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  생명공학실험 | Plasmid DNA preparation TIP Ampicillin에 대하여 저항성을 지닌 E. coli (XLI-Blue, Amp-r) 의 plasmid DNA pBluescript SKⅡ(+)를 isolation 한다. Plasmid DNA를 정제하기 위해서 여러 가지 방법들이 사용되는데 공통적으로 다음의 세 과정- 미생물의 배양과 플라스미드 증폭 ; 미생물 수거와 cell lysis ; plasmid DNA 정제-을 거친다. DNA를 분리하기 위해서는 일단 DNA가 세포 밖으로 유출되도록 세포벽 및 세포막을 분해 시켜야 하고, 이때 DNA 가수분해 효소들의 활성을 억제하는 조건에서 DNA를 분리해야 하며 단백질이나 RNA가 같이 회수되지 않도록 해야 한다. 세포벽을 가지는 박테리아의 경우에는 먼저 lysozyme을 처리하여 세포벽을 분해 .. Biology/생명 과학 | 공학 2022. 9. 24.

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  일반생물학실험 | 플라스미드 DNA 추출 TIP Recombinant DNA plasmid가 들어있는 E.coli로부터 plasmid를 직접 추출하여 분자생물학적 실험의 기본이 되는 DNA관련 실험에 대해 이해한다. 외부 DNA를 E.coli에 도입시켜 형질전환이 이루어지게 하면 이 세포들은 기존에 갖고 있던 chromosomal DNA 뿐만 아니라 plasmid DNA도 갖고 있게 된다. 특정한 DNA를 확보하고 싶을 때, 그 plasmid DNA를 숙주세포에 도입한 후, 따로 분리해내면 원하는 것을 얻을 수 있다. 이 실험에서 Ampicillin이 포함된 LB배지에서 키운 형질전환된 Ampicillin 저항성 E.coli를 이용하여 특정한 plasmid DNA를 얻는다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) Ampicillin이 포함된 LB배지에.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 9. 24.

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  일반생물학실험 | 수정란의 관찰 TIP 포유류에 가장 유사한 발생과정을 가지는 조류 수정란의 방생과정을 관찰하여 척추동물의 발생을 학습한다. 배막과 태반 배막은 동물의 배 발생시 배를 싸고 있는 막으로 배조직의 일부가 막상으로 늘어난 것이다. 배체의 주위를 싸고 그것을 보호하거나 배조직의 호흡과 배출 등에 관계되는 양막 ·장막 ·요막이 그 대표적이고, 그 밖에 난황낭도 배막에 포함시킬 수 있다. 양막 ·장막의 일부가 관여하여 만들어지는 태반(포유류인 경우)도 또한 넓은 뜻에서 배막에 포함시킬 수 있다. 반면 태반은 태아와 모체에서 유래한 조직으로부터 형성되며, 태아와 모체 사이의 물질교환이 일어난다. 수란관 상부에서 수정된 수정란은 난할을 하면서 자궁으로 이동하여 포배상태로 자궁 내벽에 착상하게 된다. 착상한 수정란은 배발생을 진행하여.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 9. 23.

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  병원미생물학실험 | Herpesvirus의 Plaque assay Plaque assay 1952년 Renato Dulbecco는 plaque assay를 응용하여 bacterial virus stock의 titer를 측정하는 방법을 최초로 개발하였다. Plaque란 바이러스감염에 의하여 세포 변성을 일으킨 단층세포부위로서, plaque 주위의 감염되지 않은 정상세포는 vital dye로 염색되므로 구별된다. 각 세균마다 특징적인 colony가 만들어지듯이 각 바이러스마다 크기와 모양이 다른 특징적인 plaque가 생성된다. 한 개의 감염성이 있는 바이러스입자는 하나의 plaque를 형성한다는 이론 하에 plaque counting은 각종 바이러스의 정량에 응용되었으며, Dulbecco는 1975년 노벨 생리학상을 받음으로서 plaque assay의 중요성이 입증되기도.. Biology/미생물학 2022. 9. 17.

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  일반생물학실험 | DPPH 항산화 실험 TIP 시료의 항산화력을 측정해 본다. 활성 산소 우리가 호흡하는 산소와는 완전히 다르게 불안정한 상태에 있는 산소이다. 환경오염과 화학 물질, 자외선, 혈액순환장애, 스트레스 등으로 산소가 과잉생산된 것이다. 이렇게 과잉생산된 활성산소는 사람 몸속에서 산화작용을 일으킨다. 이렇게 되면 세포막, DNA, 그 외의 모든 세포 구조가 손상당하고 손상의 범위에 따라 세포가 기능을 잃거나 변질된다. 실험 방법 1. 각 용액 사전 자리배치 용액을 담기전 미리 자리를 배치해두면 실험 중에 용액이 섞이는 것을 방지할 수 있고 용액 들을 담고나서도 각 칸에 어떤 용액이 담겼는지 쉽게 확인이 가능하다. DPPH 시료A + DPPH 시료A blank 시료B + DPPH 시료B blank 시료C + DPPH 시료C blan.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 9. 7.

