• 

  일반생물학실험 | 플라스미드 DNA 추출 TIP Recombinant DNA plasmid가 들어있는 E.coli로부터 plasmid를 직접 추출하여 분자생물학적 실험의 기본이 되는 DNA관련 실험에 대해 이해한다. 외부 DNA를 E.coli에 도입시켜 형질전환이 이루어지게 하면 이 세포들은 기존에 갖고 있던 chromosomal DNA 뿐만 아니라 plasmid DNA도 갖고 있게 된다. 특정한 DNA를 확보하고 싶을 때, 그 plasmid DNA를 숙주세포에 도입한 후, 따로 분리해내면 원하는 것을 얻을 수 있다. 이 실험에서 Ampicillin이 포함된 LB배지에서 키운 형질전환된 Ampicillin 저항성 E.coli를 이용하여 특정한 plasmid DNA를 얻는다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) Ampicillin이 포함된 LB배지에.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 9. 24.

• 

  분자생물학개론 | Edman degradation TIP 1. Edman Sequencing의 개요 2. 왜 Edman Sequencing 이 분석과정에 필요한가? 3. Edman degradation 실험 과정 4. Edman Protein Sequencing의 분석에서의 장점 5. Edman Protein Sequencing 의 분석에서의 단점 6. Edman Sequencing에 단백질 분자량에 따른 필요한 단백질 양 7. N-terminal Blocking에 영향을 주는 아미노산 8. PVDF membrane blotting시 - MeOH의 적정 농도 9. Sequencing 분석 결과가 나오지 않을 때, 고려해야할 몇가지 사항 펩타이드나 단백질의 N-말단 아미노산을 결정하는 방법으로 N-말단을 페닐 아이소사이아네이트(C6H5N=C=S)로서 처리.. Biology/분자생물학 2020. 10. 21.

• 

  일반생물학실험 | 제한효소에 의한 DNA의 절단 TIP 1. 시험관 내에서 유전자를 조작할 때 쓰이는 도구인 제한효소로 Plasmid DNA를 잘라보고 분석한다. 또한 절단한 Vector DNA와 insert DNA를 ligase로 ligation해보고 대장균에서 그 형질을 발현 시켜 본다. 2. 생명공학의 기초가 되는 분자생물학의 기본실험인 미생물에서의 plasmid DNA를 절단하는 실험이다. 본 실험은 가장 기초가 되는 실험으로서 이 후에 하게될 전기영동 실험에서 응용하게 된다. 전기영동 실험에서는 거대분자들을 연구하기 위하여 사용하는 방법으로 PCR도 사용하게 된다. 이 실험을 통하여 DNA의 분리 및 확인을 알아보려고 한다 제한효소 (restriction enzyme) 제한효소 (restriction enzyme) 혹은 제한 내부핵산 가수분해.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 8. 21.

• 

  분자생물학개론 | Flow cytometer(FACS)의 원리 및 응용 TIP 1. Flow Cytometry 의 발전 역사 2. Flow Cytometry 3. Flow Cytometry 의 원리 4. Flow Cytometry 의 응용 Flow Cytometry의 발전 역사 1930년 스웨덴 Karolinska Institute의 Caspersson이 세포내 핵산과 단백질 양을 측정하기 위해 microspectrophotometer를 개발한 것이 가장 시초이다. 1947년 Northwestern대학(미국)의 Gucker등에 의해 공기를 빠른 속도로 주입하면서 검체를 실려 보내고 입자가 통과하면 빛이 산란되어 photodetector에서 전기 신호를 검출해낼 수 있는 최초의 Flow cytometer가 개발 되었다. 1950년 형광 항체가 개발되었으며 이즈음 hematol.. Biology/분자생물학 2019. 12. 27.

