살멸시킨다. Auto clave(고압증기멸균)을 하는 이유 : 배지를 제조하는데 앞서 Auto clave를 하는 이유는 원하는 미생물을 배지에 배양하기 전에 미리 배지.. Biology/미생물학 2019. 10. 20. 생명공학실험 | Cell Transformation TIP Transformation을 통해 E.coli 에 원하는 DNA를 주입한다. Competent cell E. coli를 포함한 대부분의 박테리아는 일반적인 환경에서 극히 제한된 양의 DNA만을 받아들인다. 이러한 종류를 효과적으로 transformation 하기 위하여 박테리아는 DNA를 받아들이는 능력을 향상시키는 물리적, 화학적 형태의 처리가 필요하다. 정상적인 bacteria cell에 이러한 물리적, 화학적 처리를 하여 외부의 DNA가 잘 들어갈 수 있도록 만든 cell을 competent cell이라고 한다. Competent cell로 만드는 방법으로는 우선 37℃가 아닌 18℃에서 cell을 키우면 세포막을 빽빽하게 못 만들게 된다(heat shock). 그 후에 칼슘이온으로 처리해서.. Biology/생명 과학 | 공학 2019. 10. 19. 분자생물학개론 | Purification of DNA from Living Cells - 생세포로부터의 DNA 분리, 정제 TIP 1. Total cell DNA의 분리 2. 플라스미드 DNA의 분리 3. 박테리아파지 DNA의 분리 유전 공학을 위한 DNA분리는 3가지 유형으로 구분할 수 있다. 제 1 Type : 세포 전체 DNA(total cell DNA)이며 클로닝될 유전자를 얻기 위해 필요 제 2 Type : 순수한 플라스미드 DNA이며 분리방법은 기본적으로 total cell DNA분리와 같지만 어느 단계에서는 염색체 DNA와 분리되어야 한다. 제 3 Type : 파지 DNA이며 파지 클로닝 벡터로 이용될 때 필요. 파지 DNA는 감염세포로부터 보다는 파지 자체에서 분리되는 것이 일반적이기 때문에 세균 DNA에 의해 오염되는 문제는 없다. 그러나 파지 캡시드(단백질)를 제거하기 위해선 특수한 방법이 필요하다. 예외적.. Biology/분자생물학 2019. 10. 18. 생화학실험 | PCR & DNA Gel Electrophoresis TIP 1. PCR을 이용하여 DNA를 증폭한 후 Agarose gel electrophoresis를 통해 DNA를 분리한다. 2. PCR의 원리를 이해하고 전기영동에 이용된 시약의 특성을 이해한다. PCR 유전자를 분석하고 연구하는데 있어서 가장 큰 문제점은 복잡한 전체 genome중에 연구 하고자 하는 유전자가 희귀하다는 것인데, PCR은 특정 DNA Sequence의 copy수를 기하 급수적으로 증폭시킬 수 있다는 점이다. 이러한 PCR을 소개하기에 앞서서 간단히 분자 생물학적인 사항을 review해 보면 먼저 DNA의 구성을 살펴보면, DNA는 다음과 같이 phosphate group(인산기) - sugar(당) - base(염기)의 세 가지 요소로 구성되는 nucleotide라는 모듈이 쌍으로 .. Biology/생화학 2019. 10. 18. 일반생물학실험 | 효소활성에 온도, pH가 미치는 영향 TIP 전분 분해효소인 아밀라아제(amylase)의 효소 촉매활성에 미치는 요인들 중 반응 중의 온도와 pH가 효소활성에 미치는 효과를 관찰한다. 세포의 물질대사과정에는 복잡한 분자를 간단한 분자로 분해하는 이화작용과 작은 분자들로부터 세포 내 고분자들을 합성하는 동화작용이 있다. 이때 반응에 참여하는 반응물질을 기질이라고 부른다. 기질과 효소의 상보적인 구조적 특성으로 인하여 각 효소들은 기질에 대한 높은 특이성을 획득하게 된다. 효소는 활성부위에서 생성물을 쉽게 만들 수 있도록 효소와 기질의 복합체를 전이상태로 전환시킴으로써 반응의 활성화 에너지를 감소시킨다. 효소반응은 기질 간의 충돌속도에 의해 반응속도가 결정된다. 반응온도가 상승하면 기질의 운동에너지가 증가하여 반응속도가 증가하게 된다. 반면 지.. Biology/일반 | 세포 생물학 2019. 10. 17. 생명공학실험 | Lowry 법을 이용한 단백질 정량 식품중의 단백질은 탄소, 수소, 산소의 각 원소 외에 반드시 일정량의 비율로 질소를 함유하고 있다. 특히 질소는 지방이나 탄수화물 등 식품의 다른 중요 성분에는 포함되어 있지 않으므로, 식품중의 단백질 정량은 전질소량을 정량하고 그 값에 일정의 계수를 곱하여 조단백질의 양을 구한다. 가장 널리 사용되어지는 정량법의 한 가지로서 감도도 좋고, column chromatography에 있어서 단백질의 정량에 적합하다. 또한 이하에 나타낸 물질이 혼재하여도 정량치에 영향을 주지 않는다. 본 법의 원리는 알칼리성에서 단백질의 펩타이드 결합과 구리가 반응해 구리 이온을 생성하는 뷰렛 반응 원리를 이용한 실험이다. 구리 이온은 방향족 아미노산의 산화를 유도하여 인몰리브덴산(인덩스덴산)이 단백질 중의 트립토판과 티록.. Biology/생명 과학 | 공학 2019. 10. 16. 유전학실험 | 초파리의 단성잡종 교배 단성잡종교배 한 쌍의 대립유전자에 차이가 있는 양친 사이의 교배를 말한다. 사실상 두개체가 여러 형질에서 차이가 있을 수 있으나 조사대상은 한 쌍의 대립유전자에만 국한된다. 완두의 키가 큰 것과 작은 것의 교배는 단성 잡종교배인 것이다. 분리의 법칙은 양친의 유전자형을 알고 있을 때 앞으로 기대되는 유전자형과 표현형의 비율을 계산하는데 사용될 수 있다. 그와 같은 교배의 결과를 결정하는 한 가지 방법은 퍼넷 사각형을 이용하는 것이다. 이는 아주 간단한 방법으로 1900년대 초에 유전분야에서 유명한 퍼네트에 의해 고안된 방법이다. 웅성배우자의 가능한 모든 종류는 횡축에 자성배우자의 가능한 모든 종류는 종축에 놓았을 때 양 배우자들의 조합방법은 각 해당 칸을 채움으로서 결정된다. 결과에서 예상 표현형의 비는.. Biology/유전학 2019. 10. 16. 이전 1 ··· 35 36 37 38 39 40 41 다음 반응형