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  생화학실험 | RNA 추출 & cDNA 합성 TIP 세포에서 직접 RNA를 추출하여 보고, 추출된 RNA를 이용하여 cDNA를 합성하여 RT-PCR을 통해 특정 유전자의 mRNA 발현량을 비교한다. Chloroform의 역할 RNA extraction을 할 때 페놀계열 lysis buffer를 쓰게 되는데, 이후 chloroform을 넣어줌으로써 RNA가 녹아있는 수층의 페놀을 제거하여 RNA의 순도를 높여준다. pH4 정도로 낮을 때 RNA는 물과 함께 섞여있으므로 물에 남아있을 수 있는 페놀을 chloroform에 녹아들게끔 해주는 것이다. 또한 chloroform은 비극성용매여서 물에 잘 녹지 않으므로 층분리가 이루어지게 된다. 실험 방법 1. RNA extraction 1) 500㎕ RiboEx를 넣은 sample에 chloroform 10.. Biology/생화학 2022. 9. 4.

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  일반생물학실험 | Observe the mitotic chromosome of animal cells TIP 두 가지 방법을 통해 동물세포의 유사분열 염색체를 관찰할 수 있다. 유사분열이란, 유전체 양의 변화가 없는 세포분열이며 이 과정에서 방추사가 생기고 염색체가 나타나는 핵분열의 한 형식으로 간접분열이라고도 한다. 유사분열은 전기, 중기, 후기, 말기로 이루어진다. 유사분열이 일어나기 전 간기에는 느슨한 형태의 풀어진 염색체가 존재한다. 전기는 초기와 후기로 나뉘는데 전기의 초기에는 핵이 4개의 염색체를 가지고 있는 모습이며 염색체는 2가닥으로 갈라진 모습을 하고 있는데 한 가닥을 염색분체라고 한다. 전기의 후기에는 각각의 염색체가 염색분체를 2개씩 복제하며 방추체의 구조가 만들어지며 전기과정에서 핵막이 파괴되며 느슨한 염색체의 응축이 일어난다. 중기과정에서는 염색체들이 방추체의 중심을 따라 줄지어 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 9. 3.

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  일반생물학실험 | 빛을 이용한 에너지 전환반응 - 광합성 TIP 지구생태계를 유지하는 광합성반응에 대해 이해하고 식물 잎에서 일어나는 광합성 반응을 빛이 있는 조건과 빛이 없는 조건에서 직접 관찰하여 빛과 광합성의 관계에 대해 확인해본다. 광합성은 녹색식물이 빛에너지를 이용하여 CO2와 물로부터 유기화합물을 생성하는 과정이며 이 과정은 녹색식물에 의해 빛에너지가 화학에너지로 전환되는 것을 의미한다. 실험 방법 1. 빛과 광합성 1) 건강한 녹색 식물(아이비)을 48시간 동안 암실에 놓아둔다. 2) 48시간 후 호일로 빛 차단막을 잎의 일부에 씌워 빛에 24시간 노출시준다.(1), 2)과정을 거친 식물과, 1)과정만 거친 식물이 준비되어 있다.) 3) 빛을 비춰준 식물과 암처리 해준 식물을 구별하여 각 식물의 잎을 떼어낸다. (암처리한 식물은 상자에서 꺼내 잎을.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 8. 31.

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  미생물학실험 | Gram-Stain TIP 여러 미생물을 가지고 그람염색을 해본 후 그람음성도에 따라 분류 해 보자. Gram-Stain 세균이나 효모를 동정하고 분류하는 염색 방법으로 1884년 덴마크의 의사 한스 크리스찬 그람이 고안했다. 세균은 그 고정 표본을 Crystal violet, gention violet으로 염색하고, lugol solution으로 처리 한 후 순 에틸 알코올로 탈색조작 하였을 때 탈색되지 않는 균군(gram양성균)과 탈색되는 균군(gram음성균)으로 구별된다. 계속하여 옅은 safaradine sol또는 fuchisin sol로 대비염색하면 전자는 그대로 자색, 후자는 후염색에 의해 적색으로 염색된다. 이것은 세포표면 특히, 세포벽의 화학구조의 차이에 의한 것이다. 그람양성균과 그람 음성균 사이에서 화학적.. Biology/미생물학 2022. 8. 2.