• 

  분자생물학개론 | 이중 특이성 항체의 제조 방법 TIP 1. 생체내 접근법 2. 시험관내 접근법 3. 배합 접근법 생체내 접근법 적합한 동물을 항원으로 면혁화시켜 생체내 항체 레퍼토리를 항원에 노출시킨 후, 동물로부터 관심대상의 항체 또는 항체들을 회수하는 것이다. 이 방법은 이중 특이성 항원을 사용한 이중 특이성 항체의 제조 및 관심대상의 두 개의 구조적으로 관련된 분자를 특이적으로 인식하는 항체의 선택에 적용시킬 수 있다. 적합한 환자(포유동물, 상기 포유동물의 유전자이식 된 형태, 녹아웃 형태를 포함)를 이중 특이성 항원의 면역원성 제제로 면역화시킴으로써 제조할 수 있다. 적합한 면역원성 제제는 (예를 들면) 화학적 합성, 재조합적으로 발현된 이중 특이성 항원을 함유할 수 있다. 프로인트 완전 또는 불완전 보조제, 또는 유사한 면역자극성 화합물 .. Biology/분자생물학 2019. 12. 23.

• 

  분자생물학개론 | EGF - 상피세포 성장인자 TIP 1. EGF (Epidermal growth factor)의 정의 2. EGF의 효과 3. EGF 의 활성 4. EGF 와 유사한 물질 EGF (Epidermal growth factor) EGF는 'Epidermal Growth Factor'의 약자로 ‘상피세포 성장인자’라고 불린다. 인체의 자연적인 상처치유 과정에서 새살(육아조직)을 돋게 하고 혈관을 재생시키는 몸 안의 상처치유 물질이다. 주로 사람의 체액에 고루 분포되어 있고 53개의 아미노산으로 이루어져 있다. 미국의 생물학자 스탠리· 코헨(Stanley Cohen) 박사에 의해 발견되었다. 코헨 박사는 동물이 상처를 혀로 핥아주기만 하면 아무는 것에 착안하여 생쥐 침샘 연구를 시작했다. 생쥐의 턱밑 샘 추출물을 갓 태어난 생쥐에게 주사하.. Biology/분자생물학 2019. 12. 19.

• 

  분자생물학개론 | Cell Banking TIP 1. 세포주 동결보존의 필요성 2. 동결에서 세포에 나타나는 현상 3. 동결보존제의 종류 및 역할 4. 동결보존 방법 5. 해동방법 6. 무혈청 배지를 이용한 장기 동결보존 세포주 동결보존의 필요성 1) 의약품 생산에 있어서 동물세포는 장기간 동안 세포주의 특성을 유지할 수 있어야 한다. 2) 동결보존에 의해 세포 배양 및 유지의 어려움 극복 가능 3) 세균이나 mycoplasma 의 오염을 방지 4) 세포주의 형질 전환 방지 5) 실험 및 생상의 재현성을 확립하는데 중요한 역할을 함. 동결에서 세포에 나타나는 현상 1) 온도 급속히 냉각 시, 세포막 외부가 먼저 동결되어 형성된 얼음 결정에 의해 세포막 파괴 및 각종 세포기관에 손상과 같은 세포내부의 물리적 손상이 나타남 2) 온도 천천히 냉각 .. Biology/분자생물학 2019. 12. 15.

• 

  분자생물학개론 | Reversed-Phase High-Performance Liquid Chromatography TIP 1. Reversed-Phase High-Performance Liquid Chromatography 2. 이동상 조성에 따른 분류 3. RP-HPLC Materials 4. RP-HPLC Methods 5. RP-HPLC elution profile illustrating the purification of a synthetic peptide. 6. The Ligands 7. C18 Column 8. Free Silanol 9. Column Packing Geometry 10. Column Dimensions 11. The Ionic Additive 12. Mobile phase 13. Gradient Time and Shape 14. LC컬럼의 특성 이동상 조성에 따른 분류 1. Isocrat.. Biology/분자생물학 2019. 12. 11.

• 

  분자생물학개론 | HPLC of peptides and proteins TIP 1. Basic Theory and Methodology 2. Liqiud Chromatogaphy의 종류 3. High Performance Liquid Chromatography 4. Retention and Bandwidth Relationships 5. Diagram of the retention parameters that describe a chromatographic separation 6. Capacity factor, k' 7. Equilibrium Distribution Coefficient 8. Selectivity Factors(Seperation factor, α) 9. Column Efficiency (N=Theoretical Plate Number) 10. Resolut.. Biology/분자생물학 2019. 12. 8.