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  미생물학실험 | 그람 염색법 TIP 분별염색 기법의 한 종류인 그람염색 방법을 익히고 그람염색 방법의 원리를 알 수 있다. 그람양성균과 그람음성균을 구분할 수 있다. 그람염색법은 미생물을 관찰하기 위해 사용하는 염색법이다. 그람염색은 미생물의 세포벽을 구성하는 특정구조와 화학반응을 일으켜 염색이 이루어지는데, 세포벽에 그람염색과 반응하는 화학구조를 갖는 미생물을 그람양성, 그렇지 못한 것을 그람음성으로 분류한다. 그람염색법을 통해 미생물을 분류할 수 있다. 그람염색(Gram staining)의 원리는 분별염색(differential staining)이다. 분별염색은 세균의 식별을 용이하게 하기 위하여 2가지 이상의 생물학적 염료(biological dye)를 사용하는 염색방법이다. 분별염색 기법은 특정 세포구조물을 염색하기 위해 사.. Biology/미생물학 2022. 8. 1.

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  생명과학실험 | Gram Staining TIP 1. 그람 염색의 화학적, 이론적 기초를 파악하고 그람 양성과 음성의 박테리아를 구분할 수 있다. 2. 그람염색을 통해 미생물을 그람양성과 그람음성으로 분류한다. 그람염색을 통해 미생물을 분류할 수 있다. 그람염색법의 원리 그람 염색을 하기 위해선 관찰하고 싶은 세포에 염색액을 묻힌 후 요오드용액처리를 한다. 그 후 에탄올로 세포를 씻게 되면 조직은 탈색되지만 균은 탈색되지 않고 자주색(염색액의 색)으로 보이게 된다. 자주색으로 균이 보이게 되기 때문에 그람염색법을 이용하여 균을 관찰할 수 있었다. 하지만 에탄올 처리 과정에서 특정균의 경우에는 탈색되는 경우가 있다. 그래서 그람염색을 할 때 에탄올 처리 과정에서 탈색 되지 않는 세균을 그람 양성균이라 하고 탈색되는 균을 그람 음성균 이라고 한다... Biology/생명 과학 | 공학 2022. 7. 30.

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  일반생물학실험 | 그람 염색 TIP 순수배양한 미생물을 동정하기 위해 그람염색을 한다. 양성·음성균은 화학요법제에 대한 감수성뿐만 아니라 균의 증식에 필요한 영양소의 종류, 물리·화학적 자극에 대한 반응, 생산하는 독소, 병변 등 각 방면에서 차이가 있기 때문에, 양성·음성을 구분해 순수배양한 미생물을 이용할 때 필요한 정보를 알 수 있다. 그람 염색 1884년 덴마크의 의사 Gram이 고안한 특수 염색법으로, 표본을 크리스탈 바이올렛으로 물들여서 아이오딘·아이오딘화 칼륨액으로 처리한 후, 순에탄올로 씻으면, 조직은 탈색되지만 균은 탈색되지 않고 자주색으로 보인다. 그러나 그 후 여러 가지 균종이 발견되자 그 속에는 조직과 마찬가지로 에탄올 세정에 의하여 탈색되는 균도 있다는 것이 밝혀졌다. 이때 탈색되는 균을 그람음성균, 탈색되지.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 7. 30.

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  미생물학실험 | 미생물의 염색 TIP 세균을 분별염색(differential staining) 하게 되면 그람양성균인지 그람음성균인지에 따라 서로 다른 색을 띄게 된다. 나타나는 색의 차이를 통해서 세균을 동정, 분류하고 구조적 차이에 대해서 이해한다. 세포벽은 삼투압이나 외부의 자극으로부터 세포를 지키는 역할을 한다. 종마다 가지고 있는 세포벽의 종류가 다른데 진정세균은 세포벽으로 펩티도글리칸층(N-acetylglucosamin과 N-acetylmuramic acid의 beta-1,4,결합)을 가지고 있다. 그람양성균과 그람음성균 모두 펩티도글리칸층을 가지지만 그 두께에 있어서 차이가 있다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 스포이드를 이용하여 슬라이드 글라스 위에 3차 증류수 1～2 방울 정도를 떨어트린다. 2) 백금이를 화염멸균하.. Biology/미생물학 2022. 7. 30.

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  일반생물학실험 | 그람 염색법 계통분류학(systematics)은 생물들의 다양성과 그들의 유연관계를 연구하는 학문이다. 계통분류학은 계통학과 생물의 특성을 규명하고 이름을 부여하며 자연적인 유연관계에 따라 그룹으로 배치하는 분류학을 함께 연계한다. 이 때 대상 생물의 형태적, 생태적, 생리적, 분자생물학적 특징을 종합하여 종을 판별하는 것을 동정이라고 부른다. 한편 세균을 동정할 때 세균은 세포의 모양에 따라 구균, 간균, 나선균 등으로 나누기도 하지만, 본 실험에서는 그람 염색법을 이용하여 세균의 형태학적인 차이에 근거해 세균을 그람 양성균과 그람 음성균으로 분류하고자 하였다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 준비된 대장균과 고초균 sample을 각각의 이름을 labeling한 슬라이드글라스에 도말하였다. 2) 실온에서 약 5분간.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 7. 29.

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  미생물학실험 | 그람염색법 그람염색은 세균의 형태, 크기, 배열, 그람 염색상에 따라 세균을 분류하는데 가장 흔히 이용하는 염색 방법으로서 병인균의 신속한 예비 보고와 검체 질 평가에도 유용하게 사용된다. 그람염색법은 1884년 덴마크의 의사 H.C.J.그람(1853∼1938)이 고안한 특수 염색법으로, 표본을 아닐린수(水)·겐티아나액(液)으로 물들여서 요오드·요오드화 칼륨액으로 처리한 후, 순(純)에탄올로 씻으면, 조직은 탈색되지만 균은 탈색되지 않고 자주색으로 보인다. 그러나 그 후 여러 가지 균종이 발견되자 그 속에는 조직과 마찬가지로 에탄올 세정에 의하여 탈색되는 균도 있다는 것이 밝혀졌다. 이때 탈색되는 균을 그람음성균, 탈색되지 않는 균을 그람양성균이라 부르기로 하면서 이 염색법은 당초의 목표와는 달리 세균의 분류에 이.. Biology/미생물학 2022. 7. 27.

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  일반생물학실험 | Gram Staining 그람 염색법은 1884년 Hans Christian Gram에 의해서 처음으로 개발된 방법으로 각종 검체 및 배양집락의 현미경적 검사에 이용되며 미생물에 의한 감염여부를 조기에 진단할 수 있게 해준다. 이 실험은 그램 염색을 통해서 세포벽의 두꺼운 정도를 알 수 있고 또한 이 실험 방법은 박테리아 분류의 한 방법이기도 하다. 미생물은 다양한 방법으로 분류된다. 즉, 미생물의 형태나 모양에 따라 분류하기도 하지만 미생물이 생존할 수 있는 온도, 수소이온농도(pH), 수분활성도 범위에 따라 분류하기도 한다. 또 미생물은 이용하는 에너지원, 산소의 존재유무, 포자생성방법, 그리고 염색에 의해서도 분류하며, 이러한 분류는 특정목적에 맞게 임의적으로 사용된다. 이번 실험을 통해 Gram staining의 원리에 .. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 7. 27.

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  미생물학실험 | 멸균 미생물은 거의 모든 곳에 존재한다. 이러한 미생물을 물리적, 화학적 처리하여 멸살하는 일을 살균이라 하는데 살균은 정도에 따라 모든 생산물의 표면과 내부의 모든 미생물과 바이러스를 제 거하는 일인 멸균, 물질들의 안이나 위에 있는 대부분 혹은 모든 병원균을 제거하는 과정인 소독 으로 구별한다. 미생물학 실험에 앞서 미생물을 제대로 멸균하지 않으면 실험도구를 오염시켜 결 과에 영향을 미칠 수 있다. 따라서 멸균은 기초적이면서도 매우 중요한 과정이라 할 수 있다. 본 실험에서는 물리적 처리 중 가장 일반적인 방법인 열처리에서 건열 멸균법과 습열 멸균법, 화염멸균법의 특징을 이해하고 방법을 숙지해 직접 과정을 진행해 봄으로서 미생물을 열처리하여 사멸시키는 법을 익히고 멸균 전후의 실험도구와 영양배지의 결과물을.. Biology/미생물학 2022. 7. 26.

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  일반생물학실험 | Gram Staining 세균의 염색 방법에는 4가지 방법이 있다. Simple staining, Gram staining, Spore staining, Capsule staining이 있다. 세균의 단순한 모양과 크기만을 아는 게 아니라 그 세균이 Gram positive인지 Gram negative인지를 알 수 있는 방법인 Gram staining을 실험에 사용했다. Gram staining은 1884년 덴마크의 미생물학자인 Christian gram에 의해서 고안된 Differential staining으로 세균은 두 그룹으로 나눠 준다. 염색 과정을 거쳐서 나오는 균들의 색깔을 보고 Gram positive, Gram negative 이 두 가지로 나눠 주는 것이 Gram staining 이다. 실험 방법 1. Gram .. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 7. 26.