• 

  분자생물학개론 | Studying gene expression and Function TIP 1. Studying the transcript of a cloned gene 2. Studying the regulation of gene expression 3. Identifying and studying the translation product of cloned gene 모든 유전자들은 기능하기 위해 발현되어야만 한다. 발현의 첫번째 단계는 상보적인 RNA가닥으로 유전자가 전사되는 것이다. 일부 유전자 - 예를 들어 tRNA 그리고 rRNA분자들을 암호화하고 있는 유전자 - 에서는 전사체 자체가 기능적으로 중요한 분자이다. 다른 유전자들의 경우에, 전사체는 단백질 분자로 번역된다. 유전자가 어떻게 발현되는지를 이해하기 위해서는 RNA 전사체를 연구해야만 한다. 특히 분자생물학자는 그 전사.. Biology/분자생물학 2019. 12. 3.

• 

  분자생물학개론 | The Structure and Function of Biological Membrane - 생체막의 구조와 기능 TIP 1. 생체막(生體膜, Biological Membrane) 2. 생체막의 구조와 합성 3. 생체막의 특징(막 단백질) 4. 생체막의 구성성분 5. 생체막의 기능 6. 막의 정지전위와 활동전위 7. 생체 카오스의 구조 8. 생물분자막을 이용한 생물전자소자의 개발 동향 9. 생체막 측정을 위한 아질산 미소감지기(Nitrite microsensor) 개발 10. 인공 세포막 제작 11. 생체막의 연구방향 1. 생체막(生體膜, Biological Membrane) 세포나 세포 내의 미토콘드리아·소포체·골지체·핵·리소좀 등을 구성하는 막으로, 대부분 단백질과 지질로 이루어진다. 외계와의 경계로서 핵산, 단백질, 기타의 생체물질이 외부로 흩어지는 것을 방지하고 독립된 환경을 형성하여 생명활동을 영위하도록 한.. Biology/분자생물학 2019. 11. 29.

• 

  분자생물학개론 | Studying Gene Location and Structure TIP 1. How to study the location of a cloned gene 2. DNA sequencing - working out the structure of a gene 3. Using cloned genes to study genome structure Cloning 실험은 원하는 유전자를 지닌 재조합 DNA분자의 복사본들을 가지고 있는 colony나 plaque를 제공한다. 많은 경우에 있어서, 연구계획에서 다음 단계는 그 재조합 DNA분자를 정제하여, 조작된 유전자에 대해 가능한 많은 정보를 얻는 것이다. 예를 들면 Plasmid와 같은 작은 DNA molecule 또는 chromosome과 같이 큰 DNA molecule에서의 유전자 위치를 알아내는 여러 방법이 있다. 이를 위.. Biology/분자생물학 2019. 11. 25.

• 

  분자생물학개론 | How to Obtain a Clone of a Specific Gene TIP 1. The Problem of Selection 2. Direct Selection 3. Identification of a Clone from a Gene Library 4. Methods for clone identification 1. The Problem of Selection 가장 간단한 생물체인 E. coli 조차도 수천개의 유전자를 가지고 있으며, 따라서 전체 세포의 DNA가 제한 효소로 처리되면 원하는 유전자를 가진 단편뿐만 아니라 다른 유전자를 가진 또 다른 많은 단편들이 생기게 될 것이다. Ligation 반응동안 개개의 단편을 선별할 수 없으며 서로 다른 DNA조각을 가진 수많은 재조합 DNA분자들이 생성될 것이다. 그 결과 형질전환과 plating한 후에 다양한 재조합 cl.. Biology/분자생물학 2019. 11. 16.

• 

  분자생물학개론 | Cloning Vectors for Organisms Other than E. coli TIP 1. Vectors for Yeast and Other Fungi 2. Cloning Vectors for Higher Plants 3. Cloning Vectors for Animal Cells 대부분의 cloning 실험은 숙주로서 E. coli 와 함께 수행되며, 매우 다양한 cloning vector 들이 이 생물체에 대해 유용하다. Cloning 실험의 목적이 유전자 구조와 기능 같은 분자생물학적인 기본적 특징을 연구할 때 특히 그렇다. 그러나 어떤 경우에는 gene cloning 실험을 위해 다른 숙주를 이용하는 것이 바람직할 수도 있다. 이것은 그 목적이 유전자 연구가 아니라 중요한 대사산물(ex, hormone)의 합성을 조절하거나 향상시키고, 또는 생물체의 특징을 변화시키는(ex,.. Biology/분자생물학 2019. 11. 12.

• 

  분자생물학개론 | Cloning vector for E. coli TIP 1. Cloning vectors based on E. coli plasmids 2. Cloning Vectors Based on M13 Bacteriophage 3. Cloning Vectors Based on λ Bacteriophage 4. λ and other high capacity vectors enable genomic libraries to be constructed 5. Vectors for other bacteria 1. Cloning vectors based on E. coli plasmids Gene cloning에서 가장 널리 사용되는 가장 단순한 cloning vector들은 작은 bacterial plasmid에 기초하고 있다. 매우 많은 plasmid vector들이 .. Biology/분자생물학 2019. 11. 4.

• 

  분자생물학개론 | Manipulation of Purified DNA - 정제된 DNA의 조작 TIP 1. DNA를 조작하기 위해 사용되는 효소들의 종류 2. DNA 절단용 효소 : 제한 효소(Restriction endonucleases) 3. Ligation - DNA 분자들을 서로 연결시키기 1. DNA를 조작하기 위해 사용되는 효소들의 종류 이들 효소는 이들이 촉매하는 반응의 유형에 따라 5가지로 나눌 수 있다. (1) 핵산 분해 효소(Nucleases) : 포스포디에스테르 결합을 끊음으로써 DNA 분자들을 분해시킴 1) Exonuclease(엑소뉴클레아제 또는 외부 핵산 분해 효소) : DNA 말단부터 한번에 하나씩의 뉴클레오티드를 제거시키는 효소로서, 이중가닥을 공격할 때 분해시키는 가닥의 수로 세분한다. ① BAL31(from the bacterium Alteromonas espeji.. Biology/분자생물학 2019. 10. 21.

• 

  분자생물학개론 | Purification of DNA from Living Cells - 생세포로부터의 DNA 분리, 정제 TIP 1. Total cell DNA의 분리 2. 플라스미드 DNA의 분리 3. 박테리아파지 DNA의 분리 유전 공학을 위한 DNA분리는 3가지 유형으로 구분할 수 있다. 제 1 Type : 세포 전체 DNA(total cell DNA)이며 클로닝될 유전자를 얻기 위해 필요 제 2 Type : 순수한 플라스미드 DNA이며 분리방법은 기본적으로 total cell DNA분리와 같지만 어느 단계에서는 염색체 DNA와 분리되어야 한다. 제 3 Type : 파지 DNA이며 파지 클로닝 벡터로 이용될 때 필요. 파지 DNA는 감염세포로부터 보다는 파지 자체에서 분리되는 것이 일반적이기 때문에 세균 DNA에 의해 오염되는 문제는 없다. 그러나 파지 캡시드(단백질)를 제거하기 위해선 특수한 방법이 필요하다. 예외적.. Biology/분자생물학 2019. 10. 18.

• 

  분자생물학개론 | Vectors for Gene Cloning - Plasmids and Bacteriophages TIP 1. 플라스미드(Plasmids) 2. 박테리오파지(Bacteriophages) 벡터는 숙주세포 안에서 복제할 수 있어야만 하고 10 kb 이하로 비교적 작아야 할 필요가 있다(너무 큰 경우, 조작 중 파괴될 가능성이 높아짐). 이러한 기준을 만족시키는 두 종류의 DNA분자는 세균 세포에서 발견된다.(플라스미드 및 박테리오파지 염색체) 벡터로서의 특징 ① 숙주 세포 내에서 복제할 수 있다. ② 또한 비교적 작을 필요가 있으며 10kb 이하가 이상적이다. 플라스미드(Plasmids) (1) 플라스미드의 기본적인 특징 플라스미드는 세균 세포내에 독립적으로 존재하는 원형의 DNA분자이다. 플라스미드는 거의 항상 하나 이상의 유전자를 가지고 있으며 이들 유전자는 종종 숙주세균에 의해 나타나는 유용한 특징.. Biology/분자생물학 2019. 10. 14.